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BJ5183 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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BJ5183 Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

BJ5183；BJ5183-AD-1；pAdeasy-1；pAdeasy-2；腺病毒系统；卡那霉素；链霉素；

 

产品订购： 更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。

货号

产品名称

规格

价格（元）

    MF2318-1000UL

BJ5183 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

  10×100μl

400

MF2318-5000UL

BJ5183 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

50×100μl

1720

产品组分：

组分编号

 组分名称

货号（规格）

MF2318–1000UL

MF2318–5000UL

MF2318-A

 BJ5183 Chemically Competent Cell 10×100μl

50×100μl
MF2318-B Control Vector puC19, 10pg/μl 10μl

10μl

 

菌株描述

BJ5183菌株是一种具较高重组活力的大肠杆菌菌株，提供了转移载体和含腺病毒基因组载体之间发生重组事件必要的元件，是目前腺病毒系统最常用的菌株之一。BJ5183菌株含recBC sbcBC双重突变，赋予其较强的重组能力，有利于目的基因与腺病毒质粒（pAdeasy-1或pAdeasy-2）的重组。另外，BJ5183菌株含endA突变（编码核酸内切酶），这一突变赋予recBC sbcBC突变菌株更高的双链断裂修复活性，也有利于重组DNA的稳定和高纯质粒的提取。StrR赋予BJ5183菌株链霉素抗性。

BJ5183菌株基因型：endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR)

 

产品描述

本品是大肠杆菌BJ5183菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19载体检测转化效率可达>5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存（避免温度波动），不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2） 最好在冰上缓慢融化感受态细胞。不可在冰上放置时间过长，否则会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

5） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

6） 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

7） BJ5183菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后，可选择在其它大肠杆菌菌株中扩繁和纯化质粒。

8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的质粒（含有目的基因并且是线性化）和腺病毒质粒，用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吹打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加入700 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，之后倒置放于37℃过夜培养。

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MF2319-1000UL BJ5183-AD-1 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade 氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt 氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 10g
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MF2001-1G X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷 1g
MF2002-1G IPTG 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

  

 

SURE Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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描述

SURE Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

SURE；SURE-2；Stbl3；Stable；Direct repeats 正向重复片段；Retroviral sequences 逆转录病毒序列；Stratagene;

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。

货号 产品名称 规格 价格（元）
MF2326-1000UL SURE Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl 410
MF2326-5000UL SURE Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1730

 

产品组分：

组分编号 组分名称

货号（规格）
MF2316-1000UL    MF2316-5000UL   
MF2326-A    SURE Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2326-B Control Vector puC19, 10 pg/µl      10μl 10μl

 

菌株描述

SURE菌株是Agilent (Stratagene)公司开发，特别设计用于克隆在传统的大肠杆菌菌株中“无法克隆”的某些DNA片段。SURE菌株破坏了重组酶系统整条通路上的组分，这些组分能催化重组和删除体内的非标准二级和三级结构，包括十字形（由反向重复序列引起）和Z字形的DNA，经常出现在真核生物DNA中，能阻止真核DNA克隆进入传统大肠杆菌菌株中。SURE含限制缺陷（McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-），使其无法对外源DNA进行标记和限制，从而提高外源甲基化DNA的克隆效率。也含内切酶缺陷（endA），和重组缺陷（recB recJ），提高了外源DNA的稳定性。存在于F´因子上的lacIqZΔM15使菌株适用于蓝白斑。菌株本身含卡那霉素（KanR）和四环素（TetR）特性。

SURE菌株基因型：e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)].

产品描述

本品是SURE菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低最终用于涂板的菌量。

5）   菌株本身含卡那霉素和四环素特性，携带此两种抗性的质粒不适合克隆到SURE细胞。当携带抗霉素抗性基因（CamR）的质粒转化进入SURE细胞，使用添加100μg/ml氯霉素的LB固体平板来筛选克隆子。SURE细胞本身能耐受＜40μg/ml氯霉素，但对100μg/ml 氯霉素很敏感。

6）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

7）   采用常规操作流程转化SURE感受态细胞，转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。若是对转化效率要求更高，可使用标准操作流程。

8）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。

9）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常规操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）   从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。

2）   向融化的感受态细胞中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用手轻弹混匀（避免用移液枪上下吹打），冰浴静置25-30min。

3）   42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4）  向每个离心管中加入900 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5）  5000rpm离心1min，吸走900 μl上清，留取100μl左右轻轻吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。

【注意】：a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可将所有转化产物涂布平板。b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

标准操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）   冰上提前预冷14ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管， 42℃预热SOC培养基。

2）   从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。用手轻弹混匀吸取100 μl细胞到预冷的14ml离心管内。

3）   加1.7μl β-ME（1.42M）到细胞内。【β-ME能提高转化效率】

4）   轻弹管子。置于冰上孵育10min，每2min轻弹混匀细胞一次。

5）   往细胞内加入0.1-50ng目的DNA，轻弹混匀细胞，冰上静置孵育30min。

6）   42℃热激45s，热激过程的持续性非常重要。冰上静置2min，此过程不要摇动离心管。

6）  向每个离心管中加入900 μl预热的无菌SOC培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，225-250 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

7）  吸取≤200 µl 转化菌液，加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上（若需要颜色反应，平板含IPTG+ X-gal），用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。【注意：若是进行蓝白斑筛选，37℃至少培养17h，使得颜色能生成。另外将平板置于4℃孵育2h，能加强颜色反应。】

 

附表1 固体和液体LB培养基配方

组分Component LB（液体）/升      LB（固体）/升   
胰蛋白胨Tryptone 10g 10g
酵母提取物Yeast extract       5g 5g
氯化钠NaCl 10g 10g
1N NaOH 调整pH至7.0 调整pH至7.0
琼脂Agar / 15g

附表2 固体和液体2-YT培养基配方

组分Component 2YT（液体）/升     2YT（固体）/升   
胰蛋白胨Tryptone 16g 16g
酵母提取物Yeast extract    10g 10g
NaCl 5g 5g
1N NaOH 调整pH至7.0 调整pH至7.0
琼脂Agar / 15g

 

 

 

SURE Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

发表于由

描述

SURE Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

SURE；SURE-2；Stbl3；Stable；Direct repeats 正向重复片段；Retroviral sequences 逆转录病毒序列；Stratagene;

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。

货号 产品名称 规格 价格（元）
MF2326-1000UL SURE Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl 410
MF2326-5000UL SURE Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1730

 

产品组分：

组分编号 组分名称

货号（规格）
MF2316-1000UL    MF2316-5000UL   
MF2326-A    SURE Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2326-B Control Vector puC19, 10 pg/µl      10μl 10μl

 

菌株描述

SURE菌株是Agilent (Stratagene)公司开发，特别设计用于克隆在传统的大肠杆菌菌株中“无法克隆”的某些DNA片段。SURE菌株破坏了重组酶系统整条通路上的组分，这些组分能催化重组和删除体内的非标准二级和三级结构，包括十字形（由反向重复序列引起）和Z字形的DNA，经常出现在真核生物DNA中，能阻止真核DNA克隆进入传统大肠杆菌菌株中。SURE含限制缺陷（McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-），使其无法对外源DNA进行标记和限制，从而提高外源甲基化DNA的克隆效率。也含内切酶缺陷（endA），和重组缺陷（recB recJ），提高了外源DNA的稳定性。存在于F´因子上的lacIqZΔM15使菌株适用于蓝白斑。菌株本身含卡那霉素（KanR）和四环素（TetR）特性。

SURE菌株基因型：e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)].

产品描述

本品是SURE菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低最终用于涂板的菌量。

5）   菌株本身含卡那霉素和四环素特性，携带此两种抗性的质粒不适合克隆到SURE细胞。当携带抗霉素抗性基因（CamR）的质粒转化进入SURE细胞，使用添加100μg/ml氯霉素的LB固体平板来筛选克隆子。SURE细胞本身能耐受＜40μg/ml氯霉素，但对100μg/ml 氯霉素很敏感。

6）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

7）   采用常规操作流程转化SURE感受态细胞，转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。若是对转化效率要求更高，可使用标准操作流程。

8）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。

9）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常规操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）   从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。

2）   向融化的感受态细胞中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用手轻弹混匀（避免用移液枪上下吹打），冰浴静置25-30min。

3）   42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4）  向每个离心管中加入900 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5）  5000rpm离心1min，吸走900 μl上清，留取100μl左右轻轻吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。

【注意】：a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可将所有转化产物涂布平板。b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

标准操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）   冰上提前预冷14ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管， 42℃预热SOC培养基。

2）   从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。用手轻弹混匀吸取100 μl细胞到预冷的14ml离心管内。

3）   加1.7μl β-ME（1.42M）到细胞内。【β-ME能提高转化效率】

4）   轻弹管子。置于冰上孵育10min，每2min轻弹混匀细胞一次。

5）   往细胞内加入0.1-50ng目的DNA，轻弹混匀细胞，冰上静置孵育30min。

6）   42℃热激45s，热激过程的持续性非常重要。冰上静置2min，此过程不要摇动离心管。

6）  向每个离心管中加入900 μl预热的无菌SOC培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，225-250 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

7）  吸取≤200 µl 转化菌液，加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上（若需要颜色反应，平板含IPTG+ X-gal），用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。【注意：若是进行蓝白斑筛选，37℃至少培养17h，使得颜色能生成。另外将平板置于4℃孵育2h，能加强颜色反应。】

 

附表1 固体和液体LB培养基配方

组分Component LB（液体）/升      LB（固体）/升   
胰蛋白胨Tryptone 10g 10g
酵母提取物Yeast extract       5g 5g
氯化钠NaCl 10g 10g
1N NaOH 调整pH至7.0 调整pH至7.0
琼脂Agar / 15g

附表2 固体和液体2-YT培养基配方

组分Component 2YT（液体）/升     2YT（固体）/升   
胰蛋白胨Tryptone 16g 16g
酵母提取物Yeast extract    10g 10g
NaCl 5g 5g
1N NaOH 调整pH至7.0 调整pH至7.0
琼脂Agar / 15g

 

 

 

HT115(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

发表于由

描述

HT115(DE3) Chemically Competent Cell  大肠杆菌化学感受态细胞

 

产品标签：

HT115(DE3)；RNAi feeding strain RNA干扰喂养菌株；线虫RNAi；Nematode Growth Medium (NGM)线虫培养基；C. elegans秀丽隐杆线虫；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。网站：www.maokangbio.com。

货号 产品名称 规格 价格（元）
MF2488-1000UL HT115(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl 396
MF2488-5000UL HT115(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1696

 

菌株描述

HT115(DE3)菌株是一种RNAi饲养菌株，具四环素抗性，能在37℃，LB培养基上进行有氧生长。主要用于线虫的干扰实验。

HT115(DE3)菌株是一种特殊的RNase III缺陷型大肠杆菌菌株，此菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因，在IPTG的诱导下表达T7 RNA聚合酶，进而启动线虫dsRNA的表达），除了用于线虫RNAi干扰实验，也适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白表达。

 

HT115(DE3)菌株基因型：E. coli [F-, mcrA, mcrB, IN(rrnD-rrnE)1, rnc14::Tn10(DE3 lysogen: lavUV5 promoter -T7 polymerase) (IPTG-inducible T7 polymerase) (RNAse III minus) ]

 

产品描述

本品是大肠杆菌HT115(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

产品包装

组分编号 组分名 货号（规格）
MF2488-1000UL MF2488-5000UL
MF2488-A HT115(DE3) Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2488-B Control Plasmid puC19,10pg/μl 10μl 10μl

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。

2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7） 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~10mM。

8） 为了进行干扰质粒中dsRNA的生成，HT115(DE3)菌株需在特殊的RNAi NGM（Nematode Growth Media）平板上培养，添加有IPTG和氨苄（50µg/ml）或羧苄（25µg/ml）抗生素，倾向于用羧苄应其更稳定。

9） 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

10） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取50μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。

 

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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附录I 蛋白诱导步骤（仅作参考）

1）从新鲜涂布平板上挑取一单克隆，转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。

2）37℃，200rpm摇菌培养过液。

3）将步骤2）中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内（建议使用500ml三角瓶培养）。

4）37℃，150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8（建议0.6，约2.5h）。

5）【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内，置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5）加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h，依蛋白而异。

6）37℃，120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间，建议作一个时间周期优化实验，范围从2~16h。

7）将培养物冰浴10min。4℃，5,000 x g离心10min收集菌株。

8）吸掉上清，将沉淀保存在-20℃（也能保存在更低的温度）。

 

IPTG母液（1M）配制

称量2.38g IPTG（Mw: 238.30）溶于适量去离子水，充分溶解后，调整终体积到10ml，并过滤除菌，即得到1M ITPG母液。

 

 

                

JM109(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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大肠杆菌化学感受态细胞

 

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货号                            产品名称 规格              价格（元）       
MF2487-1000UL                JM109(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞      10×100μl 396
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MF2487-A JM109(DE3) Chemically Competent Cell                   10×100μl 50×100μl
MF2487-B Control Vector puC19,10pg/μl          10μl 10μl

菌株描述

JM109(DE3)菌株，来源于JM109，含有T7 RNA聚合酶表达基因，整合在其染色体上，故称为JM109(DE3)。如果克隆至载体上的基因包含核糖体结合位点，JM109(DE3)则能对位于T7启动子下游的基因进行高水平的表达。JM109(DE3)能同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，适用于pET，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。JM109(DE3)菌株不可用于蓝白斑筛选。

JM109(DE3)菌株基因型：endA1, recA1, gyrA96, thi, hsdR17 (rk–, mk+), relA1, supE44, λ–, Δ(lac-proAB), [F´, traD36, proAB, lacIqZΔM15], lDE3

产品描述

本品是大肠杆菌JM109(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率高于108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。
  2. 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
  3. 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
  4. 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
  5. 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
  6. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
  7. 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~2mM。
  8. 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。
  2. 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。【注意】：

    a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

    c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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菌株描述

JM109(DE3)菌株，来源于JM109，含有T7 RNA聚合酶表达基因，整合在其染色体上，故称为JM109(DE3)。如果克隆至载体上的基因包含核糖体结合位点，JM109(DE3)则能对位于T7启动子下游的基因进行高水平的表达。JM109(DE3)能同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，适用于pET，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。JM109(DE3)菌株不可用于蓝白斑筛选。

JM109(DE3)菌株基因型：endA1, recA1, gyrA96, thi, hsdR17 (rk–, mk+), relA1, supE44, λ–, Δ(lac-proAB), [F´, traD36, proAB, lacIqZΔM15], lDE3

产品描述

本品是大肠杆菌JM109(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率高于108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。
  2. 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
  3. 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
  4. 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
  5. 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
  6. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
  7. 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~2mM。
  8. 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。
  2. 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。

    【注意】：

    a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

    c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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描述

Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell  

大肠杆菌化学感受态细胞

搜索关键词：

EPI400；EC100；CopyCutter Induction Solution；toxic or unstable DNA毒性或不稳定DNA；Epicentre；

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货号 产品名称 规格 价格（元）
MF2486-1000UL   Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell     10×100μl    396
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【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

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组分编号 组分名称 货号（规格）
MF2486-1000UL    MF2486-5000UL   
MF2486-A   Rosetta 2(DE3) Competent Cell   10×100μl 50×100μl
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菌株描述

Rosetta 2宿主菌是BL21衍生菌，特别设计用于提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达水平，这些菌株补充7种大肠杆菌缺乏的稀有密码子（AGA, AGG, AUA, CUA, GGA, CCC, CGG）对应的tRNA，位于兼容的氯霉素抗性质粒上。tRNA基因由天然启动子所启动。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因）。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产，由IPTG诱导表达。 

Rosetta 2(DE3)菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE2 (CamR)

产品描述

本品是大肠杆菌Rosetta 2(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。最好在冰上融化感受态细胞。
  2. 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
  3. 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
  4. 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
  5. Rosetta 2(DE3)菌株携带pRARE2质粒，除复苏培养基无抗生素外，其余培养基（液）都应含氯霉素（34μg/ml），以防质粒丢失。
  6. 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~10mM。
  7. 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 将感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化后，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀（避免用移液枪吹打），冰浴静置25min。
  2. 42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加入700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。

    【注意】：

    a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

     

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MF2490-1000UL ArcticExpress(DE3)pRARE2 Chemically Competent Cell化学感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
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Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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货号 产品名称 规格 价格（元）
MF2486-1000UL   Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell     10×100μl    396
MF2486-5000UL Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell 50×100μl 1696

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产品组分：

组分编号 组分名称 货号（规格）
MF2486-1000UL    MF2486-5000UL   
MF2486-A   Rosetta 2(DE3) Competent Cell   10×100μl 50×100μl
MF2486-B Control Vector puC19, 10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

Rosetta 2宿主菌是BL21衍生菌，特别设计用于提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达水平，这些菌株补充7种大肠杆菌缺乏的稀有密码子（AGA, AGG, AUA, CUA, GGA, CCC, CGG）对应的tRNA，位于兼容的氯霉素抗性质粒上。tRNA基因由天然启动子所启动。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因）。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产，由IPTG诱导表达。 

Rosetta 2(DE3)菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE2 (CamR)

产品描述

本品是大肠杆菌Rosetta 2(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。最好在冰上融化感受态细胞。
  2. 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
  3. 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
  4. 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
  5. Rosetta 2(DE3)菌株携带pRARE2质粒，除复苏培养基无抗生素外，其余培养基（液）都应含氯霉素（34μg/ml），以防质粒丢失。
  6. 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~10mM。
  7. 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 将感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化后，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀（避免用移液枪吹打），冰浴静置25min。
  2. 42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加入700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。

    【注意】：

    a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

     

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MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

 

 

F-DH5a?Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

发表于由

描述

F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

F-DH5a；F-TOP10；DH10B；JM109；EPI400；羧苄青霉素钠；卡那霉素；链霉素；

 

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货号 产品名称 规格 价格（元）  
MF2348-2000UL    F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞  20×100μl      280
MF2348-10000UL F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 100×100μl 1280

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产品组分：

组分编号     

组分名称

货号（规格）

MF2348-2000UL    

MF2348-10000UL   
MF2348-A F-DH5a Competent Cell 20×100μl 100×100μl
MF2348-B Control Vector puC19, 10pg/μl     10μl 10μl

 

菌株描述

DH5α是实验室最常用的一种质粒克隆用菌株，其φ80lacZ△M15基因的产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。特别适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

DH5a菌株基因型：F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

 

产品描述

本品是大肠杆菌DH5a菌株经特殊工艺制作所得的快速转化感受态细胞，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内能完成转化、涂板步骤。经pUC19质粒检测转化效率可达1~5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。在冰上融化后立即加入目标DNA，不可在冰上放置时间过长。长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时需轻柔操作。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

一、  快速转化操作（10min）

1.1    提前15min将用到的筛选培养平板拿到37℃预热。

1.2    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置5min。

1.3    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB筛选培养平板上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，表面无水渍。

1.4    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，至少培养15h。

【注意】：F-DH5a感受态细胞涂含氨苄或羧苄筛选培养平板时效率最高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率会下降（由于没有孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大）。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，按照快速热激转化操作。

二、  快速热激转化操作（25min，能提高转化效率）

2.1    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置5min。

2.2    42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。 此过程不要摇动离心管。

2.3    加入700μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养10min。

2.4    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB培养平板（含抗生素）上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，表面无水渍。

2.5    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，至少培养15h。

【注意】：当质粒＞7kb，通过以下热激转化操作：取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置20min。

42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。加入700μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养30min。之后涂板。

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MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

 

 

F-DH5a?Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

发表于由

描述

F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

F-DH5a；F-TOP10；DH10B；JM109；EPI400；羧苄青霉素钠；卡那霉素；链霉素；

 

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货号 产品名称 规格 价格（元）  
MF2348-2000UL    F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞  20×100μl      280
MF2348-10000UL F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 100×100μl 1280

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组分编号     

组分名称

货号（规格）

MF2348-2000UL    

MF2348-10000UL   
MF2348-A F-DH5a Competent Cell 20×100μl 100×100μl
MF2348-B Control Vector puC19, 10pg/μl     10μl 10μl

 

菌株描述

DH5α是实验室最常用的一种质粒克隆用菌株，其φ80lacZ△M15基因的产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。特别适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

DH5a菌株基因型：F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

 

产品描述

本品是大肠杆菌DH5a菌株经特殊工艺制作所得的快速转化感受态细胞，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内能完成转化、涂板步骤。经pUC19质粒检测转化效率可达1~5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。在冰上融化后立即加入目标DNA，不可在冰上放置时间过长。长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时需轻柔操作。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

一、  快速转化操作（10min）

1.1    提前15min将用到的筛选培养平板拿到37℃预热。

1.2    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置5min。

1.3    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB筛选培养平板上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，表面无水渍。

1.4    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，至少培养15h。

【注意】：F-DH5a感受态细胞涂含氨苄或羧苄筛选培养平板时效率最高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率会下降（由于没有孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大）。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，按照快速热激转化操作。

二、  快速热激转化操作（25min，能提高转化效率）

2.1    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置5min。

2.2    42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。 此过程不要摇动离心管。

2.3    加入700μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养10min。

2.4    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB培养平板（含抗生素）上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，表面无水渍。

2.5    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，至少培养15h。

【注意】：当质粒＞7kb，通过以下热激转化操作：取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置20min。

42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。加入700μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养30min。之后涂板。

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MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

 

 

NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

发表于由

描述

NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

温馨提示

见我司整理的酵母双杂交（Yeast two-hybrid assay）产品专题。

产品关键词：

Y190-GAL4酵母单杂交系统；Y1HGold；pGBKT7；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

 

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货号 产品名称 规格             价格（元） 
MF2360-1000UL     NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞      10×100μl 290
MF2360-5000UL NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 50×100μl 1320

 

产品组分：

组分编号           组分名称 保存              

货号（规格）
MF2360-1000UL    MF2360-5000UL  
MF2360-A NMY51Chemically Competent Cell     -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2360-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80℃ 10μl   10μl  
MF2360-C Carrier DNA (10μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2360-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml

 

产品描述

双膜系统（Dualmembrane system）是由Dualsystems Biotech公司开发的专门筛选跨膜蛋白间相互作用的筛选技术，该技术利用分离的泛素系统直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用，是目前为止唯一用来检测膜蛋白间相互作用的酵母双杂交系统。

双膜系统利用NMY51酵母菌，能直接转化质粒进行蛋白突变验证或筛库实验。转化标志为TRP1，leu2-3。报告基因为HIS3，ADE2和LacZ。NMY51的选择性生长筛选通过营养缺陷报告基因（HIS3，ADE2）进行，之后通过LacZ报告基因进行β-半乳糖分析的定量或半定量筛选，三个独立的报告基因由不同的启动子调控，有助于降低假阳性几率。

双膜系统的工作原理在于：泛素分子量很小，由76个氨基酸残基组成。泛素作为降解信号分子，能够连接另一个蛋白的N端，之后被泛素专一性蛋白酶（ubps）识别，导致与泛素相连蛋白被酶降解。泛素可人为分成两个部分：N端（Nub）和C端（Cub）。首先，将泛素Nub的三位异亮氨酸突变成甘氨酸（Nubi突变为NuBG），通过这种方式Cub的亲和力明显降低，避免Cub和Nub自我结合或靠近的可能性。其次，Cub与合成的LEXA-VP16转录激活因子融合成融合蛋白Cub-lexa-vp16。正常情况下，NuBG不与Cub结合，ubps也不能识别分离的泛素，转录激活因子也不会被切下来。最后，将待测蛋白分别与NuBG和Cub融合，形成bait融合蛋白（bait-cub-lexa-vp16）和prey融合蛋白（prey-NuBG）。如果bait和prey发生相互作用，促使NuBG和Cub的相互接近，从而被ubps识别，导致LEXA-VP16的解离，进入核内，进而激活报告基因的转录。该系统能使用四种Bait质粒：pBT3-N，pBT3-SUC，pBT3-STE，pBT3-C，筛选标志是Leu。三种prey质粒：pPR3-C ，pPR3-SUC，pPR3-STE，筛选标志是Trp。

本品为经特殊工艺制备的NMY51酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, his3Δ200, trp1-901, leu2-3, 112, ade2, LYS2::(lexAop)4-HIS3, ura3::(lexAop)8-lacZ, ade2::(lexAop) 8-ADE2, GAL4

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   最好在冰上融化感受态细胞。

2）   转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3）   NMY51对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4）   菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5）   酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）   Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态，方法如下：95-100℃ 水浴或金属浴3min，快速插入冰中，静置3min。重复一次。

2）   取100 µl冰上融化的NMY51化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，单链Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

3）   之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

4）   5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

5）   用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

相关产品

货号 名称 规格               
MF2351-300UL           Y2HGold Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
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MF2353-300UL Y187 Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
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MF2357-300UL EGY48 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
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MF2501-200T Yeast Transformation Kit酵母转化试剂盒 200T

 

 

 

Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

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描述

Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

温馨提示

见我司（金畔生物）整理的酵母双杂交（Yeast two-hybrid assay）产品专题。

产品标签

Matchmarker GAL4双杂交系统；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A（AbA）；金担子素；

产品信息

    产品名称 产品编号 规格 价格（元）  
    Y187 Chemically Competent Cell  酵母菌化学感受态细胞  MF2354-1000UL    10×100μl       290
MF2354-5000UL 50×100μl 1320

产品包装

    组分编号         

 组分名称

保存           

货号（规格）
MF2354-1000UL    MF2354-5000UL
    MF2354-A     Y187 Competent Cell     – 80℃ 10×100μl 50×100μl
    MF2354-B     pGADT7 Control Vector (10ng/μl)             -80℃ 10μl   10μl  
    MF2354-C     Carrier DNA (5μg/μl)     -20℃ 100μl  500μl 
MF2354-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml

25ml

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的双杂交系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。工作原理为：一个完整的酵母转录因子GAL4由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA- BD），C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域（AD）。DB可以识别并结合上游激活序列（UAS），而AD能激活UAS下游基因进行转录，单独的BD或AD不能激活基因转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。

Y187是GAL4系统酵母单杂交/双杂交用实验菌株，MATα型，能直接转化质粒或与MATa型酵母菌株（如Y2HGold，AH109等）通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。Y187-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp1，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y187有两个报告基因：lacZ，MEL1，分别由两种完全异源的Gal4反应启动元件-G1，M1操控，这两种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同，因此大大降低了酵母双杂交假阳性发生的概率。

本品为经特殊工艺制备的Y187酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101, trp 1-901, leu 2-3, 112, gal4Δ, met-, gal80Δ, URA3:: GAL1UAS-Gal1TATA– lacZ, MEL1

注意事项

1. 最好在冰上融化感受态细胞。

2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3. Y187对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4. 菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 取100 µl冰上融化的Y187化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA（95-100℃孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

2. 之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

3. 5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

4. 用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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货号 名称 规格
MF2351-300UL              Y2HGold Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
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MF2501-200T Yeast Transformation Kit酵母转化试剂盒 200T

 

EPI400 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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EPI400 Chemically Competent Cell  

大肠杆菌化学感受态细胞

搜索关键词：

EPI400；EC100；CopyCutter Induction Solution；toxic or unstable DNA毒性或不稳定DNA；Epicentre；

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。

货号

 产品名称 规格 价格（元）
MF2350-1000UL    EPI400 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞    10×100μl    396
MF2350-5000UL EPI400 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

1696

【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

​

产品组分：

组分编号 组分名 货号（规格）
MF2350-1000UL    MF2350-5000UL   
MF2350-A     EPI400Chemically Competent Cell         10×100μl 50×100μl
MF2350-B Control Vector puC19,10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

EPI400菌株，来源于T1抗噬菌体-EC100菌株，通过对含ColE1或pMB1复制起始点的载体（比如，pUC和pET型载体）上控制载体拷贝数的某一基因进行改造而来。EC100菌株上的组成性表达基因-pcnB（plasmidcopynumber）被删除，用连接到一诱导启动子的改良pcnB基因来替换，即得到EPI400菌株。

EPI400菌株能够明显降低各种常用载体的拷贝数，从而特别适用于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆。另外，只需用CopyCutter诱导液（CopyCutter Induction Solution）短时孵育，又可提高拷贝数，改善质粒产量，同时不会降低稳定性。

【更多特征】：

[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型，使EPI400适合于甲基化DNA的有效克隆；

endA1的突变确保质粒克隆的高产量；recA1的突变确保大分子DNA插入的稳定性；

lacZΔM15标记的存在，使EPI400适用于蓝白斑筛选；

tonA赋予EPI400具抗噬菌体T1和T5的能力；rpsL赋予EPI400链霉素抗性。

EPI400菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

产品描述：

本品是大肠杆菌EPI400菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。

2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。如果进行蓝白斑筛选，37℃培养至少15h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g

 

 

AGL1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

发表于由

描述

AGL1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

 

产品标签：

EHA101菌株；农杆菌感受态细胞；Rifampicin（Rif）利福平；Kanamycin（kan）卡那霉素；EHA105；LBA4404；GV3101；AGL1；植物转基因研究；

  

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。

货号 产品名称 规格 价格（元）  
MF2305-1000UL   AGL1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞    10×100μl     280
MF2305-5000UL AGL1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1220

 

产品描述：

AGL1菌株的染色体背景为C58，RecA，核基因含利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pTiBo542DT-DNA，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。AGL1菌株适用于拟南芥、水稻、杨树等植物的转基因操作。

我司提供的AGL1化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，基因型C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。

 

产品组分：

组分编号          组分名称                                                      规格               储存方法        
MF2305-A AGL1 Chemically Competent Cell 10×100μl -80ºC保存
MF2305-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) 10μl -80ºC保存

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1、感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2、整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3、加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

4、为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。

5、转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6、平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量。

7、利福平浓度应≤25μg/ml，过高浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。我司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含50μg/ml卡那霉素，若所用平板含20μg/ml利福平，则转化效率降低到1/2。

8、培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，因Ti质粒丢失的概率极低（基本可以忽略）。

9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1、取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。

2、往100μl感受态细胞悬液中加入1μg（体积不大于10μl）目的DNA，用手拨打管底使其混匀，依次于冰上静置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。

3、加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2-3h。

4、6,000rpm离心1min，吸掉600ul上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LB或YEB平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。

    【注意】：当平板只含50μg/ml卡那霉素时，28℃培养48h即可；当平板中同时加入50μg/ml卡那霉素和20μg/ml利福平时，需28℃培养60h；若使用的平板含50μg/ml利福平，需在28℃培养72-90h。

 

附表1 固体和液体LB培养基配方

组分Component                   LB（液体）/升           LB（固体）/升             
胰蛋白胨Tryptone 10g 10g
酵母提取物Yeast extract 5g 5g
氯化钠NaCl 10g 10g
1N NaOH 调整pH至7.0 调整pH至7.0
琼脂Agar / 15g

附表2 固体和液体YEB培养基配方

组分Component                   YEB（液体）/升         YEB（固体）/升           
胰蛋白胨Tryptone 5g 5g
酵母提取物Yeast extract 1g 1g
牛肉浸膏Beef Extract 5g 5g
蔗糖Sucrose 5g 5g
七水硫酸镁MgSO4·7H2O 0.49g 0.49g
1N NaOH 调整pH至7.0 调整pH至7.0
琼脂Agar / 15g

附表3 常见农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株  羧苄（carb）   链霉素（strep）  利福平（rif）    庆大霉素（gent） 卡那霉素（kan）
EHA101 S S R S R
EHA105 S S R S S
LBA4404 S R R S S
GV3101 S S R R S
AGL1 R S R S S
【备注】：S代表敏感，R代表抗性。

 

 

 — — Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】

 

S17-1 λpir Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

发表于由

描述

S17-1 λpir Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

 

产品订购： 更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。

货号

 产品名称 规格 价格（元）

MF2493-1000UL

 S17-1 λpir Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl

408
MF2493-5000UL S17-1 λpir Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

1728

菌株描述

S17-1 λpir菌株的染色体整合了RP4-2质粒，该质粒可携带染色体的部分DNA在接合菌株之间转移。S17- 1 λpir菌株缺失核酸内切酶 （endA1），提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 （recA1）减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性。Tn7赋予该菌株弱的链霉素抗性。

S17-1 λpir菌株基因型：RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1, thiE1, hsdR17, creC510

产品描述

本品是大肠杆菌S17-1 λpir菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号 组分名称 货号（规格）
MF2493-1000UL MF2493-5000UL
MF2493-A S17-1 λpir Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2493-B Control Vector puC19, 10pg/μl 10μl 10μl

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。

2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6） 后续进行阳性菌落的扩繁和高纯质粒的获取，推荐选用TB培养基（Terrific Broth），优于LB或SOC。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜（12-15h）。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。原则是以在平板上能挑到单克隆菌落为宜。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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货号 名称 规格
MF2331-1000UL BL21 (DE3) Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2332-1000UL BL21 (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
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MF2342-1000UL OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2339-1000UL Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MF2340-1000UL Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
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MF2481-1000UL BL21 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2482-1000UL OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell化学感受态细胞 10×100μl
MF2489-1000UL ArcticExpress(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
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MF2493-1000UL S17-1 λpir Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

 

 

 

S17-1 λpir Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

发表于由

描述

S17-1 λpir Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

 

产品订购： 更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。

货号

 产品名称 规格 价格（元）

MF2493-1000UL

 S17-1 λpir Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl

408
MF2493-5000UL S17-1 λpir Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

1728

菌株描述

S17-1 λpir菌株的染色体整合了RP4-2质粒，该质粒可携带染色体的部分DNA在接合菌株之间转移。S17- 1 λpir菌株缺失核酸内切酶 （endA1），提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 （recA1）减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性。Tn7赋予该菌株弱的链霉素抗性。

S17-1 λpir菌株基因型：RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1, thiE1, hsdR17, creC510

产品描述

本品是大肠杆菌S17-1 λpir菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号 组分名称 货号（规格）
MF2493-1000UL MF2493-5000UL
MF2493-A S17-1 λpir Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2493-B Control Vector puC19, 10pg/μl 10μl 10μl

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。

2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6） 后续进行阳性菌落的扩繁和高纯质粒的获取，推荐选用TB培养基（Terrific Broth），优于LB或SOC。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜（12-15h）。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。原则是以在平板上能挑到单克隆菌落为宜。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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HT115(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

发表于由

描述

HT115(DE3) Chemically Competent Cell  大肠杆菌化学感受态细胞

 

产品标签：

HT115(DE3)；RNAi feeding strain RNA干扰喂养菌株；线虫RNAi；Nematode Growth Medium (NGM)线虫培养基；C. elegans秀丽隐杆线虫；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。网站：www.maokangbio.com。

货号 产品名称 规格 价格（元）
MF2488-1000UL HT115(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl 396
MF2488-5000UL HT115(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1696

 

菌株描述

HT115(DE3)菌株是一种RNAi饲养菌株，具四环素抗性，能在37℃，LB培养基上进行有氧生长。主要用于线虫的干扰实验。

HT115(DE3)菌株是一种特殊的RNase III缺陷型大肠杆菌菌株，此菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因，在IPTG的诱导下表达T7 RNA聚合酶，进而启动线虫dsRNA的表达），除了用于线虫RNAi干扰实验，也适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白表达。

 

HT115(DE3)菌株基因型：E. coli [F-, mcrA, mcrB, IN(rrnD-rrnE)1, rnc14::Tn10(DE3 lysogen: lavUV5 promoter -T7 polymerase) (IPTG-inducible T7 polymerase) (RNAse III minus) ]

 

产品描述

本品是大肠杆菌HT115(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

产品包装

组分编号 组分名 货号（规格）
MF2488-1000UL MF2488-5000UL
MF2488-A HT115(DE3) Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2488-B Control Plasmid puC19,10pg/μl 10μl 10μl

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。

2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7） 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~10mM。

8） 为了进行干扰质粒中dsRNA的生成，HT115(DE3)菌株需在特殊的RNAi NGM（Nematode Growth Media）平板上培养，添加有IPTG和氨苄（50µg/ml）或羧苄（25µg/ml）抗生素，倾向于用羧苄应其更稳定。

9） 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

10） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取50μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。

 

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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MF2490-1000UL ArcticExpress(DE3)pRARE2 Chemically Competent Cell化学感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

 

附录I 蛋白诱导步骤（仅作参考）

1）从新鲜涂布平板上挑取一单克隆，转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。

2）37℃，200rpm摇菌培养过液。

3）将步骤2）中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内（建议使用500ml三角瓶培养）。

4）37℃，150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8（建议0.6，约2.5h）。

5）【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内，置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5）加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h，依蛋白而异。

6）37℃，120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间，建议作一个时间周期优化实验，范围从2~16h。

7）将培养物冰浴10min。4℃，5,000 x g离心10min收集菌株。

8）吸掉上清，将沉淀保存在-20℃（也能保存在更低的温度）。

 

IPTG母液（1M）配制

称量2.38g IPTG（Mw: 238.30）溶于适量去离子水，充分溶解后，调整终体积到10ml，并过滤除菌，即得到1M ITPG母液。

 

 

                

MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

发表于由

描述

MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

产品标签：

MSU440；K599；Agrobacterium rhizogenes发根农杆菌；pCAMBIA2301；Streptomycin 链霉素；Rifampicin利福平；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。

货号 产品名称 规格 价格（元）     
MF2451-1000UL    MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞     10×100μl      430
MF2451-5000UL MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1830

【好消息】：见我司金畔生物整理的根癌（发根）农杆菌感受态细胞技术专题。

 

产品组分：

组分编号 组分名称 货号（规格）
MF2451-1000UL     MF2451-5000UL    
MF2451-A      MSU440Chemically Competent Cell 10×100μl MF2451-A
MF2451-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl)     10μl MF2451-B

 

产品描述

发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌，能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒，含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似，主要有致毒区（Vir），T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。

根据合成冠瘿碱的不同，Ri质粒分为4种类型：1）甘露碱型；2）黄瓜碱型；3）农杆碱型；4）米奇矛型。

 

发根农杆菌菌株MSU440含天然农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，茶树、青蒿、烟草等），同时具有链霉素抗性。 

我司（金畔生物）提供的MSU440化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，基因型为Agrobacterium rhizogenes (strR) MSU440 Ri (agropine type)，经pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测转化效率>104cfu/μg DNA。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，一年有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2）   整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3）   加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

4）   混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。

5）   转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6）   平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

7）   MSU440具有链霉素抗性，不可用于具链霉素抗性质粒的转化。

8）   为了保证最佳的转化效率，发根农杆菌的培养务必使用TY培养基（配方见附表1）。

9）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。

2)        往100μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中间静置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。

3)        冰浴中拿出放室温，加入700μl无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2h。

4)        6,000rpm离心1min，吸掉600ul上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。

附表1 固体和液体TY培养基配方

附表2 常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株  羧苄（carb） 链霉素（strep） 利福平（rif） 庆大霉素（gent） 卡那霉素（kan）
Ar A4 S S S S R
Ar Qual S R S R S
Ar 1193 R R R S S
K599 S R S S S
C58C1 S R R S S
MSU440 S R S S S
【备注】：S代表敏感，R代表抗性。

附表3 常见农杆菌抗生素配制方法

抗生素 配方 母液              工作液       
羧苄青霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
硫酸卡那霉素          去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
链霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 10mg/ml 50μg/ml
庆大霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 20mg/ml 40μg/ml
利福平 DMSO溶解，0.22μm有机相滤膜除菌 10mg/ml 20μg/ml
氯霉素 无水乙醇溶解，0.22μm有机相滤膜除菌           34mg/ml 34μg/ml

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MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

 

 

MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

发表于由

描述

MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

产品标签：

MSU440；K599；Agrobacterium rhizogenes发根农杆菌；pCAMBIA2301；Streptomycin 链霉素；Rifampicin利福平；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。

货号 产品名称 规格 价格（元）     
MF2451-1000UL    MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞     10×100μl      430
MF2451-5000UL MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1830

【好消息】：见我司金畔生物整理的根癌（发根）农杆菌感受态细胞技术专题。

 

产品组分：

组分编号 组分名称 货号（规格）
MF2451-1000UL     MF2451-5000UL    
MF2451-A      MSU440Chemically Competent Cell 10×100μl MF2451-A
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产品描述

发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌，能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒，含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似，主要有致毒区（Vir），T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。

根据合成冠瘿碱的不同，Ri质粒分为4种类型：1）甘露碱型；2）黄瓜碱型；3）农杆碱型；4）米奇矛型。

 

发根农杆菌菌株MSU440含天然农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，茶树、青蒿、烟草等），同时具有链霉素抗性。 

我司（金畔生物）提供的MSU440化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，基因型为Agrobacterium rhizogenes (strR) MSU440 Ri (agropine type)，经pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测转化效率>104cfu/μg DNA。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，一年有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2）   整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3）   加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

4）   混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。

5）   转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6）   平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

7）   MSU440具有链霉素抗性，不可用于具链霉素抗性质粒的转化。

8）   为了保证最佳的转化效率，发根农杆菌的培养务必使用TY培养基（配方见附表1）。

9）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。

2)        往100μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中间静置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。

3)        冰浴中拿出放室温，加入700μl无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2h。

4)        6,000rpm离心1min，吸掉600ul上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。

附表1 固体和液体TY培养基配方

附表2 常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株  羧苄（carb） 链霉素（strep） 利福平（rif） 庆大霉素（gent） 卡那霉素（kan）
Ar A4 S S S S R
Ar Qual S R S R S
Ar 1193 R R R S S
K599 S R S S S
C58C1 S R R S S
MSU440 S R S S S
【备注】：S代表敏感，R代表抗性。

附表3 常见农杆菌抗生素配制方法

抗生素 配方 母液              工作液       
羧苄青霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
硫酸卡那霉素          去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
链霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 10mg/ml 50μg/ml
庆大霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 20mg/ml 40μg/ml
利福平 DMSO溶解，0.22μm有机相滤膜除菌 10mg/ml 20μg/ml
氯霉素 无水乙醇溶解，0.22μm有机相滤膜除菌           34mg/ml 34μg/ml

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货号 名称 规格             
MF2451-1000UL     MSU440 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞     10×100μl
MF2453-1000UL C58C1 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2455-1000UL K599 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2457-1000UL Ar A4 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2459-1000UL Ar Qual Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2461-1000UL Ar 1193 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g