Dispase II 分散酶II(中性蛋白酶)


描述

Dispase II 分散酶II(中性蛋白酶)

产品信息

产品名称                                       

产品编号   规格    价格(元) 

Dispase II 分散酶II(中性蛋白酶)

MX1006-100MG 100mg

550

Dispase II 分散酶II(中性蛋白酶) MX1006-1000MG 1g

2150

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产品描述

中性蛋白酶(Neutral protease),商业名称Dispase II,也称分散酶II,普遍用于不同组织和器官中的细胞分离。Dispase II是一种非特异性金属蛋白酶,能快速有效且温和的破坏组织细胞外基质释放单细胞培养物(原代细胞培养物)或收集已培养的细胞将其转移到新的培养基质上(传代培养)。另外,还能预防悬浮细胞培养过程中发生的成团现象。Dispase II极其稳定,不会受温度、pH和血清内容物的干扰;通过螯合剂或稀释很容易失活;酶活温和,对细胞损伤小,可良好维持细胞膜完整性。

本品来源于多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa),无支原体或其他动物病毒污染。以非无菌的冻干粉形式提供,比活力≥0.8 U/mg蛋白,使用前需进行除菌。常用工作浓度范围为0.6-2.4 U/ml。

产品特性

1)  EC NO:3.4.24.4

2)  同义名:Neutral protease中性蛋白酶

3)  比活力:≥0.8 U/mg protein (37℃, casein as substrate, pH 7.5)

4)  酶活力单位定义:在37℃,pH 7.5的反应条件下,1min内释放福林酚阳性反应氨基酸和多肽量相当于1 μmol (181 μg)酪氨酸所需的酶量即为一个活力单位。

5)  最佳pH:6.0 – 8.5

6)  激活剂:最佳Ca2+为2mM,该酶已含足量Ca2+确保最佳酶活力。

7)  抑制剂: EDTA, EGTA, Hg2+,以及其他重金属。该酶活性不受血清干扰。

保存与运输方法

保存:2-8℃干燥保存,至少1年有效。

运输:冰袋运输。

使用方法

一、储存液和工作液制备

1)储存液制备:用Hepe缓冲盐溶液(50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl)溶解Dispase II冻干粉,配制成10mg/ml的储存液,用0.22µM滤膜过滤除菌。本储存液置于2-8℃,2周稳定;根据单次用量分装冻存,高达2个月稳定,避免反复冻融。

2)工作液制备:使用时用合适的细胞培养液将储存液稀释到工作液浓度即可,常用工作浓度为0.6-2.4 U/ml。不推荐使用>2.4 U/ml的工作浓度。具体使用浓度请根据自身实验体系或参考文献来调整。

二、组织分离

1)用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片,之后用无菌PBS缓冲液清洗组织片几次;

2)用Dispase II工作液(0.6-2.4 U/ml)浸没并37℃孵育进行组织解离;

3)置于水平摇床上,低速转动,37℃孵育直至组织完全解离;【注意】:第一次使用Dispase II,通过细胞计数来确定总反应时间。对于坚硬致密组织需要1h的孵育时间,不过孵育时间几小时也不会有副作用。

4)若有需要,将消化产物用无菌不锈钢网过筛,从而分离解散细胞和残留组织,或当更大片段组织静置到管底,轻轻倒出上层细胞。若需要进一步解离,则加入新鲜的Dispase II工作液到残留组织。

5)低速离心收集细胞,吸掉酶工作液;

6)用适当的细胞培养液重悬细胞,置于正常预优化条件下培养。

三、细胞亚培养

1)用37℃预热的Dispase II工作液完全覆盖细胞,置于37℃孵育5min;

2)吸掉溶液,于37℃再孵育10min;

3)显微镜观察以确定消化情况,若有需要,可再孵育15min;

4)用细胞培养液重悬细胞,低速离心并用培养基清洗细胞几次;

5)用新鲜细胞培养液重悬细胞;

6)按照常规方法进行分盘传代。

注意事项

1)Dispase是Godo Shusei Co., Ltd.的注册商标。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 — — Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】