描述

JM109(DE3) Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

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产品组分：

菌株描述

JM109(DE3)菌株，来源于JM109，含有T7 RNA聚合酶表达基因，整合在其染色体上，故称为JM109(DE3)。如果克隆至载体上的基因包含核糖体结合位点，JM109(DE3)则能对位于T7启动子下游的基因进行高水平的表达。JM109(DE3)能同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，适用于pET，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。JM109(DE3)菌株不可用于蓝白斑筛选。

JM109(DE3)菌株基因型：endA1, recA1, gyrA96, thi, hsdR17 (rk–, mk+), relA1, supE44, λ–, Δ(lac-proAB), [F´, traD36, proAB, lacIqZΔM15], lDE3

产品描述

本品是大肠杆菌JM109(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率高于108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1. 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。
2. 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
3. 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
4. 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
5. 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
6. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
7. 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~2mM。
8. 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1. 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。
2. 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
3. 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
4. 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。

   【注意】：

   a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

   b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

   c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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