Coelenterazine v 腔肠素v Aequorin 水母发光蛋白;CAS NO:55779-48-1

Coelenterazine v 腔肠素v; Coelenterazine 400 a 腔肠素400a; 海肾荧光素酶(Rluc);萤火虫荧光素酶(Fluc);Aequorin 水母发光蛋白;CAS NO:55779-48-1;

腔肠素(Coelenterazine)是在水生生物中发现的一种发光基团(luminophore),是许多荧光素酶的作用底物,包括海肾荧光素酶(Renilla reniformis luciferase, Rluc),分泌型膜锚定荧光素酶(Gaussia luciferase, Gluc)和薮枝虫荧光素酶(Obelia luciferase),和发光蛋白包括水母发光蛋白(Aequorin)的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶,在含分子氧的条件下,氧化腔肠素产生高能量的中间产物,在此过程发射蓝色光,光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫(或萤火虫)荧光素/荧光素酶(FLuc)系统不同,其在含分子氧的条件下,还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光,光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异,RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究,或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛,包括:1)活细胞或组织的钙离子检测;2)细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子(活性氧,ROS)化学发光检测;3)基因报告基因检测;4)动物活体检测;5)ELISA和生物发光共振能量转移(BRET)用于蛋白相互作用研究;6)药物高通量筛选(HTS);

天然腔肠素(Coelenterazine Native,CTZ-Native)是自然界中存在最丰富的一种腔肠素,也是目前应用最普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白(APO)的底物,也是海肾荧光素酶(Rluc)和分泌型膜锚定荧光素酶(Gluc)等荧光素酶的作用底物。前者用于检测钙离子浓度,后者用作荧光素酶的报告基因检测系统。还可用于生物共振能量转移BRET,细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平(ROS)的化学发光检测等。

腔肠素v(Coelenterazine v,CTZ-v)是天然腔肠素(CTZ-Native)的一种合成衍生物,多带一个苄基环。CTZ-v具有一独特的特性,能够将野生型海肾荧光素酶(wt RLuc),RLuc8和绿色海肾荧光素酶(Green RLuc)的发射光谱迁移到更长波长(见附录1 图1,图2)。

产品组分

编号 组分名称

产品货号(规格)

500UG     1MG     
A    Coelenterazine v (powder) 1×500μg 2×500μg
B Specialized Solvent for Coelenterazine v    2×500μl 4×500μl

产品特性

1)   CAS NO:N/A

2)   化学名:16-benzyl-5-hydroxy-13-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-11,14,17-triazatetracyclo [8.7.0.0^{2,7}.0^{11,15}]heptadeca-1(10),2(7),3,5,8,13,15-heptaen-12-one

3)   同义名:CTZ-v; v-Coelenterazine; CLZN-v; v-腔肠素;

4)   分子式:C28H21N3O3

5)   分子量:447.48 g/mol

6)   纯度:≥93%

7)   外观:浅黄色粉末

8)   化学结构式:

保存与运输方法

保存:-20℃干燥避光保存,且保存于惰性气体内。至少一年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)   腔肠素(Coelenterazine, CTZ)及衍生物最好以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内,密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气,也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失,这样不同实验之间的定量结果可能很不可信。

2)   商业化腔肠素的种类繁多,有天然腔肠素,以及各种腔肠素衍生物(比如,腔肠素h,腔肠素400a,腔肠素e,腔肠素f,腔肠素hcp)。它们对钙离子的亲和力,光谱特性,以及应用倾向上会有差异,详见附录2—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性,附录3—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

3)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】:最好在荧光计分析或实验前马上配制新鲜的腔肠素溶液。

1.       将低温保存的冻干粉置于-20℃回至室温,低温保存的溶剂用微量恒温仪(heat block)回至室温,之后进行短暂低速离心,使得管内组分都落到底部。

2.       往500μg腔肠素v内加入1ml 专用的腔肠素溶剂,可用微量恒温仪加热到70℃促进粉末完全溶解,混匀后即得到0.5mg/ml 储存液。【注意:不要用水浴锅加热,因溶液吸潮后会引起腔肠素v的快速降解】

3.       用PBS或TBS稀释储存液到所需的水溶性工作液(比如,若荧光计测定所需的浓度为50μM,加447.5μl(0.5mg/ml)到10ml PBS)。【注意:工作液现配现用,不可保存】

4.       腔肠素v储存液置于-80℃避光保存,避免反复冻融,有条件的话保存在氮气或氩气内。尽快用完。当储存液颜色变为深棕色/黑色,请勿继续使用,这表明药物完全降解(氧化)。

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名称 规格
             Coelenterazine Native天然腔肠素 2×500μg       
Injectable native Coelenterazine 注射用天然腔肠素     2×500μg
Coelenterazine h 腔肠素h 2×500μg
Injectable h-Coelenterazine 注射用腔肠素h 2×500μg
Coelenterazine 400 a 腔肠素400a 500μg
e-Coelenterazine 腔肠素e 500μg
Coelenterazine f 腔肠素f 500μg
Coelenterazine cp 腔肠素cp 250μg
Coelenterazine hcp 腔肠素hcp 250μg