EvaGreen (20× in Water) PCR用核酸染料

产品描述

EvaGreen是一种新型的绿色荧光核酸染料,因其独特的特征适用于包括qPCR和DNA熔解曲线分析、依赖解旋酶恒温扩增(tHDA)的实时监测,以及毛细管凝胶电泳等实验。EvaGreen本身基本无荧光,一旦与dsDNA结合产生强荧光。DNA结合染料呈近似荧光素FAM或SYBR Green I的最大激发和发射光谱,使其与装有488nm氩激光器或任何可见光激发波长处于该区域的仪器兼容。

与目前市场上相似的荧光素FAM或SYBR Green I等相比,EvaGreen具有以下更优越的特征:

1)   低PCR抑制性:通过一种智能化的“按需释放”DNA结合技术,比SYBR Green I呈现更低的PCR抑制性;

2)   高灵敏度:EvaGreen的低PCR抑制性使其能用更高的浓度检测,进而获得更佳的qPCR和熔解曲线分析信号;

3)   安全无毒:EvaGreen完全无细胞膜渗透性,标准艾姆斯试验显示无诱变性和毒性;

4)   与快速PCR兼容:对PCR反应的最小干扰使其能够显著缩短链延伸时间;

5)   与多重PCR兼容:在建议的使用浓度内复制子到复制子间不存在染料迁移;

6)   超凡热稳定性、化学稳定性和光稳定性:PCR缓冲液内95-100℃反应48h,未检测到染料降解。在碱性或酸性条件下稳定性很高。能承受重复的冻融次数。

7)   光谱类似于SYBR Green I:与所有主要品牌的qPCR仪器和酶系统兼容。

本品为溶于水的20× EvaGreen核酸染料,使用时仅需根据体系加量使其终浓度为1×即可。

保存与运输方法

保存:2-8℃避光保存,也可置于-20℃保存,2年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)   本品保存和使用过程中请注意避光。

2)   本品使用前,请置于室温回温,之后用漩涡混匀器完全混匀。本品高度稳定,但染料在保存的过程中会吸附到管壁上,漩涡混匀数秒使其充分溶解。

3)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.   按照以下表格配制反应体系,

组分 终浓度(体系)
Taq buffer without Mg
MgCl2 2.5mM
dNTP Mixture 0.2mM
20× EvaGreen
Each primer (Forward and Reverse) 0.1~1μM
Taq DNA polymerase 1-5U
H2O Adjust to final volume

【注意】:

1)   根据选择的仪器类型,加入或不加入适当浓度的参比染料ROX。

2)   根据体系内选择的Taq酶类型,对其进行优化。热启动酶能得到最好的结果,但需在合适反应体系下。

2. 根据检测样本数配制足量的上述反应体系,并加入模板DNA(10ng/25μl体系)。

3. 将以上体系混匀后分装至qPCR管内。

4. 在合适的仪器内启动qPCR反应并记录退火或延伸步骤的荧光信号。