描述
PicoGreen dsDNA Assay Kit
双链DNA（dsDNA）定量检测试剂盒
【产品升级声明】：
我司（金畔生物）从22.7.15日开始对本试剂盒内标品（B组分）进行更新，由原来的小牛胸腺DNA升级为Lamda DNA，内部测试后者与Picogreen具更佳的结合性和荧光信号。后续统一按照新标品供货。
如果希望继续提供原标品的老用户，务必下单时备注清楚。
特此声明。
产品关键词
Picogreen dsDNA Reagent；双链DNA检测试剂；RiboGreen；RNA定量试剂；ssDNA定量试剂；药物残留DNA检测；
产品信息
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产品名称 |
产品编号 | 规格 | 价格（元） |
| PicoGreen dsDNA Assay Kit
双链DNA（dsDNA）定量检测试剂盒 |
MF0781-0.5ML | 5×100 µL kit |
1820 |
| MF0781-1ML | 10×100 µL kit |
3280 |
产品描述
Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料，常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建，DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义，疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。
Picogreen dsDNA定量检测：Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下，可以选择性地检测低至25pg/ml的dsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性，且几乎无序列依赖性，可以精确地测量多个来源的DNA，包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。
相比传统的方法，Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势：①灵敏度高：数量级较UV吸光读数更敏感，可节省宝贵的样品；②特异性强：在等摩尔的RNA存在的条件下，对dsDNA具有特异性；③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。④易于使用——只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。⑤适用范围广：可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。
本试剂盒含有实验所需的所有试剂，使用更快捷方便。若按照2ml反应体系来计算（比色皿），10×100 µL kit可做100次反应；若按照200µl反应体系来计算（96孔板），10×100 µL kit可做1000次反应；单次反应体系取决于荧光检测仪器。
产品组分
| 编号 | 组分名称 | 产品编号（规格） | |
| MF0781-0.5ML | MF0781-1ML | ||
| MF0781-A | Picogreen dsDNA reagent (200× in DMSO) | 100µl×5 | 100µl×10 |
| MF0781-B | Lambda DNA standard (10µg/ml) | 1ml | 1ml×2 |
| MF0781-C | 1×TE Buffer | 100ml | 100ml×2 |
| MF0781-A置于2-8℃干燥避光保存，亦可置于≤-20℃长期保存；
MF0781-B置于2-8℃，亦可置于≤-20℃长期保存； MF0781-C置于2-8℃保存，长期不用亦可置于-20℃保存； |
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保存与运输方法
保存：2-8℃避光保存，1年有效。
运输：冰袋运输。
注意事项
- Picogreen含DMSO（已知有毒试剂），操作时请注意防护。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、PicoGreen (2×)工作液配制
使用前将PicoGreen dsDNA reagent回温至室温；PicoGreen是以100µL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO
中。实验当天，根据实验需求用1×TE按1:100 的比例稀释适量母液到PicoGreen (2×)。
例如：要准备足够的操作溶液以2ml检测体系测定20个样品，可向19.8mL1×TE 中加入200μL PicoGreen dsDNA reagent (200×)。
【注意】：a）由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。b）PicoGreen见光易降解，所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。c）溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。d）Picogreen的最终工作浓度建议为1×；用户也可根据实际情况调整此浓度，比如：最终工作浓度调低到0.5×。
二、 检测步骤
2.1 Lambda DNA standard (200ng/ml)的配制
用1×TE对Lambda DNA standard (10µg/ml)进行50倍稀释。比如，向10µl Lambda DNA standard (10µg/ml)加入490µl 1×TE混匀，此时标准品浓度为200ng/ml；
2.2 标准曲线的制备
【注意】：根据2010年《中国药典》所提，PicoGreen定量DNA的方法检出限~0.3ng/ml。DNA含量在1.25-80ng/ml范围内线性较好（R2＞0.99），因此，在此范围内设置浓度梯度，建议标准曲线较好。
①比色皿体系检测（2ml）
a、按照表1 向一次性微量比色皿中加入TE和Lambda DNA standard（200ng/ml），通过梯度稀释获得相应浓度的标准溶液，随后加入1ml PicoGreen (2×)定量试剂，混匀后，于室温避光孵育2-5min，并以1×TE缓冲液为blank。【注意】：确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。
| 表1 比色皿体系所需加入各组分量及标准品终浓度表 | |||
| TE (µl) | Lambda DNA standard (µl) | PicoGreen (2×) (µl) | Lambda DNA standard终浓度 |
| 0 | 1000（200ng/ml） | 1000 | 100ng/ml |
| 200 | 800（200ng/ml） | 1000 | 80ng/ml |
| 400 | 600（200ng/ml） | 1000 | 60ng/ml |
| 600 | 400（200ng/ml） | 1000 | 40ng/ml |
| 800 | 200（200ng/ml） | 1000 | 20ng/ml |
| 900 | 100（200ng/ml） | 1000 | 10ng/ml |
| 950 | 50（200ng/ml） | 1000 | 5ng/ml |
| 1000 | 0（200ng/ml） | 1000 | 0ng/ml (blank) |
b、于荧光仪中检测各浓度荧光值，Ex/Em=~480nm/520nm。
【注意】：为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内，应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值接
近荧光仪的最大值；为了减少光漂白，应保持所有样品的检测时间一致。
c、各浓度标准溶液得到的荧光值减去空白对照荧光值，之后对DNA浓度和荧光值做标准曲线。
d、测量待检样本的荧光值。根据荧光值和所建立的标准曲线，来确定样本DNA的浓度。
- 微孔板体系检测（200µl）
a、 按照表2 向96孔板中加入TE和Lambda DNA standard（200ng/ml），通过梯度稀释获得相应浓度的标准溶液，随后加入100µl PicoGreen (2×)定量试剂，混匀后，于室温避光孵育2-5min，并以1×TE缓冲液为blank。【注意】：确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微孔板的外部，可以驱散气泡。
| 表2酶标板体系所需加入各组分量及标准品终浓度表 | |||
| TE (µl) | Lambda DNA standard (µl) | PicoGreen (2×) (µl) | Lambda DNA standard终浓度 |
| 0 | 100（200ng/ml） | 100 | 100ng/ml |
| 20 | 80（200ng/ml） | 100 | 80ng/ml |
| 40 | 60（200ng/ml） | 100 | 60ng/ml |
| 60 | 40（200ng/ml） | 100 | 40ng/ml |
| 80 | 20（200ng/ml） | 100 | 20ng/ml |
| 90 | 10（200ng/ml） | 100 | 10ng/ml |
| 95 | 5（200ng/ml） | 100 | 5ng/ml |
| 100 | 0（200ng/ml） | 100 | 0ng/ml (blank) |
b、于荧光酶标仪中检测各浓度荧光值，Ex/Em=~480nm/520nm。
【注意】：为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内，应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值接
近荧光仪的最大值；为了减少光漂白，应保持所有样品的检测时间一致。
c、各浓度得到的荧光值减去空白对照荧光值，之后对DNA浓度和荧光值做标准曲线。
d、测量待检样本的荧光值。根据荧光值和所建立的标准曲线，来确定样本DNA的浓度。
应用示例（荧光定量）：
附表 PicoGreen定量耐受的污染物列表
| 物质名称 | 最大耐受浓度 | 信号变化百分比 |
| Salts | ||
| Ammonium acetate | 50 mM | 3% decrease |
| Sodium acetate | 30 mM | 3% increase |
| Sodium chloride | 200 mM | 30% decrease |
| Zinc chloride | 5 mM | 8% decrease |
| Magnesium chloride | 50 mM | 33% decrease |
| Urea | 2 M | 9% increase |
| Organic Solvents | ||
| Phenol | 0.1% | 13% increase |
| Ethanol | 10% | 12% increase |
| Chloroform | 2% | 14% increase |
| Detergents | ||
| Sodium dodecyl sulfate | 0.01% | 1% decrease |
| Triton X-100 | 0.1% | 7% increase |
| Proteins | ||
| Bovine serum albumin | 2% | 16% decrease |
| IgG | 0.1% | 19% increase |
| Other Compounds | ||
| Polyethylene glycol | 2% | 8% increase |
| Agarose | 0.1% | 4% increase |