描述
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit
细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒
订购信息： 更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询。
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
| Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒 | MP1551-60T | 60T | 680 |
| MP1551-120T | 120T | 1100 |
基本描述：
细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒（Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit）提供了一种高效的细胞裂解和抽提方法，可在90分钟内对培养细胞或新鲜组织完成细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。试剂盒兼容性好，抽提得到的蛋白适合多种下游应用，包括免疫印迹（Western Blot）、凝胶迁移分析（EMSA）、蛋白分析、报告基因检测和酶活力分析。
本试剂盒使用基于试剂的分离方案：先用细胞浆蛋白抽提试剂，在低渗透压下使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，促使胞浆蛋白释放；然后通过离心得到细胞核沉淀，再用高盐的细胞核蛋白抽提试剂得到核蛋白。一般情况下，细胞浆蛋白与核蛋白之间的交叉污染约10%左右，gDNA/mRNA的干扰均降到最低水平。
本试剂盒适用于培养细胞和新鲜组织细胞核/细胞浆蛋白的抽提。按照每个细胞样本（湿体积为50μl）和每个组织样本（重量50mg）来换算，试剂盒（MP1551-60T）可以抽提60个样本，试剂盒（MP1551-120T）可以抽提120个样本。本试剂盒不适合冻存组织的蛋白抽提。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 货号（规格） | |
| MP1551-60T | MP1551-120T | ||
| MP1551-A | Cytoplasmic Extraction Reagent A 细胞浆蛋白抽提试剂A | 30ml | 2×30ml |
| MP1551-B | Cytoplasmic Extraction Reagent B 细胞浆蛋白抽提试剂B | 1.5ml | 2×1.5ml |
| MP1551-C | Nuclear Extraction Reagent C 细胞核蛋白抽提试剂C | 15ml | 2×15ml |
保存与运输方法
保存：2-8℃冻存，1年稳定。
运输：冰袋运输。
注意事项
1） 建议使用广谱蛋白酶抑制剂混合物（比如：MP1610-1ML）或广谱磷酸酶抑制剂混合物（比如：MP1612-1ML）来维持提取蛋白的完整性，也可使用单一蛋白抑制剂比如：PMSF（MP1601-1ML），需根据实际的研究目的来加。
2） 抽提蛋白的所有步骤需在冰上或4℃进行。
3） 本试剂盒仅适合新鲜组织，对冻存组织的抽提效果非常差。
4） 本试剂盒抽提得到的细胞浆蛋白/细胞核蛋白都可用BCA蛋白浓度测定试剂盒进行浓度测定，但不适合Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
5） 如果需要更浓缩更高浓度的核蛋白，提取过程中加入的胞核蛋白提取试剂C的体积可以降低2~4倍，此步不会对蛋白回收产生不利影响。
6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
- 试剂准备
从冰箱取出细胞浆蛋白抽提试剂A、B和细胞核蛋白抽提试剂C，使用前根据需要加入酶抑制剂。
- 培养细胞的蛋白抽提
2.1 对于贴壁细胞：用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使得细胞贴壁不再很紧，并用移液器吹打细胞。600×g离心5min收集细胞，尽量吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
【注意】：尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解抽提的目的蛋白。
2.2 对于悬浮细胞：600×g离心5min收集细胞，尽量吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
2.3 加入适量预冷的PBS重悬细胞，600×g离心5min收集细胞，尽量吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
2.4 按照下表加入各试剂的量（规格：μl）：
| 细胞湿体积 | 细胞浆蛋白抽提试剂A | 细胞浆蛋白抽提试剂B | 细胞核蛋白抽提试剂C |
| 10 | 100 | 5 | 50 |
| 20 | 200 | 10 | 100 |
| 50 | 500 | 25 | 250 |
| 100 | 1000 | 50 | 500 |
2.5 加入细胞浆蛋白抽提试剂A，振荡混匀数秒，使细胞完全悬浮并分散开，放置在冰上孵育10~15min。
2.6 加入细胞浆蛋白提取试剂B，振荡混匀5s，冰上孵育1min。
【注意】：若胞核蛋白中掺杂胞浆蛋白，可适当延长此步的孵育时间，一般可以延长1~5min。
2.7 振荡混匀5s，16000×g离心5min。
2.8 立即吸取上清至一个预冷的离心管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白，或置于冰上保存立即用于后续实验，或置于-80℃保存用于后续实验。
【注意】：此步千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。
2.9 对于沉淀，完全吸尽残余上清【注意：此处需完全吸尽上清，否则会引入细胞浆蛋白的污染】。加入细胞核蛋白提取试剂C，振荡混匀数秒，使沉淀完全悬浮并分散开，放回冰浴中孵育40min，期间每隔10min拿出来振荡混匀15s，16000×g离心5min。
2.10 立即吸取上清至一个预冷的离心管中，即为抽提得到的细胞核蛋白，或置于冰上保存立即用于后续实验，或置于-80℃保存用于后续实验。
- 新鲜组织的蛋白抽提
3.1 手术切除组织块，迅速置于预冷的PBS中，漂洗数次，滤纸吸干水分。将组织尽量切成非常细小的碎片，称重取适量组织，按照下表加入各试剂的量（规格：μl）：
| 组织重量（mg） | 细胞浆蛋白抽提试剂A | 细胞浆蛋白抽提试剂B | 细胞核蛋白抽提试剂C |
| 20 | 200 | 10 | 100 |
| 50 | 500 | 25 | 250 |
| 80 | 800 | 40 | 400 |
| 100 | 1000 | 50 | 500 |
3.2 加入细胞浆蛋白抽提试剂A，在匀浆器内匀浆，冰上操作，直至获得均匀的悬浮液。匀浆后将匀浆液转移至一个预冷的离心管内，冰浴放置10~15min。
3.3 加入细胞浆蛋白抽提试剂B，振荡混匀5s，冰上孵育1min。
3.4 振荡混匀5s，16000×g离心5min。
3.5 立即吸取上清至一个预冷的离心管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白，或置于冰上保存立即用于后续实验，或置于-80℃保存用于后续实验。
【注意】：此步千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。
3.6 对于沉淀，完全吸尽残余上清【注意：此处需完全吸尽上清，否则会引入细胞浆蛋白的污染】。加入细胞核蛋白提取试剂C，振荡混匀数秒，使沉淀完全悬浮并分散开，放回冰浴中孵育40min，期间每隔10min拿出来振荡混匀15s，16000×g离心5min。
3.7 立即吸取上清至一个预冷的离心管中，即为抽提得到的细胞核蛋白，或置于冰上保存立即用于后续实验，或置于-80℃保存用于后续实验。
相关产品
| 货号 | 名称 | 规格 |
| MP1610-1ML | 广谱型蛋白酶抑制剂混合物（不含EDTA，100× DMSO储液） | 1ml |
| MP1612-1ML | 广谱型磷酸酶抑制剂混合物（100×储液） | 1ml |
| MP1613-1Pack | 改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物（100×储液） | 1包 |
| MP1601-1ML | PMSF (100mM) | 1ml |
| MP1902-500T | Enhanced BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型） | 500T |
| MP1903-500T | Bradford Protein Quantification Kit Bradford 蛋白浓度测定试剂盒 | 500T |
可能遇到的问题解答
| 常见问题 | 引起原因 | 解决方法 |
| 提取的细胞浆蛋白量少 | 细胞没裂解完全 | 增加胞浆蛋白抽提试剂的量 |
| 细胞没完全分散开 | 剧烈震荡完全混匀细胞 | |
| 组织没充分匀浆 | 匀浆充分 | |
| 提取的细胞核蛋白量少 | 细胞核沉淀没分散开 | 剧烈震荡完全混匀细胞核沉淀 |
| 细胞核量少 | 增加离心时间 | |
| 蛋白活性低或没有活性 | 样品没低温保存 | 低温处理样品 |
| 样品中蛋白酶的存在 | 加入酶抑制剂 | |
| 细胞浆与核蛋白交叉 | 细胞浆蛋白裂解时间过长 | 减少加入细胞浆蛋白抽提试剂A和 B 后的孵育时间 |
| 细胞浆蛋白溶液没有完全吸干净 | 小心吸干净细胞浆蛋白溶液 | |
| 取上清时吸入少量的胞核沉淀 | 小心吸干净细胞浆蛋白溶液 |