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Monad-莫纳生物代理,Mag-Bind® cfDNA Kit M3298 磁珠法游离DNA提取试剂盒

发表于由
Mag-Bind® cfDNA Kit M3298
磁珠法游离DNA提取试剂盒
从500-4000ul血清/血浆样品中纯化循环DNA
Poduct Number Preps Price
M3298-00 5 ￥580
M3298-01 50 ￥4600
M3298-02 200 ￥18000

Mag-Bind® cfDNA Kit专为从500-4,000μL血浆或血清样品中快速可靠地提取循环DNA而设计。Mag-Bind® cfDNA Kit可以手动或在自动化平台上进行操作。该试剂盒系统省去了拓展管和真空抽滤的过程，可在自动化程序中完成。

试剂盒内特有的结合缓冲液可在自动化程序中处理大量样品，在24孔板形式的单个孔中处理4mL血清或血浆。Mag-Bind® Particles CH可在大体积样本中快速吸附结合核酸，因其超高的结合效率，故少量的磁珠即处理4mL血清或血浆样品，而洗脱体积可低至30μl。

●   安全 — 无酚氯仿等有机试剂抽提

●   可靠 — 操作简单，每次都能获得理想效果

●   美国强推产品 — 高效痕量核酸吸附系统

 

参数

 

●   应用：荧光定量PCR扩增或二代测序

●   样品：血清、血浆

●   用量：500-4000μl

●   时间：96孔（1mL）样品2小时

●   洗脱体积：30-100μl

 

组分

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

发表于由

描述

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针

 

订购信息：

                              产品名称           产品编号 规格 价格（元）
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-50UG    50μg 642
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-100UG    2×50μg 982
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-500UG    10×50μg 3382

 

产品描述

Mag-Fura-2 AM是一种胞内镁离子指示剂，属于紫外激发的比率型探针，与镁离子结合的Kd值为1.9mM。与Fura-2类似，Mag-Fura-2的激发波长历经蓝色迁移从369nm到330nm。Mag-Fura-2 AM具细胞膜渗透性，只需简单孵育，即可加载进入细胞。

 

产品特性

1） CAS NO.：130100-20-8

2） 化学名：5-Oxazolecarboxylic acid, 2-[5-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethoxy]-6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy] -2-oxoethyl]amino]-2-benzofuranyl]-(acetyloxy)methyl ester

3） 同义名：Furaptra, AM ester

4） 分子式：C30H30N2O19

5） 分子量：722.56g/mol

6） 外观：黄色固体

7） 纯度：≥90%

8） Ex/Em：336/503 nm

9） 溶解性：溶于DMSO

10） 化学结构式：

 

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

 

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法：

1.储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fura-2 AM,，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液，比如50μgMag-Fura-2 AM（Mw：722.56 g/mol）溶于13.8μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完。

 

2.操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。加载温度范围是RT~37℃，更高温度会提高加载速度，但更低温度能最小化染料的内在化现象。表面活性剂Pluronic®F-127有时加入能促进AM探针在水溶性缓冲液内的均匀分散。

2.1 在所需温度（25℃~37℃）预孵育细胞10min，使其离子梯度达到稳定和平衡。

2.2 取4μl Mag-Fura-2 AM储存液和5μl 20% Pluronic®F-127，加入1ml细胞培养液，剧烈漩涡混匀得到均匀的探针分散液。

2.3 取250μl上述制备的探针分散液加入750μl含细胞的培养基内，混匀，此时得到终浓度为1~5μM的工作液，根据起始母液浓度来确定。

2.4 根据需求探针孵育15~60min。

2.5 细胞清洗3次，之后继续孵育30min以保证细胞内的探针完全去酯化。之后选择合适的仪器，进行荧光测定。

 

3.响应校正

镁离子指示剂的校正方法基本与钙离子指示剂类似。需注意校正是在所有指示剂都已去酯化且都与离子结合的假设上进行。校正包括完全不含离子和离子完全饱和相对于外部控制镁离子浓度的荧光测定。胞内校正可能以两种方式进行，要么通过去污剂裂解细胞（通常使用地高辛）将胞内指示剂释放进入周围溶液，要么通过一种离子载体来控制胞内镁离子，不用释放指示剂到周围溶液。比率型指示剂比如Mag-Fura-2也可能在无细胞溶液内进行校正，虽然偏好选择原位校正，由于指示剂对镁离子的亲和性依赖于胞浆环境。相对于离子霉素（MZ2151-1MG），镁离子校正时倾向选择离子载体A-23187（MZ2153-1MG）和4-bromo-A23187（MZ2154-1MG），由于前者能更有效的转运镁离子。用来校正镁离子指示剂的溶液最初需不含重金属离子比如镁，否则会与镁离子指示剂结合。可通过二价阳离子螯合剂TPEN（MX4529-25MG）处理溶液。

 

3.1 对于具离子依赖性的光谱迁移的指示剂，比如Mag-Fura-2，Kd值（或Mg2+浓度，当Kd值已知）能通过以下公式进行换算：

 

R：代表荧光比值（Fλ1/Fλ2），λ1是离子复合物的检测波长，λ2是游离指示剂的检测波长。Min和Max表示最小和最大离子浓度。Q：λ2波长检测下的Fmin/Fmax的比值。Kd是离子-指示剂复合物的解离常数。

3.2 对于单波长指示剂比如Mag-Fluo-4，通过以下公式来确定Kd值，F指的是在单波长下测定的荧光强度。

 

在上述公式中，需注意F值依赖于指示剂浓度，但R值不依赖于指示剂浓度。

 

相关产品

货号 名称 规格
MS4301-1G Pluronic® F-127, Cell Culture Tested细胞培养级 1g
MS4302-1ML Pluronic® F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested 1ml
MX4541-1MG Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 1mg
MX4542-500UG Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4543-500UG Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4544-100UG Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 2×50μg
MS0049-5MG Valinomycin缬氨霉素 5mg
MZ2157-5MG Nigericin, Sodium Salt尼日利亚菌素（钠盐） 5mg
MZ8001-5MG Oligomycin (Mixture of A, B, C)寡霉素（A，B，C混合物） 5mg
MS0070-10MG Antimycin A抗霉素A 10mg
MZ2151-1MG Ionomycin, Free Base离子霉素（游离酸） 1mg
MZ2153-1MG Calcium Ionophore A23187钙离子载体 1mg
MZ2154-1MG Calcium Ionophore 4-bromo-A23187钙离子载体4-溴-A23187 1mg

 

 

应用示例（来自文献，仅用作参考）

文献一、Kolisek M et al. Mrs2p is an essential component of the major electrophoretic Mg2+ influx system in mitochondria. EMBO J. 2003 Mar 17;22(6):1235-44.

 

使用方法（荧光分光光度计测定[Mg2+]m和[Ca2+]m）：1）用DMSO配制Mag-fura 2 AM（0.5mM）或Fura 2 AM (0.5mM)储存液，工作浓度分别是5和10μM。2）线粒体分别加载Mag-fura 2 AM或Fura 2 AM测定游离线粒体内的Mg2+或Ca2+浓度，[Mg2+]m和[Ca2+]m。25℃，在SH缓冲液内分别用Mag-fura 2 AM（5μM）或Fura 2 AM（10μM），和5ul Pluronic F-127孵育线粒体（0.5mg/ml），35min。之后用SH缓冲液清洗线粒体2次以去除多余探针。最后，线粒体再孵育35min使得探针完全水解。之后清洗两次再开始荧光测定。

通过用荧光分光光度计测定探针加载线粒体的荧光值来确定离子浓度，最大激发波长分别为340和380nm，发射波长为509nm。所有的测定在25℃进行，3ml比色皿内含2ml线粒体悬浮液（0.5mg 蛋白/ml）。

 

 

 

Fig 1.Original record of an Mg2+ measurement with yeast mitochondria and of the calibration procedure. Mag‐fura 2 emission at a wavelength of 510 nm was measured upon excitation at 380 and 340 nm (standard excitation wavelength for the free mag‐fura 2 and for the ion‐bound mag‐fura 2, respectively). (A) Single wavelength fluorescence intensities of mag‐fura 2‐loaded yeast mitochondria as a function of time and [Mg2+]e. Measurements were started with mag‐fura 2‐loaded mitochondria in essentially Mg2+‐free buffer (see Materials and methods). Mg2+ was added to final concentrations of 1, 5 and 10 mM. [Mg2+]e was raised to 25 mM before the addition of SDS, resulting in Rmax, and the addition of EDTA led to Rmin values. Inset: autofluorescence of mag‐fura 2‐unloaded mitochondria. (B) The 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities shown in Figure 2A. Note that increases in the ratio are caused by an increase in the 340 nm intensity and a decrease in the 380 nm intensity, indicating that changes in the ratio are due in fact to alterations in the ratio of [Mg2+:mag‐fura 2]/[mag‐fura 2]. (C) Effect of an increase of the extramitochondrial [Ca2+] on the 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities.

 

——Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

发表于由

描述

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针

 

订购信息：

                              产品名称           产品编号 规格 价格（元）
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-50UG    50μg 642
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-100UG    2×50μg 982
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-500UG    10×50μg 3382

 

产品描述

Mag-Fura-2 AM是一种胞内镁离子指示剂，属于紫外激发的比率型探针，与镁离子结合的Kd值为1.9mM。与Fura-2类似，Mag-Fura-2的激发波长历经蓝色迁移从369nm到330nm。Mag-Fura-2 AM具细胞膜渗透性，只需简单孵育，即可加载进入细胞。

 

产品特性

1） CAS NO.：130100-20-8

2） 化学名：5-Oxazolecarboxylic acid, 2-[5-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethoxy]-6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy] -2-oxoethyl]amino]-2-benzofuranyl]-(acetyloxy)methyl ester

3） 同义名：Furaptra, AM ester

4） 分子式：C30H30N2O19

5） 分子量：722.56g/mol

6） 外观：黄色固体

7） 纯度：≥90%

8） Ex/Em：336/503 nm

9） 溶解性：溶于DMSO

10） 化学结构式：

 

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

 

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法：

1.储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fura-2 AM,，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液，比如50μgMag-Fura-2 AM（Mw：722.56 g/mol）溶于13.8μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完。

 

2.操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。加载温度范围是RT~37℃，更高温度会提高加载速度，但更低温度能最小化染料的内在化现象。表面活性剂Pluronic®F-127有时加入能促进AM探针在水溶性缓冲液内的均匀分散。

2.1 在所需温度（25℃~37℃）预孵育细胞10min，使其离子梯度达到稳定和平衡。

2.2 取4μl Mag-Fura-2 AM储存液和5μl 20% Pluronic®F-127，加入1ml细胞培养液，剧烈漩涡混匀得到均匀的探针分散液。

2.3 取250μl上述制备的探针分散液加入750μl含细胞的培养基内，混匀，此时得到终浓度为1~5μM的工作液，根据起始母液浓度来确定。

2.4 根据需求探针孵育15~60min。

2.5 细胞清洗3次，之后继续孵育30min以保证细胞内的探针完全去酯化。之后选择合适的仪器，进行荧光测定。

 

3.响应校正

镁离子指示剂的校正方法基本与钙离子指示剂类似。需注意校正是在所有指示剂都已去酯化且都与离子结合的假设上进行。校正包括完全不含离子和离子完全饱和相对于外部控制镁离子浓度的荧光测定。胞内校正可能以两种方式进行，要么通过去污剂裂解细胞（通常使用地高辛）将胞内指示剂释放进入周围溶液，要么通过一种离子载体来控制胞内镁离子，不用释放指示剂到周围溶液。比率型指示剂比如Mag-Fura-2也可能在无细胞溶液内进行校正，虽然偏好选择原位校正，由于指示剂对镁离子的亲和性依赖于胞浆环境。相对于离子霉素（MZ2151-1MG），镁离子校正时倾向选择离子载体A-23187（MZ2153-1MG）和4-bromo-A23187（MZ2154-1MG），由于前者能更有效的转运镁离子。用来校正镁离子指示剂的溶液最初需不含重金属离子比如镁，否则会与镁离子指示剂结合。可通过二价阳离子螯合剂TPEN（MX4529-25MG）处理溶液。

 

3.1 对于具离子依赖性的光谱迁移的指示剂，比如Mag-Fura-2，Kd值（或Mg2+浓度，当Kd值已知）能通过以下公式进行换算：

 

R：代表荧光比值（Fλ1/Fλ2），λ1是离子复合物的检测波长，λ2是游离指示剂的检测波长。Min和Max表示最小和最大离子浓度。Q：λ2波长检测下的Fmin/Fmax的比值。Kd是离子-指示剂复合物的解离常数。

3.2 对于单波长指示剂比如Mag-Fluo-4，通过以下公式来确定Kd值，F指的是在单波长下测定的荧光强度。

 

在上述公式中，需注意F值依赖于指示剂浓度，但R值不依赖于指示剂浓度。

 

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MS0070-10MG Antimycin A抗霉素A 10mg
MZ2151-1MG Ionomycin, Free Base离子霉素（游离酸） 1mg
MZ2153-1MG Calcium Ionophore A23187钙离子载体 1mg
MZ2154-1MG Calcium Ionophore 4-bromo-A23187钙离子载体4-溴-A23187 1mg

 

 

应用示例（来自文献，仅用作参考）

文献一、Kolisek M et al. Mrs2p is an essential component of the major electrophoretic Mg2+ influx system in mitochondria. EMBO J. 2003 Mar 17;22(6):1235-44.

 

使用方法（荧光分光光度计测定[Mg2+]m和[Ca2+]m）：1）用DMSO配制Mag-fura 2 AM（0.5mM）或Fura 2 AM (0.5mM)储存液，工作浓度分别是5和10μM。2）线粒体分别加载Mag-fura 2 AM或Fura 2 AM测定游离线粒体内的Mg2+或Ca2+浓度，[Mg2+]m和[Ca2+]m。25℃，在SH缓冲液内分别用Mag-fura 2 AM（5μM）或Fura 2 AM（10μM），和5ul Pluronic F-127孵育线粒体（0.5mg/ml），35min。之后用SH缓冲液清洗线粒体2次以去除多余探针。最后，线粒体再孵育35min使得探针完全水解。之后清洗两次再开始荧光测定。

通过用荧光分光光度计测定探针加载线粒体的荧光值来确定离子浓度，最大激发波长分别为340和380nm，发射波长为509nm。所有的测定在25℃进行，3ml比色皿内含2ml线粒体悬浮液（0.5mg 蛋白/ml）。

 

 

 

Fig 1.Original record of an Mg2+ measurement with yeast mitochondria and of the calibration procedure. Mag‐fura 2 emission at a wavelength of 510 nm was measured upon excitation at 380 and 340 nm (standard excitation wavelength for the free mag‐fura 2 and for the ion‐bound mag‐fura 2, respectively). (A) Single wavelength fluorescence intensities of mag‐fura 2‐loaded yeast mitochondria as a function of time and [Mg2+]e. Measurements were started with mag‐fura 2‐loaded mitochondria in essentially Mg2+‐free buffer (see Materials and methods). Mg2+ was added to final concentrations of 1, 5 and 10 mM. [Mg2+]e was raised to 25 mM before the addition of SDS, resulting in Rmax, and the addition of EDTA led to Rmin values. Inset: autofluorescence of mag‐fura 2‐unloaded mitochondria. (B) The 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities shown in Figure 2A. Note that increases in the ratio are caused by an increase in the 340 nm intensity and a decrease in the 380 nm intensity, indicating that changes in the ratio are due in fact to alterations in the ratio of [Mg2+:mag‐fura 2]/[mag‐fura 2]. (C) Effect of an increase of the extramitochondrial [Ca2+] on the 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities.

 

——Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】

Mag-520 Potassium Salt 镁离子荧光探针

发表于由

描述

Mag-520 Potassium Salt 镁离子荧光探针

产品关键词：

Mag-520 AM 镁离子荧光探针；Mag-Fluo-4 AM；BAPTA AM； TPEN, Heavy Metal Chelator 重金属螯合剂； FCCP；CCCP；

订购信息：

产品名称

 产品编号 规格 价格（元）
Mag-520 Potassium Salt 镁离子荧光探针 MX4572-500UG 10×50μg

4590

【温馨提示】：见我司（金畔生物）整理的镁离子荧光探针专题。

产品描述

目前，市场上所有的镁离子荧光探针（比如：Mag-Fura-2，Mag-Indo-1，Mag-Fluo-4，Mag-Rhod-2），都是源于广受欢迎的四羧酸BAPTA钙离子螯合剂改造的三羧酸APTRA螯合剂，这类螯合剂对钙离子（Ca2+）的亲和性高于镁离子（Mg2+），通常在镁离子浓度测定的过程中造成一定的干扰：①钙离子和镁离子诱导的细胞信号通常是缠连在一起，弱选择性的镁离子探针会检测到钙离子诱导信号产生的错误结果；②生理刺激下的镁离子浓度变化往往不如钙离子显著；因此，灵敏度和选择性更高的镁离子荧光探针被期待开发。 

Mag-520正是弥补现有镁离子探针的缺陷而开发的一款新型荧光探针，能够检测浓度在0.1~10mM范围内的Mg2+。与现有的荧光探针比如Mag-Fluo-4相比，对Mg2+的亲和力比Ca2+高10倍。

Mag-520 Potassium Salt是钾盐形式的Mag-520，不具有细胞膜渗透性，溶于水。可通过微注射、膜片电极、划痕标记等方式加载进入细胞，从而检测胞内镁离子水平。

产品特性

分子量：511.51 g/mol

 外观：固体

纯度：≥90%（HPLC）

摩尔吸光系数：75000 cm-1 M-1
Ex/Em：507/531 nm

溶解性：溶于水

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 名称 规格
MS4301-1G Pluronic® F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级 1g
MS4302-1ML Pluronic® F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested 1ml
MX4541-1MG Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant 镁离子荧光探针 1mg
MX4542-500UG Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 10×50μg
MX4543-500UG Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant 镁离子荧光探针 10×50μg
MX4544-100UG Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 2×50μg
MX4545-100UG Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 2×50μg
MX4572-500UG Mag-520 Potassium Salt 钾离子荧光探针 10×50μg

  

 

——Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】

 

Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

发表于由

描述

Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

产品关键词：

Mag-520 AM 镁离子荧光探针；Mag-Fluo-4 AM；BAPTA AM； TPEN, Heavy Metal Chelator 重金属螯合剂； FCCP；CCCP；

订购信息：

产品名称

 产品编号 规格 价格（元）
Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 MX4545-100UG 2×50μg

1672
Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 MX4545-500UG 10×50μg

5022

 

【温馨提示】：见我司（金畔生物）整理的镁离子荧光探针专题。

产品描述

目前，市场上所有的镁离子荧光探针（比如：Mag-Fura-2，Mag-Indo-1，Mag-Fluo-4，Mag-Rhod-2），都是源于广受欢迎的四羧酸BAPTA钙离子螯合剂改造的三羧酸APTRA螯合剂，这类螯合剂对钙离子（Ca2+）的亲和性高于镁离子（Mg2+），通常在镁离子浓度测定的过程中造成一定的干扰：①钙离子和镁离子诱导的细胞信号通常是缠连在一起，弱选择性的镁离子探针会检测到钙离子诱导信号产生的错误结果；②生理刺激下的镁离子浓度变化往往不如钙离子显著；因此，灵敏度和选择性更高的镁离子荧光探针被期待开发。 

Mag-520正是弥补现有镁离子探针的缺陷而开发的一款新型荧光探针，能够检测浓度在0.1~10mM范围内的Mg2+。与现有的荧光探针比如Mag-Fluo-4相比，对Mg2+的亲和力比Ca2+高10倍。Mag-520能够用常用的488nm氩激发器来激发，发射波长是525±20nm（比如：FITC滤片设置），几乎与所有常见的荧光测定仪器兼容（见附录Fig 1. Mag-520的光谱和选择性）。

Mag-520 AM是Mag-520的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Mag-520，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。体外研究表明，多种细胞系（比如：HL-60）经佛司可林（Forskolin）和FCCP/CCCP刺激产生的胞内Mg2+变化能即刻被Mag-520 AM检测到（见附录Fig 2）。

核心优势（选择性更高的镁离子探针，发绿色荧光，用标准FITC滤片设置或通道检测即可）

Mag-520是传统镁离子探针（比如：Mag-Fura-2，Mag-Indo-1，Mag-Fluo-4，Mag-Rhod-2），具有更高的镁离子特异性，与现有的荧光探针比如Mag-Fluo-4相比，对Mg2+的亲和力比Ca2+高10倍（见下图）。传统的镁离子探针虽然开发用来检测镁离子，但受结构的限制性，对Ca2+的亲和性高于Mg2+。

Fig 1. Mag-520的光谱特征和选择性。A）Mag-520（10μM）在不同Mg2+浓度（0-100mM）下的荧光发射光谱。光谱在50mM HEPES buffer, pH 7.7的体系内测定。B）在含Mg2+和Ca2+（浓度范围：0.005~300mM）的体系内分别用Mag-520和Mag-Fluo-4在发射波长525nm（激发：490nm）下测定的荧光强度。

产品特性

1） 同义名：Mag-520 acetoxymethyl ester

2） 分子量：579.46 g/mol

3） 外观：固体

4） 纯度：≥90%（HPLC）

5） Ex/Em：506/525 nm

6） 溶解性：溶于DMSO

 

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

  1. 储存液制备

取一管低温保存的Mag-520 AM，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成2~5mM储存液，比如50μg Mag-520 AM（Mw：579.46 g/mol）溶于17μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。

【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完（不要超过3个月）。

  1. 工作液制备

用合适的生理缓冲液或细胞培养基稀释适量Mag-520 AM母液到工作浓度，常用的2-10μM，具体的请根据自身实验需求来优化。工作液现配现用。

  1. 操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。

2.1 按需培养细胞。

2.2 用合适的生理缓冲液比如：DPBS，清洗细胞。

2.3 加入适量的染色工作液覆盖细胞，于37℃培养箱内孵育15~45min。加载时间和浓度需根据自身实验要求来调整。

2.4 吸走染色工作液，用合适的生理缓冲液比如：DPBS，清洗细胞。

2.5 用合适的生理缓冲液重悬细胞。

2.6 加入刺激剂处理细胞，之后监测荧光强度变化，用流式细胞仪（530/30nm滤片，FITC通道）或带FITC滤片设置的荧光显微镜。

 

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 名称 规格
MS4301-1G Pluronic® F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级 1g
MS4302-1ML Pluronic® F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested 1ml
MX4541-1MG Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant 镁离子荧光探针 1mg
MX4542-500UG Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 10×50μg
MX4543-500UG Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant 镁离子荧光探针 10×50μg
MX4544-100UG Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 2×50μg
MX4545-100UG Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 2×50μg
MX4572-500UG Mag-520 Potassium Salt 钾离子荧光探针 10×50μg

 

——Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】

 

Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

发表于由

描述

Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

产品关键词：

Mag-520 AM 镁离子荧光探针；Mag-Fluo-4 AM；BAPTA AM； TPEN, Heavy Metal Chelator 重金属螯合剂； FCCP；CCCP；

订购信息：

产品名称

 产品编号 规格 价格（元）
Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 MX4545-100UG 2×50μg

1672
Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 MX4545-500UG 10×50μg

5022

 

【温馨提示】：见我司（金畔生物）整理的镁离子荧光探针专题。

产品描述

目前，市场上所有的镁离子荧光探针（比如：Mag-Fura-2，Mag-Indo-1，Mag-Fluo-4，Mag-Rhod-2），都是源于广受欢迎的四羧酸BAPTA钙离子螯合剂改造的三羧酸APTRA螯合剂，这类螯合剂对钙离子（Ca2+）的亲和性高于镁离子（Mg2+），通常在镁离子浓度测定的过程中造成一定的干扰：①钙离子和镁离子诱导的细胞信号通常是缠连在一起，弱选择性的镁离子探针会检测到钙离子诱导信号产生的错误结果；②生理刺激下的镁离子浓度变化往往不如钙离子显著；因此，灵敏度和选择性更高的镁离子荧光探针被期待开发。 

Mag-520正是弥补现有镁离子探针的缺陷而开发的一款新型荧光探针，能够检测浓度在0.1~10mM范围内的Mg2+。与现有的荧光探针比如Mag-Fluo-4相比，对Mg2+的亲和力比Ca2+高10倍。Mag-520能够用常用的488nm氩激发器来激发，发射波长是525±20nm（比如：FITC滤片设置），几乎与所有常见的荧光测定仪器兼容（见附录Fig 1. Mag-520的光谱和选择性）。

Mag-520 AM是Mag-520的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Mag-520，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。体外研究表明，多种细胞系（比如：HL-60）经佛司可林（Forskolin）和FCCP/CCCP刺激产生的胞内Mg2+变化能即刻被Mag-520 AM检测到（见附录Fig 2）。

核心优势（选择性更高的镁离子探针，发绿色荧光，用标准FITC滤片设置或通道检测即可）

Mag-520是传统镁离子探针（比如：Mag-Fura-2，Mag-Indo-1，Mag-Fluo-4，Mag-Rhod-2），具有更高的镁离子特异性，与现有的荧光探针比如Mag-Fluo-4相比，对Mg2+的亲和力比Ca2+高10倍（见下图）。传统的镁离子探针虽然开发用来检测镁离子，但受结构的限制性，对Ca2+的亲和性高于Mg2+。

Fig 1. Mag-520的光谱特征和选择性。A）Mag-520（10μM）在不同Mg2+浓度（0-100mM）下的荧光发射光谱。光谱在50mM HEPES buffer, pH 7.7的体系内测定。B）在含Mg2+和Ca2+（浓度范围：0.005~300mM）的体系内分别用Mag-520和Mag-Fluo-4在发射波长525nm（激发：490nm）下测定的荧光强度。

产品特性

1） 同义名：Mag-520 acetoxymethyl ester

2） 分子量：579.46 g/mol

3） 外观：固体

4） 纯度：≥90%（HPLC）

5） Ex/Em：506/525 nm

6） 溶解性：溶于DMSO

 

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

  1. 储存液制备

取一管低温保存的Mag-520 AM，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成2~5mM储存液，比如50μg Mag-520 AM（Mw：579.46 g/mol）溶于17μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。

【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完（不要超过3个月）。

  1. 工作液制备

用合适的生理缓冲液或细胞培养基稀释适量Mag-520 AM母液到工作浓度，常用的2-10μM，具体的请根据自身实验需求来优化。工作液现配现用。

  1. 操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。

2.1 按需培养细胞。

2.2 用合适的生理缓冲液比如：DPBS，清洗细胞。

2.3 加入适量的染色工作液覆盖细胞，于37℃培养箱内孵育15~45min。加载时间和浓度需根据自身实验要求来调整。

2.4 吸走染色工作液，用合适的生理缓冲液比如：DPBS，清洗细胞。

2.5 用合适的生理缓冲液重悬细胞。

2.6 加入刺激剂处理细胞，之后监测荧光强度变化，用流式细胞仪（530/30nm滤片，FITC通道）或带FITC滤片设置的荧光显微镜。

 

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 名称 规格
MS4301-1G Pluronic® F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级 1g
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MX4541-1MG Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant 镁离子荧光探针 1mg
MX4542-500UG Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 10×50μg
MX4543-500UG Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant 镁离子荧光探针 10×50μg
MX4544-100UG Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 2×50μg
MX4545-100UG Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针 2×50μg
MX4572-500UG Mag-520 Potassium Salt 钾离子荧光探针 10×50μg

 

——Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】

 

Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant 镁离子荧光探针

发表于由

描述

Mag-Fluo-4Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant

镁离子荧光探针

 

订购信息：

产品名称 产品编号 规格 价格（元）   
Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant MX4543-500UG 10×50μg   2582

 

产品描述

不具细胞膜渗透性的Mag-Fluo-4四钾盐（Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt）是Fluo-4的一种结构类似物，对镁离子（Mg2+）和钙离子（Ca2+）的Kd值分别是4.7mM和22µM，是一种非常有用的细胞内镁离子指示剂和低亲和性钙离子指示剂。这一水溶性的镁离子指示探针能通过显微注射或膜片钳灌注加载进入胞内。

 

产品特性

1） 同义名：Mag-fluo-4 potassium salt; Mag-Fluo-4四钾盐；Mag-Fluo-4钾盐；

2） 分子式：C25H13F2K4NO10

3） 分子量：681.77g/mol

4） 外观：橙色固体

5） 纯度：≥90%

6） Ex/Em：494/516 nm

7） 溶解性：溶于水

8） 化学结构式：

 

 

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

 

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fluo-4四钾盐,，置于室温回温至少20min。之后加入适量蒸馏水或水溶性缓冲液配制成相应浓度的储存液。未使用的储存液分装储存在-20℃，且避光保存。至少能稳定保存6个月。

 

相关产品

货号 名称 规格
MS4301-1G Pluronic® F-127, Cell Culture Tested细胞培养级 1g
MS4302-1ML Pluronic® F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested 1ml
MX4541-1MG Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 1mg
MX4542-500UG Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4543-500UG Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4544-100UG Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 2×50μg
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MZ2157-5MG Nigericin, Sodium Salt尼日利亚菌素（钠盐） 5mg
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MZ2153-1MG Calcium Ionophore A23187钙离子载体 1mg
MZ2154-1MG Calcium Ionophore 4-bromo-A23187钙离子载体4-溴-A23187 1mg

 

 

——Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

发表于由

描述

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针

 

订购信息：

                              产品名称           产品编号 规格 价格（元）
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-50UG    50μg 642
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-100UG    2×50μg 982
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-500UG    10×50μg 3382

 

产品描述

Mag-Fura-2 AM是一种胞内镁离子指示剂，属于紫外激发的比率型探针，与镁离子结合的Kd值为1.9mM。与Fura-2类似，Mag-Fura-2的激发波长历经蓝色迁移从369nm到330nm。Mag-Fura-2 AM具细胞膜渗透性，只需简单孵育，即可加载进入细胞。

 

产品特性

1） CAS NO.：130100-20-8

2） 化学名：5-Oxazolecarboxylic acid, 2-[5-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethoxy]-6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy] -2-oxoethyl]amino]-2-benzofuranyl]-(acetyloxy)methyl ester

3） 同义名：Furaptra, AM ester

4） 分子式：C30H30N2O19

5） 分子量：722.56g/mol

6） 外观：黄色固体

7） 纯度：≥90%

8） Ex/Em：336/503 nm

9） 溶解性：溶于DMSO

10） 化学结构式：

 

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

 

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法：

1.储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fura-2 AM,，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液，比如50μgMag-Fura-2 AM（Mw：722.56 g/mol）溶于13.8μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完。

 

2.操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。加载温度范围是RT~37℃，更高温度会提高加载速度，但更低温度能最小化染料的内在化现象。表面活性剂Pluronic®F-127有时加入能促进AM探针在水溶性缓冲液内的均匀分散。

2.1 在所需温度（25℃~37℃）预孵育细胞10min，使其离子梯度达到稳定和平衡。

2.2 取4μl Mag-Fura-2 AM储存液和5μl 20% Pluronic®F-127，加入1ml细胞培养液，剧烈漩涡混匀得到均匀的探针分散液。

2.3 取250μl上述制备的探针分散液加入750μl含细胞的培养基内，混匀，此时得到终浓度为1~5μM的工作液，根据起始母液浓度来确定。

2.4 根据需求探针孵育15~60min。

2.5 细胞清洗3次，之后继续孵育30min以保证细胞内的探针完全去酯化。之后选择合适的仪器，进行荧光测定。

 

3.响应校正

镁离子指示剂的校正方法基本与钙离子指示剂类似。需注意校正是在所有指示剂都已去酯化且都与离子结合的假设上进行。校正包括完全不含离子和离子完全饱和相对于外部控制镁离子浓度的荧光测定。胞内校正可能以两种方式进行，要么通过去污剂裂解细胞（通常使用地高辛）将胞内指示剂释放进入周围溶液，要么通过一种离子载体来控制胞内镁离子，不用释放指示剂到周围溶液。比率型指示剂比如Mag-Fura-2也可能在无细胞溶液内进行校正，虽然偏好选择原位校正，由于指示剂对镁离子的亲和性依赖于胞浆环境。相对于离子霉素（MZ2151-1MG），镁离子校正时倾向选择离子载体A-23187（MZ2153-1MG）和4-bromo-A23187（MZ2154-1MG），由于前者能更有效的转运镁离子。用来校正镁离子指示剂的溶液最初需不含重金属离子比如镁，否则会与镁离子指示剂结合。可通过二价阳离子螯合剂TPEN（MX4529-25MG）处理溶液。

 

3.1 对于具离子依赖性的光谱迁移的指示剂，比如Mag-Fura-2，Kd值（或Mg2+浓度，当Kd值已知）能通过以下公式进行换算：

 

R：代表荧光比值（Fλ1/Fλ2），λ1是离子复合物的检测波长，λ2是游离指示剂的检测波长。Min和Max表示最小和最大离子浓度。Q：λ2波长检测下的Fmin/Fmax的比值。Kd是离子-指示剂复合物的解离常数。

3.2 对于单波长指示剂比如Mag-Fluo-4，通过以下公式来确定Kd值，F指的是在单波长下测定的荧光强度。

 

在上述公式中，需注意F值依赖于指示剂浓度，但R值不依赖于指示剂浓度。

 

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货号 名称 规格
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MZ2153-1MG Calcium Ionophore A23187钙离子载体 1mg
MZ2154-1MG Calcium Ionophore 4-bromo-A23187钙离子载体4-溴-A23187 1mg

 

 

应用示例（来自文献，仅用作参考）

文献一、Kolisek M et al. Mrs2p is an essential component of the major electrophoretic Mg2+ influx system in mitochondria. EMBO J. 2003 Mar 17;22(6):1235-44.

 

使用方法（荧光分光光度计测定[Mg2+]m和[Ca2+]m）：1）用DMSO配制Mag-fura 2 AM（0.5mM）或Fura 2 AM (0.5mM)储存液，工作浓度分别是5和10μM。2）线粒体分别加载Mag-fura 2 AM或Fura 2 AM测定游离线粒体内的Mg2+或Ca2+浓度，[Mg2+]m和[Ca2+]m。25℃，在SH缓冲液内分别用Mag-fura 2 AM（5μM）或Fura 2 AM（10μM），和5ul Pluronic F-127孵育线粒体（0.5mg/ml），35min。之后用SH缓冲液清洗线粒体2次以去除多余探针。最后，线粒体再孵育35min使得探针完全水解。之后清洗两次再开始荧光测定。

通过用荧光分光光度计测定探针加载线粒体的荧光值来确定离子浓度，最大激发波长分别为340和380nm，发射波长为509nm。所有的测定在25℃进行，3ml比色皿内含2ml线粒体悬浮液（0.5mg 蛋白/ml）。

 

 

 

Fig 1.Original record of an Mg2+ measurement with yeast mitochondria and of the calibration procedure. Mag‐fura 2 emission at a wavelength of 510 nm was measured upon excitation at 380 and 340 nm (standard excitation wavelength for the free mag‐fura 2 and for the ion‐bound mag‐fura 2, respectively). (A) Single wavelength fluorescence intensities of mag‐fura 2‐loaded yeast mitochondria as a function of time and [Mg2+]e. Measurements were started with mag‐fura 2‐loaded mitochondria in essentially Mg2+‐free buffer (see Materials and methods). Mg2+ was added to final concentrations of 1, 5 and 10 mM. [Mg2+]e was raised to 25 mM before the addition of SDS, resulting in Rmax, and the addition of EDTA led to Rmin values. Inset: autofluorescence of mag‐fura 2‐unloaded mitochondria. (B) The 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities shown in Figure 2A. Note that increases in the ratio are caused by an increase in the 340 nm intensity and a decrease in the 380 nm intensity, indicating that changes in the ratio are due in fact to alterations in the ratio of [Mg2+:mag‐fura 2]/[mag‐fura 2]. (C) Effect of an increase of the extramitochondrial [Ca2+] on the 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities.

 

——Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】

Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant 镁离子荧光探针

发表于由

描述

Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant

镁离子荧光探针

 

 

订购信息：

产品名称

 产品编号 规格   

价格（元）  
Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant MX4541-1MG 1mg 3382

 

产品描述

Mag-Fura-2四钾盐（Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt）是一种胞内镁离子指示剂，属于紫外激发的比率型探针，与镁离子结合的Kd值为1.9mM。与Fura-2类似，Mag-Fura-2的激发波长历经蓝色迁移从369nm到330nm。Mag-Fura-2四钾盐具水溶性，不具细胞膜渗透性，能通过显微注射或膜片钳灌注加载进入胞内。

 

 产品特性

1） CAS NO.：132319-57-4

2） 化学名：5-Oxazolecarboxylic acid, 2-[6-[bis(carboxymethyl)amino]-5-(carboxymethoxy)-2-benzofuranyl]-, tetrapotassium salt

3） 同义名：Furaptra,Tetrapotassium Salt;Mag-Fura-2四钾盐；Furaptra四钾盐；

4） 分子式：C18H10K4N2O11

5） 分子量：586.68g/mol

6） 外观：黄色固体

8） Ex/Em：336/503 nm

9） 溶解性：溶于水

10） 化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fura-2四钾盐,，置于室温回温至少20min。之后加入适量蒸馏水或水溶性缓冲液配制成相应浓度的储存液。未使用的储存液分装储存在-20℃，且避光保存。至少能稳定保存6个月。

相关产品

货号 名称 规格
MS4301-1G Pluronic® F-127, Cell Culture Tested细胞培养级 1g
MS4302-1ML Pluronic® F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested 1ml
MX4541-1MG Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 1mg
MX4542-500UG Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4543-500UG Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4544-100UG Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 2×50μg
MS0049-5MG Valinomycin缬氨霉素 5mg
MZ2157-5MG Nigericin, Sodium Salt尼日利亚菌素（钠盐） 5mg
MZ8001-5MG Oligomycin (Mixture of A, B, C)寡霉素（A，B，C混合物） 5mg
MS0070-10MG Antimycin A抗霉素A 10mg
MZ2151-1MG Ionomycin, Free Base离子霉素（游离酸） 1mg
MZ2153-1MG Calcium Ionophore A23187钙离子载体 1mg
MZ2154-1MG Calcium Ionophore 4-bromo-A23187钙离子载体4-溴-A23187 1mg

——Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】