126208-13-7 5-(and-6)-Carboxy SNARF-1, Acetoxymethyl Ester, Acetate pH荧光探针

发表于2024年4月18日由上海金畔生物科技有限公司

SNARF-1 AM; BCECF, AM；Dual-emission ratiometric pH indicator双发射光比率型pH荧光探针；SBFI AM ( Na+Indicator)；Fluo-8, AM；CAS：126208-13-7；

细胞内pH在许多细胞事件起着重要的调节作用，这些事件包括细胞生长、钙调节、酶活力、受体介导的信号转导、离子转运、内吞、趋化性、细胞黏附和其他细胞进程。发射pH敏感的荧光探针普遍用来监测胞内pH变化。使用pH荧光探针的成像技术允许研究人员以更高的空间分辨率调研这些事件，采样密度可通过其他技术比如微电极来完成。

5-(and-6)-Carboxy SNARF-1, Acetoxymethyl Ester, Acetate，常简称为Carboxy SNARF-1 AM，是一种细胞膜渗透性的pH荧光探针，胞内去酯化后的pKa约为7.5，因此，适用于测定pH 7.0-8.0之间的pH变化。Carboxy SNARF-1在酸性和碱性条件下呈现出显著的pH依赖发射光迁移，从黄-橙色迁移到深红色荧光。这一pH依赖性允许其测定双发射波长（通常为580nm和640nm）下的荧光强度比率，从而用来定量测定pH。

Carboxy SNARF-1特别适合带可见光固定波长激发源的仪器，包括共聚焦扫描显微镜、流式细胞仪和荧光酶标仪。该染料用氩离子激光器（488nm和514nm）都能良好激发。联合Fura-2（MX4502）、Fluo-3（MX4503）和Indo-1（MX4506）能同时测定胞内pH和钙离子。

产品特性

1） CAS NO：126208-13-7

2）化学名：Spiro[7H-benzo[c]xanthene-7,1′(3H)isobenzofuran]-ar’-carboxylic acid, 3-(acetyloxy)-10- (dimethylamino)-3′-oxo-, (acetyloxy)methyl ester

3）同义名：Carboxy SNARF-1 AM；C-SNARF-1 AM; 5-(6)-Carboxy RhodFluor, acetoxymethyl ester, acetate;

4）分子式：C32H25NO9

5）分子量：567.55

6） Ex/Em：激发波长（4888~530nm），发射波长（580nm and 640nm）

7）溶解性：溶于DMSO

8）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

产品使用

一、储存液的制备

于实验前，将低温保存的Carboxy SNARF-1 AM（1mg，Mw:567.55）置于室温回温至少30min，之后加入高质量无水的DMSO配制成1-10mM的储存液（比如：往1mg粉末内加入176μl DMSO配制成10mM的储存液），充分混匀即可。工作液建议尽快用完，若是不能用完，请根据单次用量分装后，≤-20℃避光保存。Carboxy SNARF-1 AM的工作液务必现配现用。

应用示例（来自文献资源）

Ramshesh VK, Lemasters JJ. Imaging of mitochondrial pH using SNARF-1. Methods Mol Biol. 2012;810:243-248. doi:10.1007/978-1-61779-382-0_16. PMID: 22057572

SNARF-1加载方法：为了加载SNARF-1，培养的心肌细胞用5μM SNARF-1, Acetoxymethyl Ester（SNARF-1 AM）于37℃孵育45min。孵育过程中，胞内酯酶水解探针释放SNARF-1 free acid使其保留在细胞浆内。细胞用KRH清洗两遍，之后置于KRH或其它生理培养液内于显微镜下观察。与其它的AM加载探针不同，SNARF-1能很好的加载进入线粒体，虽然这类加载可能具细胞特异性。为了促进更好的线粒体吸收，细胞用SNARF-1 AM在更低的温度（4-12℃）孵育更长的时间。

Fig Confocal SNARF-1 ratio images of intracellular pH. A 1-day cultured cardiac myocyte was loaded with SNARF-1-AM (5 μM) for 45 min in culture medium at 37°C, and intracellular pH was measured by ratio imaging of SNARF-1 fluorescence before (baseline) and after 30, 40, and 42 min of chemical hypoxia.

注意事项

1）荧光染料都存在淬灭问题，操作或保存过程中尽量避光，减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

	名称	规格
	BCECF AM, Cell Permeant pH荧光探针	1mg
	BCECF Acid, Cell Impermeant pH荧光探针	1mg
	BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM) pH荧光探针	1mg
	BCFL Acid (Superior replacement for BCECF Acid) pH荧光探针	1mg
	5-(and-6)-Carboxy SNARF-1, Acetoxymethyl Ester, Acetate pH荧光探针	1mg
	Pluronic®F-127, Cell Culture Tested细胞培养级	1g
	Pluronic®F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested	1ml
	Dimethyl Sulfoxide (DMSO), Cell Culture Tested二甲基亚砜（细胞培养级）	100ml
	Nigericin, Sodium Salt尼日利亚菌素钠盐	5mg

附录I

图1.Carboxy SNARF-1的pH依赖性的吸收光谱

图2.Carboxy SNARF-1在激发波长=488nm，514nm和534nm下pH依赖性的发射光谱。

Rhod-4, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

发表于2024年4月18日由上海金畔生物科技有限公司

Rhod-4, AM 红色钙离子探针; Rhod-2 AM钙离子荧光探针；Fluo-8； Fluo-4； HTS Screen Assay高通量筛选；

Rhod-2虽然是最受欢迎的红色荧光Ca2+荧光探针，但Rhod-2的线粒体定位和细胞中高基底Ca2+信号使其在某些细胞应用中严重受限制。另外，Rhod-2在488nm处很不理想的激发波长使其在某些只有488nm激发光源的仪器比如FLIPRTM上信号很弱。Rhod-4正是根据这些缺陷而改进的，具有以下特征：

1） Rhod-4的最大激发和发射波长是530nm和555nm。虽Rhod-4最大激发波长是530nm，但在488nm处

激发下的信号也相当强（见Fig 1）。除了能在514nm，532nm和546nm的长波长激发之外，Rhod-4用氩离子激发器在488nm激发下也能得到理想的荧光信号。Rhod-4随着增加的Ca2+浓度荧光信号而增强（555nm发射波长），一旦与Ca2+结合荧光约增强＞200倍。由于许多细胞受刺激后的Ca2+浓度提高通常是5~10倍，因此，Rhod-4是一款优秀的检测此范围内Ca2+浓度变化的高灵敏探针。

Fig 1, Rhod-4钠盐在含氯化钙体系内的激发光谱特征。

2）一旦受激动剂刺激后，Rhod-4在细胞内的荧光明显强于Rhod-2（信噪比）。更重要的是，Rhod-4主要定位在细胞胞浆内，不像Rhod-2主要定位在线粒体。另外，Rhod-4具更低的温度依赖性的细胞加载特性，不管室温还是37℃产生相似的结果。这一特征使Rhod-4比Rhod-2在HTS应用中更有优势。

Rhod-4, AM是Rhod-2的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Rhod-4，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以冻干粉的形式提供，使用时只需经无水DMSO充分溶解，配置成2~5mM的储存液，并依据具体实验和相关文献资料调整到需要的工作浓度即可。

基本特性

1）同义名：Rhod-4, Acetoxymethyl Ester

2）分子量：1015.96

3）外观：红色固体

4）最大激发/发射波长：530/555 nm

5） Kd（Ca2+结合）：525NM

6）溶解性：溶于DMSO（2~5mM）

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，至少一年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Rhod-4, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4） Rhod-4, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

A，试剂准备

1）配制Pluronic F-127母液：称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-1G）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1）用无水DMSO溶解Rhod-4, AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Rhod-4, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Rhod-4, AM中加入12.3µl 无水DMSO）。准备Rhod-4, AM工作液之前，有时需要往Rhod-4, AM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

【注①】：Rhod-4, AM染色工作液制备前，添加等体积20% Pluronic F-127溶液到Rhod-4, AM+DMSO储存液，从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%。

【注②】：Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

2）用HHBS或其他生理缓冲液将 Rhod-4, AM+DMSO储存液稀释到1-10µM的工作液。

【注①】：Rhod-4,AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注②】：Rhod-4, AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3）【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone，0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱，因此加入培养基后需要重新调整pH。

4）将准备好的Rhod-4, AM工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育30min-1h。

【注①】：若使用含血清的培养基，血清内酯酶会降解AM，从而降低Rhod-4, AM加载效果。而含酚红培养基会使本底值略偏高，建议加入染色工作液前，对细胞清洗2~3次。

【注②】：关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育30min，看荧光效果；如果细胞死亡较多，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。

【注③】：降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

5）吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如2.5mM丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6）室温再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7）用适当的仪器如激光共聚焦、流式细胞仪、荧光酶标仪，以及波长Ex/Em=530/555 nm来进行检测。

相关产品

	名称	规格
	Pluronic®F-127, Cell Culture Tested细胞培养级	1g
	Pluronic®F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested	1ml
	Probenecid丙磺舒	1g
	Probenecid Sodium, Water Soluble丙磺舒钠（水溶性）	2×77mg
	1× HHBS (Hanks’ Balanced Salt Solution with 20mM HEPES), pH 7.2-7.4	500ml
	Fura-2, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯	50μg
	Fluo-3, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯	50μg
	Fluo-4, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯	50μg
	Fluo-8 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯	50μg
	Indo-1, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯	50μg
	Rhod-2, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯	50μg
	Rhod-4, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯	50μg

Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

发表于2024年4月18日由上海金畔生物科技有限公司

Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针；Fluo-2, AM；Fluo-2 Medium Affinity,Acetoxymethyl Ester；Fluo-3；Fluo-4；HTS Screen Assay 高通量筛选；

订购信息：

产品名称		规格
Fluo-8, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯		50μg
Fluo-8, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯		5×50μg

产品描述

Fluo-8，是目前最亮的可见光激发波长Ca2+荧光探针，其荧光强度比Fluo-4强两倍，比Fluo-3强四倍。Fluo-8具中等程度的Ca2+亲和力，几乎接近Fluo-3，Fluo-4（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM），使用上几乎同Fluo-3和Fluo-4。

Fluo-8不仅维持Fluo-3，Fluo-4便捷的光谱检测特性，与Ca2+结合后的最大激发波长为490nm，最大发射波长为514nm。而且具有改善的细胞载入和Ca2+响应能力。Fluo-8加载具较弱的温度依赖性，在室温或37℃孵育皆染色良好，不像Fluo-3，Fluo-4严格要求在37℃孵育，此特征使其更适用于HTS高通量筛选实验。Fluo-8应用广泛，与许多细胞系和靶向样本兼容，不会受配体或靶标本身信号干扰。Fluo-8可通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜等来检测胞内钙离子水平的变化。

Fluo-8, AM是Fluo-8的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-8，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以50μg小包装的冻干粉形式供货，用于细胞内Ca2+水平检测时，常用浓度为1-5μM。

基本特性：

1）同义名：Fluo-8, Acetoxymethyl Ester;Fluo-2, AM; Fluo-2 Medium Affinity, Acetoxymethyl Ester;

2）化学名：Bis(acetoxymethyl) 2,2′-((4-(6-(acetoxymethoxy)-3-oxo-3H-xanthen-9-yl)-2-(2-(bis(2-acetoxymethoxy)-2-oxoethyl)amino)phenoxy)ethoxy)phenyl)azanediyl)diacetate

3）分子式：C50H50N2O23

4）分子量：1046.93

5）最大激发/发射波长：490/514 nm（Ca2+结合）

6）溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

7）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期一年。

运输：室温运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3）Fluo-8, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4）Fluo-8, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

A、试剂准备

1. 配制Pluronic F-127母液：称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2. HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3)或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1. 用无水DMSO溶解Fluo-8, AM配制成1-5mM的储存液，或将已配好的Fluo-8, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fluo-8,AM中加入11.9µl无水DMSO）。

2. 用HHBS或其他生理缓冲液将Fluo-8, AM+DMSO储存液稀释到1-10µM的工作液，提前加入适量的20% Pluronic F-127溶液，使其终浓度为0.02%。

【注①】：Fluo-8, AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注②】：Fluo-8, AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

【注③】：Pluronic F-127可以防止Fluo-8, AM在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低Fluo-8, AM的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

3.【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone，0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱，因此加入培养基后需要重新调整pH。

4. 将准备好的Fluo-8, AM工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。37℃或者室温孵育20-60min。

【注①】：关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育30min，看荧光效果；如果细胞死亡较多，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。

【注②】：降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

5. 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如2.5mM丙磺酸的缓冲液）替换，以去除多余探针。

6. 用适当的仪器如激光共聚焦、流式细胞仪、荧光酶标仪，以及波长Ex/Em=490/520 nm来进行检测。

【注①】：Fluo-8, AM进入胞内后，经酯酶降解形成Fluo-8，并不是以共价结合的形式滞留在细胞质内。因此不可对加载染料的活细胞进行固定处理，再进行Ca2+水平检测。

BCECF AM, Cell Permeant pH荧光探针

发表于2024年4月17日由上海金畔生物科技有限公司

BCECF, AM是一种广泛使用的检测细胞质pH值的荧光探针。具有细胞膜渗透性，进入细胞后被胞内酯酶水解生成BCECF，一种极性荧光衍生物从而被保留在细胞内。BCECF在细胞内很稳定，排出半衰期超过2小时。胞内pH测定通过比率成像实现，通过确定pH依赖性的发射光强度比率（Ex=535nm），分别用490nm激发光激发和440nm激发光激发，使用荧光分光光度法（spectrofluorometry）或流式细胞仪检测皆可。

BCECF,AM虽然主要用于哺乳动物细胞，也有报道用于植物细胞、细菌和酵母等的细胞pH水平检测。BCECF, AM还被广泛用于各种功能实验，如细胞活力和毒性、凋亡、粘附、趋化、药物抗性等引起的细胞pH变化检测。BCECF, AM还能用于包括钾离子在内的其他离子的胞内变化检测。

产品特性

1）CAS NO：117464-70-7

2）化学名：3′,6′-bis(acetyloxy)-5(or 6)-[[(acetyloxy)methoxy]carbonyl]-3-oxo-spiro[isobenzofuran-1(3H),9′- [9H]xanthene]-2′,7′-dipropanoic acid, 2′,7′-bis[(acetyloxy)methyl] ester

3）同义名：BCECF Acetoxymethyl ester; 2′,7′-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)-Carboxyfluorescein, Acetoxymethyl Ester;

4）分子式：C42H40O21

5）分子量：880.7

6）纯度：≥95%（HPLC）

7）外观：黄色薄膜

8）溶解性：溶于乙腈，DMSO，DMF

9）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

1、储存液制备

实验前将低温保存的BCECF, AM置于室温回温至少20min。用高质量的无水DMSO溶解粉末，使其充分溶解，配制成1-10mM储存液。按照单次用量分装后置于≤-20℃避光干燥保存，六个月稳定。

【注意】：用水溶性缓冲液或培养基稀释储存液到需要浓度的工作液，现配现用，不可保存。正常的BCECF, AM溶液无色且无荧光（浅色和弱荧光可接受）。

2、 BCECF, AM的加载（哺乳动物细胞）

大多数哺乳动物细胞不需透化，直接用稀释的细胞膜渗透BCECF, AM探针孵育即可加载。一旦进入细胞，非特异酯酶水解非荧光AM前体，产生荧光且pH灵敏的探针。阳离子探针BCECF的低泄露率和小的细胞内体积使得探针在胞内的终浓度明显高于胞外孵育浓度。总体而言，与钙离子探针比如Fura-2相比，以AM形式加载的BCECF更少出现胞内区域化。大量的实验数据表明BCECF在细胞质内是自由流动和解离的。

以下步骤仅作为参考，具体可根据实际情况调整。

1）制备活细胞悬浮液（~106个细胞/ml）。

【注意】：贴壁细胞的加载条件基本类似于制备悬液的细胞。培养皿内的贴壁细胞可用生理盐稀释的BCECF AM探针浸没。对于生长在盖玻片上的细胞，轻轻洗掉维持培养基后，只需将盖玻片转入一含有BCECF AM染色液的培养皿内即可。

2）将适量1mMBCECF, AM储存液用生理盐缓冲液如HBSS稀释100~500倍。通常情况，使用能够获得足够荧光信号的最低浓度BCECF AM来加载（也许低至0.1µM的加载浓度足够），这样可以降低AM水解的副产物生成，且有利于更充分的水解。加载培养基必须无氨基酸或缓冲液不含伯胺或仲胺，因其有可能切割AM阻止加载。血清的存在，有可能含内源性酯酶活性，也需避免使用，直至探针已经完全加载好。

3）取等体积的BCECF AM稀释液到制备好的细胞悬液中。于4℃-37℃孵育15-60min。

【注意】：某些研究者报道生理温度比室温孵育产生更高程度的区域化。

4）用新鲜培养基清洗细胞两次。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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	H2DCFDA (DCFH-DA, DCFH) 活性氧（ROS）荧光探针	50mg
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CAS NO：117464-70-7 BCECF AM, Cell Permeant pH荧光探针

发表于2024年4月17日由上海金畔生物科技有限公司

产品特性

1）CAS NO：117464-70-7

2）化学名：3′,6′-bis(acetyloxy)-5(or 6)-[[(acetyloxy)methoxy]carbonyl]-3-oxo-spiro[isobenzofuran-1(3H),9′- [9H]xanthene]-2′,7′-dipropanoic acid, 2′,7′-bis[(acetyloxy)methyl] ester

3）同义名：BCECF Acetoxymethyl ester; 2′,7′-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)-Carboxyfluorescein, Acetoxymethyl Ester;

4）分子式：C42H40O21

5）分子量：880.7

6）纯度：≥95%（HPLC）

7）外观：黄色薄膜

8）溶解性：溶于乙腈，DMSO，DMF

9）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

1、储存液制备

2、 BCECF, AM的加载（哺乳动物细胞）

以下步骤仅作为参考，具体可根据实际情况调整。

1）制备活细胞悬浮液（~106个细胞/ml）。

3）取等体积的BCECF AM稀释液到制备好的细胞悬液中。于4℃-37℃孵育15-60min。

【注意】：某些研究者报道生理温度比室温孵育产生更高程度的区域化。

4）用新鲜培养基清洗细胞两次。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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	Fluo-4, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯	50μg
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	Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯	50μg
	SBFI AM ( Na+Indicator) 钠离子指示探针	100μg
	Coelenterazine Native 天然腔肠素	500μg

CAS NO.：99590-86-0 EGTA AM, Calcium Chelator 钙螯合剂

发表于2024年4月17日由上海金畔生物科技有限公司

EGTA AM是钙螯合剂EGTA（乙二醇双（2-氨基乙醚）四乙酸）（Cat#：MS5501）的乙酰氧基甲酯衍生物，具细胞膜渗透性。一旦进入细胞后，被胞内酯酶水解生成EGTA。EGTA AM常用于评估胞内钙变化在细胞信号通路中发挥的作用。

产品特性

1） CAS NO.：99590-86-0

2）化学名：3,12-bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-6,9-dioxa-3,12-diazatetradecanedioic acid, 1,14-bis [(acetyloxy)methyl] ester

3）同义名：EGTA Acetoxymethyl ester, Ethyleneglycol-bis(β-aminoethyl)-N,N,Nʹ,Nʹ-tetraacetoxymethyl Ester; EGTA乙酰氧基甲酯，乙二醇-双（β-氨乙基）- N,N,Nʹ,Nʹ-四乙酰氧基甲酯；

4）分子式：C26H40N2O18

5）分子量：668.6

6）纯度：≥95%

7）溶解性：溶于DMSO（20mg/ml）、DMF

8）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，至少2年有效。

运输：室温运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

	名称	规格
	BAPTA AM, Calcium Chelator钙螯合剂	5mg
	BAPTA, Tetrasodium Salt钙螯合剂	100mg
	BAPTA, Tetrapotassium Salt钙螯合剂	100mg
	BAPTA, Free Acid钙螯合剂	100mg
	EGTA乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸	5g
	EGTA Tetrasodium Salt	5g
	EGTA AM, Calcium Chelator钙螯合剂	10mg
	TPEN, Heavy Metal Chelator重金属螯合剂	25mg

BAPTA AM是一种选择性的钙螯合剂 CAS NO.：126150-97-8

发表于2024年4月17日由上海金畔生物科技有限公司

BAPTA AM是一种选择性的钙螯合剂，对Ca2+的选择性比Mg2+高100倍以上。BAPTA AM是BAPTA（Cat#：MX4527）的乙酰氧基甲酯衍生物，具细胞膜渗透性，能用来控制胞内Ca2+水平。BAPTA对Ca2+的选择性比EDTA和EGTA更强，且其金属结合能力受pH影响更小。BAPTA AM能够抑制电压门控钾离子（Kv）通道，包括Kv1.3， Kv1.5 和Kv11.1，Ki值分别是1.45，1.23和1.30 μM。

产品特性

1） CAS NO.：126150-97-8

2）化学名：Glycine, N,N’-[1,2-ethanediylbis(oxy-2,1-phenylene)]bis[N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]]-, bis[(acetyloxy)methyl] ester

3）同义名：BAPTA, AM; BAPTA-AM; BAPTA Acetoxymethyl ester BAPTA乙酰氧基甲酯；

4）分子式：C34H40N2O18

5）分子量：764.68

6）纯度：≥98%

7）溶解性：溶于DMSO（20mg/ml）、DMF（20mg/ml）

8）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，至少2年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1） BAPTA AM能溶于无水DMSO配制成1-10mM储存液，按照单次用量，-20℃干燥保存。

2） BAPTA AM用于细胞加载的常用工作浓度范围是1-10μM，最好是根据实验需求和参考文献优化。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

	名称	规格
	BAPTA AM, Calcium Chelator钙螯合剂	5mg
	BAPTA, Tetrasodium Salt钙螯合剂	100mg
	BAPTA, Tetrapotassium Salt钙螯合剂	100mg
	BAPTA, Free Acid钙螯合剂	100mg
	EGTA AM, Calcium Chelator钙螯合剂	10mg
	TPEN, Heavy Metal Chelator重金属螯合剂	25mg

CAS NO：149732-62-7 Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

发表于2024年4月16日由上海金畔生物科技有限公司

Fura Red AM； Rhod-2, AM, Cell Permeant；Fluo-3, AM；可见光激发波长Ca²⁺荧光探针；Fluo-4；Fluo-8, AM；CAS NO：149732-62-7；

Fura Red是一种可见光激发的Fura-2类似物，提供独特的可能性使其与单波长激发、绿色荧光的钙离子探针（比如：Fluo-8）联合使用时，通过显微光度术、成像或流式细胞术来比率法测定单细胞内的Ca²⁺水平。Fura Red, AM是Fura Red的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fura Red，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。Fura Red, AM能够与Fluo-3 AM、Fluo-4 AM、Fluo-8 AM等同时加载进入细胞。两种钙离子探针结合使用的优势在于能用更长的激发波长。这比传统的紫外或近紫外激发的比率型探针对细胞造成更小的伤害，由于可见光波长对细胞的光毒性更小。Fura Red显著的斯托克斯位移使其能与荧光素或荧光素样的染料（使用单一激发波长）进行多色荧光检测。比如，研究者想同时测定单核细胞和粒细胞的钙流和氧化爆发，通过同时分析Fura Red和罗丹名123（二氢罗丹名123的氧化产物）的荧光值来满足目的。Fura Red也能与转染细胞内的蓝色荧光蛋白结合使用。

产品特性

1）CAS NO：149732-62-7

2）化学名：Glycine, N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-N-[5-[2-[2-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl] amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]-2-[(5-oxo-2-thioxo-4-imidazolidinylidene)methyl]-6-benzofuranyl]-, (acetyloxy)methyl ester

3）同义名：Fura Red, Acetoxymethyl Ester;

4）分子式：C₄₇H₅₂N₄O₂₄S

5）分子量：1088.99

6）化学结构式：

7）纯度：≥95% (HPLC)

8）最大激发/发射波长：471/652 nm（Ca²⁺-free），436/630 nm（Ca²⁺-bound）

9）溶解性：溶于DMSO（5mM）

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Fura Red, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4） Fura Red, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液：称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-1G）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1）用无水DMSO溶解Fura Red, AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Fura Red, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fura Red, AM中加入11.5µl 无水DMSO）。准备Fura Red, AM工作液之前，有时需要往Fura Red, AM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

2）用HHBS或其他生理缓冲液将 Fura Red, AM+DMSO储存液稀释到1-20µM的工作液。

3）【可选】如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone， 0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

4）将准备好的Fura Red, AM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育20-120min。

5）吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 37℃再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7）用合适的激发/发射波长来检测荧光（见附录I： Fura Red的激发和发射光谱）。

Calcein Deep Red AM 钙黄绿素深红乙酰氧基甲酯

发表于2024年4月16日由上海金畔生物科技有限公司

Calcein, AM 钙黄绿素AM；Calcein Deep Red 钙黄绿素深红色；Cy5；活细胞染色；Fluorescein diacetate (FDA)；Propidium Iodide（PI）碘化丙啶；

产品信息

产品名称		规格
Calcein Deep Red AM 钙黄绿素深红乙酰氧基甲酯		1mg

Calcein, AM，中文名钙黄绿素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一种具细胞膜渗透性最受欢迎的活细胞荧光染料，用来标记和监测活细胞功能，呈绿色荧光（Ex/Em= 490nm/515nm）。然而，Calcein, AM单一颜色使其不能将其用在多重标记实验，比如，其无法和GFP转染细胞联合使用，因光谱一致。为了解决这一应用缺陷，我司特别开发出Calcein Red（货号：MX3013），Calcein Deep Red（货号：MX3016）这些衍生物，能够联合GFP或FITC等荧光素实现对活细胞的多重标记和功能分析。

我司（金畔生物）提供的钙黄绿素深红乙酰氧基甲酯（Calcein Deep Red AM）自身无荧光，具有细胞膜渗透性。能够轻易进入活细胞，被细胞内酯酶水解生成钙黄绿素深红（Calcein Deep Red），产生强烈的深红色荧光（Ex/Em=643/663nm），用标准的Cy5滤片设置检测。

产品特性

1）同义名：Calcein Deep Red AM；Calcein Deep Red AM Ester;钙黄绿素乙酰氧基甲酯（深红色），钙黄绿素深红乙酰氧基甲酯；

2）分子量：~600

3）纯度：≥95%（HPLC）

4） Ex/Em：643/663nm

5）溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

应用实例

Fig 1.HeLa细胞（活细胞+固定细胞）经Calcein Deep Red AM（# MX3016）染色的图片。

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，避免强光直射，有效期一年。

运输：冰袋运输。

注意事项

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
本品从冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。
本品对湿度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。储存液需要分装避光冻存，且必须紧紧密封盖子，干燥保存。工作液必须现配现用。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1、储存液制备

储存液配制范围可为2～5 mM，具体根据工作浓度来决定，建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM，那么可配制5mM的储存液，即往1mgCalcein Deep RedAM（Mw ~600）内加入333μl细胞培养级别的DMSO（货号：MS4601A-100ML）即可。储存液需要根据单次用量分装，-20℃避光干燥保存，一定要避免受潮，此种情况下可稳定保存数月。

2、染色工作液制备

于正式实验前，或溶解Calcein Deep RedAM粉末配制储存液，或取一管已配制好的Calcein Deep RedAM储存液并回至室温使充分融化。用添加有2.5mM丙磺舒的HHBS（Hanks with 20mM Hepes buffer）或其他适当的缓冲液（pH 7.0）稀释储存液到5~10 µM工作浓度。

【注1：Calcein Deep Red染色工作液很不稳定，需要使用前配制。】

【注2：许多细胞都含有机阴离子转运体。因此高度推荐染色工作液内添加2.5mM丙磺舒（有机阴离子转运体抑制剂），以防止荧光探针泄露到细胞外。】

3、染色步骤

以下是基于96孔板的Calcein Deep Red活细胞染色步骤，仅作参考。具体实验请根据自身要求做调整。

细胞准备：于黑框/透明底的96孔微孔板内按照100~10,000个细胞/孔的量铺板。设置空白孔（不含细胞的培养基）。【注意】：每种细胞系需要根据实际情况来确认细胞增殖或细胞毒性诱导的最佳细胞密度。增殖分析，细胞密度相对少些；毒性分析，起始细胞密度高些。建议96孔板的单孔体积为100 µL。
药物处理：加待测药物到细胞内处理适当时间（比如24h，48h或96h）。设置空白孔（不含细胞的培养基），加入相应量的待测药物。【注意】：药物添加前可不用清洗细胞。然而，若是药物是血清敏感性，那在添加药物前需要吸掉生长培养基和血清因子。替换之细胞用无血清培养基培养。
吸掉培养基。【注意：探针加载前必须去除培养基】
按照100 µL/孔（96孔板）的量加入Calcein Deep Red染色工作液。
室温或37℃避光孵育1h。【注意1：适当的孵育时间取决于细胞类型和使用的细胞浓度。每个实验建议进行孵育时间优化。】【注意2：对于悬浮细胞，探针孵育结束后，于800rpm离心2min。】
用含合适滤光片（Ex/Em= 643nm/663nm）的仪器进行荧光检测。【注意：如果荧光背景高，可在荧光信号检测前用含2.5mM丙磺舒的HHBS缓冲液替换Calcein Deep Red染色工作液。】

相关产品

货号	名称	规格
MX3011-50UG	Calcein, AM, Ultra Pure Grade钙黄绿素（绿色）	50μg
MX3012-500T	Calcein AM/PI Double Stain Kit活细胞/死细胞双染试剂盒	500T
MX3013-1MG	Calcein Red, AM钙黄绿素红（红色）	1mg
MX3015-1MG	Calcein Blue, AM钙黄绿素蓝（蓝色）	1mg
MX3016-1MG	Calcein Deep Red AM钙黄绿素深红乙酰氧基甲酯	1mg
MZ8471-1G	Probenecid丙磺舒	1g
MZ8472-154MG	Probenecid Sodium, Water Soluble丙磺舒钠（水溶性）	2×77mg
MX4205-10MG	Propidium Iodide碘化丙啶	10mg

BAPTA AM是一种选择性的钙螯合剂，对Ca2+的选择性比Mg2+高100倍以上

发表于2024年4月15日由上海金畔生物科技有限公司

产品名称		规格
BAPTA AM, Calcium Chelator 钙螯合剂		5mg
BAPTA AM, Calcium Chelator 钙螯合剂		25mg

产品描述

产品特性

1） CAS NO.：126150-97-8

2）化学名：Glycine, N,N’-[1,2-ethanediylbis(oxy-2,1-phenylene)]bis[N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]]-, bis[(acetyloxy)methyl] ester

3）同义名：BAPTA, AM; BAPTA-AM; BAPTA Acetoxymethyl ester BAPTA乙酰氧基甲酯；

4）分子式：C34H40N2O18

5）分子量：764.68

6）纯度：≥98%

7）溶解性：溶于DMSO（20mg/ml）、DMF（20mg/ml）

8）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，至少2年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1） BAPTA AM能溶于无水DMSO配制成1-10mM储存液，按照单次用量，-20℃干燥保存。

2） BAPTA AM用于细胞加载的常用工作浓度范围是1-10μM，最好是根据实验需求和参考文献优化。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

	名称	规格
	BAPTA AM, Calcium Chelator钙螯合剂	5mg
	BAPTA, Tetrasodium Salt钙螯合剂	100mg
	BAPTA, Tetrapotassium Salt钙螯合剂	100mg
	BAPTA, Free Acid钙螯合剂	100mg
	EGTA AM, Calcium Chelator钙螯合剂	10mg
	TPEN, Heavy Metal Chelator重金属螯合剂	25mg

PBFI AM ( K+ Indicator) 钾离子指示探针 Valinomycin 缬氨霉素，CAS NO：124549-23-1

发表于2024年4月14日由上海金畔生物科技有限公司

PBFI AM 钾离子指示剂/探，SBFI AM 钠离子指示剂/探针，Asante Potassium Green-2，Valinomycin 缬氨霉素，CAS NO：124549-23-1

产品信息: 现货供应，欢迎咨询。

产品名称	CAS NO.	规格
PBFI AM ( K+ Indicator) 钾离子指示探针	124549-23-1	2×50μg
PBFI AM ( K+ Indicator) 钾离子指示探针	124549-23-1	10×50μg
PBFI AM ( K+ Indicator) 钾离子指示探针	124549-23-1	20×50μg
PBFI AM ( K+ Indicator) 钾离子指示探针	124549-23-1	1mg

PBFI，英文全名Potassium-binding Benzofuran Isophthalate，一种K+敏感的荧光探针，用来测定细胞和细胞内区隔（Intracellular compartments）的K+水平变化。虽然PBFI对K+的选择能力弱于Ca2+指示剂比如Fura-2，但在其他一价阳离子存在体系中，PBFI足以检测K+的生理浓度。结合离子后的PBFI光谱变化可通过激发光比率测定来分析，其能与使用相同光滤片和仪器检测的探针Fura-2共同使用。

PBFI对K+的解离常数（Kd）非常依赖于Na+的存在与否。在不含Na+的体系，PBFI对K+的Kd值为5.1mM；而在含135mM K+/ Na+总浓度（约为生理离子强度）的溶液体系，PBFI对K+的Kd值为44mM；若缓冲液中的Na+用四甲基氯化铵所替代，PBFI对K+的Kd值变为11mM。氯化胆碱和N-甲基葡萄糖胺是培养基中另两种可能替代Na+的化合物。虽然PBFI对K+的选择性比Na+仅强1.5倍，这一选择能力已足以满足检测需求，因为正常情况细胞内K+浓度比Na+高10倍左右。

本品为乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethyl ester, AM ester）形式的PBFI，CAS NO：124549-23-1，具有细胞膜渗透性，只需简单孵育即可进入细胞，常用加载浓度范围5-10µM，加载时间40min-4h，根据具体的实验要求和细胞类型来调整。

产品特性

1）化学名：4,4′-[1,4,10,13-tetraoxa-7,16-diazacyclooctadecane-7,16-diylbis(5-methoxy-6,2-benzofurandiyl)]bis- 1,3-benzenedicarboxylic acid, tetrakis[(acetyloxy)methyl] ester

2）同义名：Potassium-binding Benzofuran Isophthalate Acetoxymethyl ester

3） CAS NO：124549-23-1

4）分子式：C58H62N2O24

5）分子量：1171.1

6）纯度：≥95%

7） Ex/Em：~340,380/500 nm

8）外观：黄色至橙色粉末

9）溶解性：溶于DMSO（10mM）和甲醇

10）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） PBFI AM易受潮，粉末需干燥保存；粉末需用无水DMSO溶解，配制储存液（如10mM），置于-20℃干燥避光保存，小量分装避免反复冻融，至少3个月稳定。

2） PBFI AM由于水溶性较差，建议使用Pluronic F-127以优化探针的细胞加载效率。通常情况，将PBFI AM的DMSO储存液与等体积Pluronic F-127（25% w/v）混合均匀，之后即刻加入适量的细胞加载缓冲液（cell loading buffer）中达到所需浓度。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Cal-590 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针 Ionomycin, Free Base离子霉素

发表于2024年4月14日由上海金畔生物科技有限公司

Cal-590 AM; Cal-520 AM; 钙离子荧光探针; Fura-2 AM; Fluo-8 AM; Rhod-2 AM; Ionomycin, Free Base离子霉素;

产品信息

产品名称		规格
Cal-590 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针		50μg
Cal-590 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针		2×50μg
Cal-590 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针		10×50μg

产品描述

钙离子测定在各种生理活动中发挥着重要作用，与钙离子结合从而表现出光谱反应的荧光探针使得研究人员能够观察胞内游离钙离子水平变化，通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光光度计和荧光酶标板来检测。
新一代钙离子荧光探针：Cal-520，Cal-590和Cal-630是最强大且均一的细胞内钙流（Calcium mobilization）测定用荧光探针，与传统的钙离子探针（比如：Fluo-3 AM、Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，具有明显改善的信噪比和细胞内滞留性。
Cal-520 AM，Cal-590 AM和Cal-630 AM具有细胞膜渗透性，能够预加载进入细胞。一旦进入细胞候，亲脂阻断基团AM被酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，留在细胞内部。一旦与钙离子结合后，它们的荧光显著加强。当细胞被激动剂刺激后，受体发出细胞内钙释放的信号，从而使得Cal-520，Cal-590和Cal-630的荧光增加。Cal-520 AM，Cal-590 AM和Cal-630 AM的高灵敏度以及>100倍的荧光增强使其成为胞内钙离子测定的理想探针。高信噪比和更加的胞内滞留性使其成为评估GPCR和钙离子通道靶标以及筛选对应激动剂和拮抗剂的优秀工具。

Cal-520，Cal-590和Cal-630基本定位在细胞质，不像Rhod-2主要定位在线粒体。Cal-590和Cal-630的长激发/发射波长使其为完美的钙离子探针，能够与绿色荧光蛋白（GFP）标记细胞兼容多色检测。另外，Cal-520，Cal-590和Cal-630也与绝大多数现存的荧光仪器兼容。Cal-520在488nm处被良好激发，用FITC滤片检测；Cal-590经优化在555nm处被良好激发，用TRITC/Cy3滤片检测；Cal-630经优化在594nm处被良好激发，用Texas Red滤片检测；

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。

运输：冰袋运输。

产品特性

同义名：Cal-590, Acetoxymethyl Ester;	分子量：1266.81
解离常数：K_d=561 nM	溶解性：DMSO
Ex/Em：574/588

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Cal-590, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4） Cal-590, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2-7.4) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1）用无水DMSO溶解Cal-590 AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Cal-590 AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Cal-590 AM中加入9.8µl 无水DMSO）。

2）用HHBS或其他生理缓冲液将Cal-590 AM+DMSO储存液稀释到含0.04% Pluronic F-127的10-20µM染色工作液。

【注①】：添加一定量的20% Pluronic F-127溶液到Cal-590 AM+DMSO储存液，使Pluronic F-127的浓度约为0.04%。Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

【注②】：Cal-590 AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注③】：Cal-590 AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3）【可选】如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2mM）可能需要加入上述染色工作液内（在孔内的最终浓度为0.5–1mM），以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：我司提供多种丙磺舒：包括水溶性的丙磺舒（MZ8472-154MG），能降低有机溶剂的使用。

4）加入等体积的染色工作液到细胞培养孔内，37℃孵育60-90min。然后，室温再孵育30min。

【注①】：某些细胞系探针的加载时间长于2h能提供更好的信号。

5）吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6）之后在HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）中，用合适的激发/发射波长来检测荧光（见产品特性：Cal-590 AM的激发和发射光谱）。

【注①】：对于荧光显微镜检测，建议用TRITC/Cy3滤片来检测，建议用黑框/透明底的细胞培养板。

【注②】：对于荧光酶标仪检测，建议用激发波长：540nm，发射波长590nm，cut-off波长570nm来检测，建议用黑框/透明底的96孔板；

附录I Cal-520，Cal-590或Cal-630钙离子探针的波长和钙离子结合特性

产品编号	激发波长（nm）	发射波长（nm）	解离常数K_d（nM）
MX4537-50UG	492	514	320
MX4535-50UG	558	584	561
MX4536-50UG	607	623	792

CAS NO：168482-84-6 活细胞染色探针 Calcein Blue, AM 钙黄绿素蓝（蓝色）

发表于2024年4月12日由上海金畔生物科技有限公司

Calcein Blue, AM 钙黄绿素蓝；Calcein, AM 钙黄绿素；Calcein Red钙黄绿素红；DAPI；活细胞染色探针； CAS NO：168482-84-6；

Calcein, AM，中文名钙黄绿素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一种具细胞膜渗透性最受欢迎的活细胞荧光染料，用来标记和监测活细胞功能，呈绿色荧光（Ex/Em= 490nm/515nm）。然而，Calcein, AM单一颜色使其不能将其用在多重标记实验，比如，其无法和GFP转染细胞联合使用，因光谱一致。为了解决这一应用缺陷，我司特别开发出Calcein Blue, AM、Calcein Red, AM等，实现联合Calcein, AM对活细胞的多重标记和功能分析。

Calcein Blue, AM本身仅呈微弱荧光（Ex/Em~322/435nm），具有细胞膜渗透性。一旦进入细胞后，被细胞内酯酶水解为钙黄绿素蓝（Calcein Blue），探针极性增强并能保留在细胞内数小时，此时荧光强度增强且荧光光谱迁移到更长波长（Ex/Em~360/445nm），光谱特征类似于DAPI、Hoechst 33342或Hoechst 33258。

产品特性

1） CAS NO：168482-84-6

2）化学名：N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-N-[(7-hydroxy-4-methyl-2-oxo-2H-1-benzopyran-8-yl) methyl]-glycine, (acetyloxy)methyl ester

3）同义名：Calcein Blue Acetoxymethyl ester钙黄绿素蓝乙酰氧基甲酯；

4）分子式：C21H23NO11

5）分子量：465.41

6）纯度：≥90%

7） Ex/Em：360/445nm

8）溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

9）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Calcein Blue, AM对湿度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。Calcein Blue, AM储存液需要分装避光冻存，且必须紧紧密封盖子，干燥保存。Calcein Blue, AM工作液必须现配现用。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A，储存液制备

储存液配制范围可为1～5 mM，具体根据工作浓度来决定，建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM，那么可配制5mM的储存液，即往1mg Calcein Blue, AM（Mw：465.41）内加入430μl 细胞培养级别的DMSO（货号：MS4601A-100ML），充分溶解，混匀。储存液根据单次用量分装-20℃保存，避免反复冻融，数月稳定（不要超过6个月）。

B， 20% Pluronic F-127制备【可选】

称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

C，染色步骤

大多数实验体系中Calcein Blue, AM的工作浓度为2-5μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein Blue, AM的最佳工作浓度，以最低的探针浓度得到最好的荧光结果为筛选原则。

1）取一管适量分装的储存液（1000×）置于室温，至少回温20min，低速离心后，用合适的缓冲液如PBS，HBSS-HEPES稀释到1×染色工作液。

【注意】：有时可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic F127到Calcein Blue, AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前，取一管Calcein Blue, AM储存液内加入等体积的20% Pluronic F127，使Pluronic F127的终浓度为0.02%。加入Pluronic F127的Calcein Blue, AM溶液不可长期保存，需现配现用。

2）对于贴壁细胞，先用胰酶-EDTA或Accutase消化细胞，离心收集细胞（1000 rpm，3min）。对于悬浮细胞，直接离心收集细胞。【注意】：贴壁细胞也可进行原位染色。

3）去上清，用PBS（或者其他缓冲液）清洗细胞2~3次，以充分去除残留的酯酶活性。

4）用1/10细胞培养基体积的Calcein Blue, AM染色工作液重悬细胞，37℃孵育20min～1h。

【注意】：1）若细胞自身含有机阴离子转运体，需加入丙磺舒（1-2.5mM）或者苯磺唑酮（0.1-0.25mM）到孵育体系内以降低去酯化的Calcein Blue泄露到胞外；2）降低探针加载温度，可能会减少探针区室化现象。

5）用PBS（或者其他缓冲液）洗涤细胞两次去除多余染料。

【注意】：如有必要，使用含有机阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗。

6）用含合适滤光片（Ex/Em=360/445nm）的仪器进行检测。

相关产品

名称	规格	Ex/Em
Calcein AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素（绿色）	50μg	490/515nm
Calcein Red, AM 钙黄绿素红（红色）	1mg	560/574nm
Calcein Deep Red Acetate 钙黄绿素深红醋酸盐	1mg	646/659nm
Calcein Blue, AM 钙黄绿素蓝（蓝色）	1mg	360/445nm

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

发表于2024年4月10日由上海金畔生物科技有限公司

产品名称	产品编号	规格
Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针	MX4542-50UG	50μg
Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针	MX4542-100UG	2×50μg
Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针	MX4542-500UG	10×50μg

产品描述

Mag-Fura-2 AM是一种胞内镁离子指示剂，属于紫外激发的比率型探针，与镁离子结合的Kd值为1.9mM。与Fura-2类似，Mag-Fura-2的激发波长历经蓝色迁移从369nm到330nm。Mag-Fura-2 AM具细胞膜渗透性，只需简单孵育，即可加载进入细胞。

产品特性

1） CAS NO.：130100-20-8

2）化学名：5-Oxazolecarboxylic acid, 2-[5-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethoxy]-6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy] -2-oxoethyl]amino]-2-benzofuranyl]-(acetyloxy)methyl ester

3）同义名：Furaptra, AM ester

4）分子式：C30H30N2O19

5）分子量：722.56g/mol

6）外观：黄色固体

7）纯度：≥90%

8） Ex/Em：336/503 nm

9）溶解性：溶于DMSO

10）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法：

1.储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fura-2 AM,，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液，比如50μgMag-Fura-2 AM（Mw：722.56 g/mol）溶于13.8μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完。

2.操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。加载温度范围是RT~37℃，更高温度会提高加载速度，但更低温度能最小化染料的内在化现象。表面活性剂Pluronic®F-127有时加入能促进AM探针在水溶性缓冲液内的均匀分散。

2.1 在所需温度（25℃~37℃）预孵育细胞10min，使其离子梯度达到稳定和平衡。

2.2 取4μl Mag-Fura-2 AM储存液和5μl 20% Pluronic®F-127，加入1ml细胞培养液，剧烈漩涡混匀得到均匀的探针分散液。

2.3 取250μl上述制备的探针分散液加入750μl含细胞的培养基内，混匀，此时得到终浓度为1~5μM的工作液，根据起始母液浓度来确定。

2.4 根据需求探针孵育15~60min。

2.5 细胞清洗3次，之后继续孵育30min以保证细胞内的探针完全去酯化。之后选择合适的仪器，进行荧光测定。

3.响应校正

镁离子指示剂的校正方法基本与钙离子指示剂类似。需注意校正是在所有指示剂都已去酯化且都与离子结合的假设上进行。校正包括完全不含离子和离子完全饱和相对于外部控制镁离子浓度的荧光测定。胞内校正可能以两种方式进行，要么通过去污剂裂解细胞（通常使用地高辛）将胞内指示剂释放进入周围溶液，要么通过一种离子载体来控制胞内镁离子，不用释放指示剂到周围溶液。比率型指示剂比如Mag-Fura-2也可能在无细胞溶液内进行校正，虽然偏好选择原位校正，由于指示剂对镁离子的亲和性依赖于胞浆环境。相对于离子霉素（MZ2151-1MG），镁离子校正时倾向选择离子载体A-23187（MZ2153-1MG）和4-bromo-A23187（MZ2154-1MG），由于前者能更有效的转运镁离子。用来校正镁离子指示剂的溶液最初需不含重金属离子比如镁，否则会与镁离子指示剂结合。可通过二价阳离子螯合剂TPEN（MX4529-25MG）处理溶液。

3.1 对于具离子依赖性的光谱迁移的指示剂，比如Mag-Fura-2，Kd值（或Mg2+浓度，当Kd值已知）能通过以下公式进行换算：

R：代表荧光比值（Fλ1/Fλ2），λ1是离子复合物的检测波长，λ2是游离指示剂的检测波长。Min和Max表示最小和最大离子浓度。Q：λ2波长检测下的Fmin/Fmax的比值。Kd是离子-指示剂复合物的解离常数。

3.2 对于单波长指示剂比如Mag-Fluo-4，通过以下公式来确定Kd值，F指的是在单波长下测定的荧光强度。

在上述公式中，需注意F值依赖于指示剂浓度，但R值不依赖于指示剂浓度。

相关产品

货号	名称	规格
MS4301-1G	Pluronic® F-127, Cell Culture Tested细胞培养级	1g
MS4302-1ML	Pluronic® F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested	1ml
MX4541-1MG	Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针	1mg
MX4542-500UG	Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针	10×50μg
MX4543-500UG	Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针	10×50μg
MX4544-100UG	Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针	2×50μg
MS0049-5MG	Valinomycin缬氨霉素	5mg
MZ2157-5MG	Nigericin, Sodium Salt尼日利亚菌素（钠盐）	5mg
MZ8001-5MG	Oligomycin (Mixture of A, B, C)寡霉素（A，B，C混合物）	5mg
MS0070-10MG	Antimycin A抗霉素A	10mg
MZ2151-1MG	Ionomycin, Free Base离子霉素（游离酸）	1mg
MZ2153-1MG	Calcium Ionophore A23187钙离子载体	1mg
MZ2154-1MG	Calcium Ionophore 4-bromo-A23187钙离子载体4-溴-A23187	1mg

应用示例（来自文献，仅用作参考）

文献一、Kolisek M et al. Mrs2p is an essential component of the major electrophoretic Mg2+ influx system in mitochondria. EMBO J. 2003 Mar 17;22(6):1235-44.

使用方法（荧光分光光度计测定[Mg2+]m和[Ca2+]m）：1）用DMSO配制Mag-fura 2 AM（0.5mM）或Fura 2 AM (0.5mM)储存液，工作浓度分别是5和10μM。2）线粒体分别加载Mag-fura 2 AM或Fura 2 AM测定游离线粒体内的Mg2+或Ca2+浓度，[Mg2+]m和[Ca2+]m。25℃，在SH缓冲液内分别用Mag-fura 2 AM（5μM）或Fura 2 AM（10μM），和5ul Pluronic F-127孵育线粒体（0.5mg/ml），35min。之后用SH缓冲液清洗线粒体2次以去除多余探针。最后，线粒体再孵育35min使得探针完全水解。之后清洗两次再开始荧光测定。

通过用荧光分光光度计测定探针加载线粒体的荧光值来确定离子浓度，最大激发波长分别为340和380nm，发射波长为509nm。所有的测定在25℃进行，3ml比色皿内含2ml线粒体悬浮液（0.5mg 蛋白/ml）。

Fig 1.Original record of an Mg2+ measurement with yeast mitochondria and of the calibration procedure. Mag‐fura 2 emission at a wavelength of 510 nm was measured upon excitation at 380 and 340 nm (standard excitation wavelength for the free mag‐fura 2 and for the ion‐bound mag‐fura 2, respectively). (A) Single wavelength fluorescence intensities of mag‐fura 2‐loaded yeast mitochondria as a function of time and [Mg2+]e. Measurements were started with mag‐fura 2‐loaded mitochondria in essentially Mg2+‐free buffer (see Materials and methods). Mg2+ was added to final concentrations of 1, 5 and 10 mM. [Mg2+]e was raised to 25 mM before the addition of SDS, resulting in Rmax, and the addition of EDTA led to Rmin values. Inset: autofluorescence of mag‐fura 2‐unloaded mitochondria. (B) The 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities shown in Figure 2A. Note that increases in the ratio are caused by an increase in the 340 nm intensity and a decrease in the 380 nm intensity, indicating that changes in the ratio are due in fact to alterations in the ratio of [Mg2+:mag‐fura 2]/[mag‐fura 2]. (C) Effect of an increase of the extramitochondrial [Ca2+] on the 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities.

Fura-FF AM , Cell Permeant 钙离子荧光探针

发表于2024年4月9日由上海金畔生物科技有限公司

Fura-FF AM；Fura-2 AM; Cal-520 AM; 钙离子荧光探针; Fluo-8 AM; Rhod-2 AM; Ionomycin离子霉素; CAS NO：348079-12-9；

产品信息

产品名称	产品编号	规格
Fura-FF AM , Cell Permeant 钙离子荧光探针	MX4538-500UG	10×50μg

产品描述

Fura-FF是钙离子指示剂Fura-2（货号：MX4502，MX4539）的二氟化衍生物。与Fura-2不同，Fura-FF对镁离子（Mg²⁺）基本不敏感，减少了该离子带来的测定干扰。Fura-FF比Fura-2，呈现出更高的钙离子解离常数（K_d=6μM versus 0.14μM）。然而，两者的光谱特征类似，体系不含钙离子时激发和发射波长是365/514nm，当体系含高浓度钙离子时激发和发射波长迁移到339/507nm。低亲和钙离子染料，包括：Fura-FF，更倾向于研究含高浓度钙离子的细胞器（比如：线粒体），或具相对较低钙离子缓冲能力的细胞系统，比如：神经元树突和神经树突棘。

Fura-FF AM是Fura-FF的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fura-FF，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。

运输：冰袋运输。

产品特性

1）CAS NO：348079-12-9

2）化学名：2-[6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-5-[2-[6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl] amino]-2,3-difluorophenoxy]ethoxy]-2-benzofuranyl]-5-oxazolecarboxylic acid(acetyloxy)methyl ester

3）同义名：Fura-2FF, AM; Fura-FF, Acetoxymethyl Ester;

4）分子式：C₄₃H₄₃F₂N₃O₂₄

5）分子量：1023.80

6）最大激发/发射波长：365/514 nm（Ca²⁺-free），339/507 nm（high Ca²⁺-bound）

7）溶解性：溶于DMSO（5mM）

8）化学结构式：

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2-7.4) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1）用无水DMSO溶解Fura-FF AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Fura-FF AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fura-FF AM中加入12.2µl 无水DMSO）。准备Fura-FF AM工作液之前，有时需要往Fura-FF AM储存液中加入适量的10% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

【注①】：Fura-FF AM染色工作液制备前，添加一定体积的10% Pluronic F-127溶液到Fura-FF AM + DMSO储存液，从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%。

2）用HHBS或其他生理缓冲液将 Fura-FF AM+DMSO储存液稀释到1-20µM的工作液。

【注①】：Fura-FF AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为2-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注②】：Fura-FF AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3）【可选】如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone， 0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

4）将准备好的Fura-FF AM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育20-120min。

【注①】：若使用含血清的培养基，血清内酯酶会降解AM，从而降低Fura-FF AM加载效果。而含酚红培养基会使本底值略偏高，建议加入染色工作液前，对细胞清洗2~3次。

【注③】：降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

5）吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6）室温再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7）用合适的激发/发射波长来检测荧光。

相关产品

货号	名称	规格
MX4504-50UG	Fluo-4, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯	50μg
MX4505-50UG	Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯	50μg
MX4538-500UG	Fura-FF AM , Cell Permeant 钙离子荧光探针	10×50μg
MX4540-100UG	Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针	2×50μg
MX4502-50UG	Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯	50μg
MX4507-50UG	Rhod-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯	50μg

Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

发表于2024年4月9日由上海金畔生物科技有限公司

Cal-590 AM; Cal-520 AM; 钙离子荧光探针; Fura-2 AM; Fluo-8 AM; Rhod-2 AM; Ionomycin, Free Base离子霉素;

产品信息

产品名称	产品编号	规格
Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针	MX4537-50UG	50μg
Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针	MX4537-100UG	2×50μg
Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针	MX4537-500UG	10×50μg

产品描述

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。

运输：冰袋运输。

产品特性

同义名：Cal-520, Acetoxymethyl Ester;	分子量：1102.95
解离常数：K_d=320 nM	溶解性：DMSO
Ex/Em：493/515

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2-7.4) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1）用无水DMSO溶解Cal-520 AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Cal-520 AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Cal-520 AM中加入11.3µl 无水DMSO）。

2）用HHBS或其他生理缓冲液将Cal-520 AM+DMSO储存液稀释到含0.04% Pluronic F-127的10-20µM染色工作液。

【注①】：添加一定量的20% Pluronic F-127溶液到Cal-520 AM+DMSO储存液，使Pluronic F-127的浓度约为0.04%。Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

【注②】：Cal-520 AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注③】：Cal-520 AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3）【可选】如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2mM）可能需要加入上述染色工作液内（在孔内的最终浓度为0.5-1mM），以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：我司提供多种丙磺舒：包括水溶性的丙磺舒（MZ8472-154MG），能降低有机溶剂的使用。

4）加入等体积的染色工作液到细胞培养孔内，37℃孵育60-90min。然后，室温再孵育30min。

【注①】：某些细胞系探针的加载时间长于2h能提供更好的信号。

5）吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6）之后在HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）中，用合适的激发/发射波长来检测荧光（见产品特性：Cal-520 AM的激发和发射光谱）。

附录I Cal-520，Cal-590或Cal-630钙离子探针的波长和钙离子结合特性

产品名称	产品编号	激发波长（nm）	发射波长（nm）	解离常数K_d（nM）
Cal-520	MX4537-50UG	492	514	320
Cal-590	MX4535-50UG	558	584	561
Cal-630	MX4536-50UG	607	623	792

Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

发表于2024年4月9日由上海金畔生物科技有限公司

Cal-590 AM; Cal-520 AM; 钙离子荧光探针; Fura-2 AM; Fluo-8 AM; Rhod-2 AM; Ionomycin, Free Base离子霉素;

产品信息

产品名称	产品编号	规格
Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针	MX4537-50UG	50μg
Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针	MX4537-100UG	2×50μg
Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针	MX4537-500UG	10×50μg

产品描述

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。

运输：冰袋运输。

产品特性

同义名：Cal-520, Acetoxymethyl Ester;	分子量：1102.95
解离常数：K_d=320 nM	溶解性：DMSO
Ex/Em：493/515

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2-7.4) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

2）用HHBS或其他生理缓冲液将Cal-520 AM+DMSO储存液稀释到含0.04% Pluronic F-127的10-20µM染色工作液。

【注③】：Cal-520 AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

【注①】：我司提供多种丙磺舒：包括水溶性的丙磺舒（MZ8472-154MG），能降低有机溶剂的使用。

4）加入等体积的染色工作液到细胞培养孔内，37℃孵育60-90min。然后，室温再孵育30min。

【注①】：某些细胞系探针的加载时间长于2h能提供更好的信号。

5）吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

附录I Cal-520，Cal-590或Cal-630钙离子探针的波长和钙离子结合特性

产品名称	产品编号	激发波长（nm）	发射波长（nm）	解离常数K_d（nM）
Cal-520	MX4537-50UG	492	514	320
Cal-590	MX4535-50UG	558	584	561
Cal-630	MX4536-50UG	607	623	792

Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

发表于2024年4月9日由上海金畔生物科技有限公司

Cal-590 AM; Cal-520 AM; 钙离子荧光探针; Fura-2 AM; Fluo-8 AM; Rhod-2 AM; Ionomycin, Free Base离子霉素;

产品信息

产品名称	产品编号	规格
Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针	MX4537-50UG	50μg
Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针	MX4537-100UG	2×50μg
Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针	MX4537-500UG	10×50μg

产品描述

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。

运输：冰袋运输。

产品特性

同义名：Cal-520, Acetoxymethyl Ester;	分子量：1102.95
解离常数：K_d=320 nM	溶解性：DMSO
Ex/Em：493/515

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2-7.4) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

2）用HHBS或其他生理缓冲液将Cal-520 AM+DMSO储存液稀释到含0.04% Pluronic F-127的10-20µM染色工作液。

【注③】：Cal-520 AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

【注①】：我司提供多种丙磺舒：包括水溶性的丙磺舒（MZ8472-154MG），能降低有机溶剂的使用。

4）加入等体积的染色工作液到细胞培养孔内，37℃孵育60-90min。然后，室温再孵育30min。

【注①】：某些细胞系探针的加载时间长于2h能提供更好的信号。

5）吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

附录I Cal-520，Cal-590或Cal-630钙离子探针的波长和钙离子结合特性

产品名称	产品编号	激发波长（nm）	发射波长（nm）	解离常数K_d（nM）
Cal-520	MX4537-50UG	492	514	320
Cal-590	MX4535-50UG	558	584	561
Cal-630	MX4536-50UG	607	623	792

Cal-630 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针

发表于2024年4月9日由上海金畔生物科技有限公司

Cal-630 AM;Cal-590 AM;Cal-520 AM;钙离子荧光探针; Fura-2 AM; Fluo-8 AM; Rhod-2 AM; Ionomycin, Free Base离子霉素;

产品信息

产品名称	产品编号	规格
Cal-630 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针	MX4536-50UG	50μg
Cal-630 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针	MX4536-100UG	2×50μg
Cal-630 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针	MX4536-500UG	10×50μg

产品描述

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。

运输：冰袋运输。

产品特性

同义名：Cal-630, Acetoxymethyl Ester;	分子量：1282.89
解离常数：Kd=792 nM	溶解性：DMSO
Ex/Em：609/626

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Cal-630, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4） Cal-630, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A，试剂准备

2） HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2-7.4)或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1）用无水DMSO溶解Cal-630 AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Cal-630 AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µgCal-630 AM中加入9.7µl无水DMSO）。

2）用HHBS或其他生理缓冲液将Cal-630 AM+DMSO储存液稀释到含0.04% Pluronic F-127的10-20µM染色工作液。

【注①】：添加一定量的20% Pluronic F-127溶液到Cal-630 AM+DMSO储存液，使Pluronic F-127的浓度约为0.04%。Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

【注②】：Cal-630 AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注③】：Cal-630 AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

【注①】：我司提供多种丙磺舒包括水溶性的丙磺舒（MZ8472-154MG），能降低有机溶剂的使用。

4）加入等体积的染色工作液到细胞培养孔内，37℃孵育60-90min。然后，室温再孵育30min。

【注①】：某些细胞系探针的加载时间长于2h能提供更好的信号。

5）吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6）之后在HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM丙磺舒的缓冲液）中，用合适的激发/发射波长来检测荧光（见产品特性：Cal-630 AM的激发和发射光谱）。

附录ICal-520，Cal-590或Cal-630钙离子探针的波长和钙离子结合特性

产品名称	产品编号	激发波长（nm）	发射波长（nm）	解离常数Kd（nM）
Cal-520	MX4537-50UG	492	514	320
Cal-590	MX4535-50UG	558	584	561
Cal-630	MX4536-50UG	607	623	792

Cal-630 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针

发表于2024年4月9日由上海金畔生物科技有限公司

Cal-630 AM;Cal-590 AM;Cal-520 AM;钙离子荧光探针; Fura-2 AM; Fluo-8 AM; Rhod-2 AM; Ionomycin, Free Base离子霉素;

产品信息

产品名称	产品编号	规格
Cal-630 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针	MX4536-50UG	50μg
Cal-630 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针	MX4536-100UG	2×50μg
Cal-630 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针	MX4536-500UG	10×50μg

产品描述

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。

运输：冰袋运输。

产品特性

同义名：Cal-630, Acetoxymethyl Ester;	分子量：1282.89
解离常数：Kd=792 nM	溶解性：DMSO
Ex/Em：609/626

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Cal-630, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A，试剂准备

2） HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2-7.4)或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

2）用HHBS或其他生理缓冲液将Cal-630 AM+DMSO储存液稀释到含0.04% Pluronic F-127的10-20µM染色工作液。

【注③】：Cal-630 AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

【注①】：我司提供多种丙磺舒包括水溶性的丙磺舒（MZ8472-154MG），能降低有机溶剂的使用。

4）加入等体积的染色工作液到细胞培养孔内，37℃孵育60-90min。然后，室温再孵育30min。

【注①】：某些细胞系探针的加载时间长于2h能提供更好的信号。

5）吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

附录ICal-520，Cal-590或Cal-630钙离子探针的波长和钙离子结合特性

产品名称	产品编号	激发波长（nm）	发射波长（nm）	解离常数Kd（nM）
Cal-520	MX4537-50UG	492	514	320
Cal-590	MX4535-50UG	558	584	561
Cal-630	MX4536-50UG	607	623	792

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Rhod-4, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

BCECF AM, Cell Permeant pH荧光探针

CAS NO：117464-70-7 BCECF AM, Cell Permeant pH荧光探针

CAS NO.：99590-86-0 EGTA AM, Calcium Chelator 钙螯合剂

BAPTA AM是一种选择性的钙螯合剂 CAS NO.：126150-97-8

CAS NO：149732-62-7 Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

Calcein Deep Red AM 钙黄绿素深红乙酰氧基甲酯

BAPTA AM是一种选择性的钙螯合剂，对Ca2+的选择性比Mg2+高100倍以上

PBFI AM ( K+ Indicator) 钾离子指示探针 Valinomycin 缬氨霉素，CAS NO：124549-23-1

Cal-590 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针 Ionomycin, Free Base离子霉素

CAS NO：168482-84-6 活细胞染色探针 Calcein Blue, AM 钙黄绿素蓝（蓝色）

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

Fura-FF AM , Cell Permeant 钙离子荧光探针

Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

Cal-520 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

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Cal-630 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针

Cal-630 AM, Cell Permeant钙离子荧光探针