标签归档：fura

Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

发表于由

描述

Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

 

搜索关键词：

Fura Red AM； Rhod-2, AM, Cell Permeant；Fluo-3, AM；可见光激发波长Ca2+荧光探针；Fluo-4；Fluo-8, AM；CAS NO：149732-62-7；

 

产品信息：

产品名称

 产品编号 规格 价格（元）

Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

 MX4540-100UG 2×50μg

982
Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针 MX4540-500UG 10×50μg

4282

 

基本介绍：

Fura Red是一种可见光激发的Fura-2类似物，提供独特的可能性使其与单波长激发、绿色荧光的钙离子探针（比如：Fluo-8）联合使用时，通过显微光度术、成像或流式细胞术来比率法测定单细胞内的Ca2+水平。Fura Red, AM是Fura Red的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fura Red，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。Fura Red, AM能够与Fluo-3 AM、Fluo-4 AM、Fluo-8 AM等同时加载进入细胞。两种钙离子探针结合使用的优势在于能用更长的激发波长。这比传统的紫外或近紫外激发的比率型探针对细胞造成更小的伤害，由于可见光波长对细胞的光毒性更小。Fura Red显著的斯托克斯位移使其能与荧光素或荧光素样的染料（使用单一激发波长）进行多色荧光检测。比如，研究者想同时测定单核细胞和粒细胞的钙流和氧化爆发，通过同时分析Fura Red和罗丹名123（二氢罗丹名123的氧化产物）的荧光值来满足目的。Fura Red也能与转染细胞内的蓝色荧光蛋白结合使用。

产品特性

1）CAS NO：149732-62-7

2）化学名：Glycine, N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-N-[5-[2-[2-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl] amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]-2-[(5-oxo-2-thioxo-4-imidazolidinylidene)methyl]-6-benzofuranyl]-, (acetyloxy)methyl ester

3）同义名：Fura Red, Acetoxymethyl Ester;

4）分子式：C47H52N4O24S

5）分子量：1088.99

6）化学结构式：

7）纯度：≥95% (HPLC)

8）最大激发/发射波长：471/652 nm（Ca2+-free），436/630 nm（Ca2+-bound）

9）溶解性：溶于DMSO（5mM）

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Fura Red, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4） Fura Red, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液： 称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-1G）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1） 用无水DMSO溶解Fura Red, AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Fura Red, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fura Red, AM中加入11.5µl 无水DMSO）。准备Fura Red, AM工作液之前，有时需要往Fura Red, AM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

2） 用HHBS或其他生理缓冲液将 Fura Red, AM+DMSO储存液稀释到1-20µM的工作液。

3） 【可选】如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone， 0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

4） 将准备好的Fura Red, AM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育20-120min。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 37℃再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7） 用合适的激发/发射波长来检测荧光（见附录I： Fura Red的激发和发射光谱）。

附录I Fura Red的激发和发射光

 

图：Fura Red在不含钙离子下的激发和发射光谱（上图）；Fura Red与钙离子结合后的激发和发射光谱（下图）。

 

 

 

Fura-2 Pentapotassium Salt, Cell Impermeant 钙离子荧光探针

发表于由

描述

Fura-2 Pentapotassium Salt, Cell Impermeant
钙离子荧光探针

 

 产品重要特征一览（金畔说说）
 ① 最经典且高亲和的钙离子荧光探针
 ② 紫外双激发比率型荧光探针（见附录图谱）
 ③ CAS NO.: 113694-64-7
 ④ 纯度：≥95%
 ⑤ 供货形式：固体，最大程度保证产品运输和保存稳定性。

 

搜索关键词：

Fura-2 salt 钙离子荧光探针；紫外光激发Ca2+荧光探针；比率测定型（ ratiometric fluorescent dye）；Fluo-3；Indo-1, AM；CAS NO：113694-64-7；

 

产品信息： 

产品名称 产品编号 规格 价格（元）
Fura-2 Pentapotassium Salt, Cell Impermeant MX4539-1MG 1mg 1652

【温馨提示】：见我司整理的钙离子荧光探针产品专题。

 

基本介绍：

Fura-2是一种常用的紫外光激发和比率测定型Ca2+荧光探针。一旦与Ca2+结合后，Fura-2的最大激发波长发生蓝色迁移，由原来的363nm（Ca2+-free）迁移到335nm（Ca2+-saturated），而最大发射波长基本未变化，保持在510nm左右。通常情况，分别用最大激发波长340nm和380nm来激发Fura-2，且用340/380nm激发下的荧光比值来检测细胞内Ca2+浓度。使用比值检测，可消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，探针的渗漏，细胞厚度差异等因素导致的检测误差。Fura-2自1985年合成以来，广泛用于各种细胞系统和生化用途，特别是数字显微成像。单波长检测，Fura-2与Ca2+结合后，推荐用最大激发和发射波长分别为340nm和510nm；双波长检测，则推荐用最大激发和发射波长分别为340/510nm和380/510nm；
Fura-2 Pentapotassium Salt是五钾盐形式的Fura-2，不具有细胞膜渗透性，溶于水。可通过微注射、膜片电极、划痕标记等方式加载进入细胞，从而检测胞内钙离子水平。

产品特性

1）CAS NO：113694-64-7

2）化学名：5-Oxazolecarboxylic acid, 2-(6-(bis(carboxymethyl)amino)-5-(2-(2-(bis(carboxymethyl)amino)-5- methylphenoxy)ethoxy)-2-benzofuranyl)-, pentapotassium salt

3）分子式：C29H22K5N3O14

4）分子量：832.00

5）纯度：≥95% (HPLC)

6）外观：浅黄色至黄色固体

7）最大激发/发射波长：363/512 nm（Ca2+-free），335/505 nm（Ca2+-saturated）

8）解离常数（Kd）：145nM

9）溶解性：溶于水

10）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

运输：冰袋运输。

使用方法

  1. 储存液制备

Fura-2 Pentapotassium Salt用生理缓冲液（pH＞6）配制成储存液后，置于2-8℃避光保存。建议三个月内使用完。不要冻存！

  1. 细胞加载（微注射和其它方法）

以下步骤仅做参考，需根据实际的操作系统进行优化。Fura-2 Salt可通过压力微注射的方式加载进入细胞。通常，使用1%细胞体积的溶液（染料浓度：3-30mM）足够。

附录I Fura-2的激发和发射光谱

图：Fura-2在不含钙离子下的激发和发射光谱（上图）；Fura-2与钙离子结合后的激发和发射光谱（下图）。

 

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

发表于由

描述

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针

 

订购信息：

                              产品名称           产品编号 规格 价格（元）
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-50UG    50μg 642
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-100UG    2×50μg 982
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-500UG    10×50μg 3382

 

产品描述

Mag-Fura-2 AM是一种胞内镁离子指示剂，属于紫外激发的比率型探针，与镁离子结合的Kd值为1.9mM。与Fura-2类似，Mag-Fura-2的激发波长历经蓝色迁移从369nm到330nm。Mag-Fura-2 AM具细胞膜渗透性，只需简单孵育，即可加载进入细胞。

 

产品特性

1） CAS NO.：130100-20-8

2） 化学名：5-Oxazolecarboxylic acid, 2-[5-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethoxy]-6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy] -2-oxoethyl]amino]-2-benzofuranyl]-(acetyloxy)methyl ester

3） 同义名：Furaptra, AM ester

4） 分子式：C30H30N2O19

5） 分子量：722.56g/mol

6） 外观：黄色固体

7） 纯度：≥90%

8） Ex/Em：336/503 nm

9） 溶解性：溶于DMSO

10） 化学结构式：

 

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

 

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法：

1.储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fura-2 AM,，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液，比如50μgMag-Fura-2 AM（Mw：722.56 g/mol）溶于13.8μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完。

 

2.操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。加载温度范围是RT~37℃，更高温度会提高加载速度，但更低温度能最小化染料的内在化现象。表面活性剂Pluronic®F-127有时加入能促进AM探针在水溶性缓冲液内的均匀分散。

2.1 在所需温度（25℃~37℃）预孵育细胞10min，使其离子梯度达到稳定和平衡。

2.2 取4μl Mag-Fura-2 AM储存液和5μl 20% Pluronic®F-127，加入1ml细胞培养液，剧烈漩涡混匀得到均匀的探针分散液。

2.3 取250μl上述制备的探针分散液加入750μl含细胞的培养基内，混匀，此时得到终浓度为1~5μM的工作液，根据起始母液浓度来确定。

2.4 根据需求探针孵育15~60min。

2.5 细胞清洗3次，之后继续孵育30min以保证细胞内的探针完全去酯化。之后选择合适的仪器，进行荧光测定。

 

3.响应校正

镁离子指示剂的校正方法基本与钙离子指示剂类似。需注意校正是在所有指示剂都已去酯化且都与离子结合的假设上进行。校正包括完全不含离子和离子完全饱和相对于外部控制镁离子浓度的荧光测定。胞内校正可能以两种方式进行，要么通过去污剂裂解细胞（通常使用地高辛）将胞内指示剂释放进入周围溶液，要么通过一种离子载体来控制胞内镁离子，不用释放指示剂到周围溶液。比率型指示剂比如Mag-Fura-2也可能在无细胞溶液内进行校正，虽然偏好选择原位校正，由于指示剂对镁离子的亲和性依赖于胞浆环境。相对于离子霉素（MZ2151-1MG），镁离子校正时倾向选择离子载体A-23187（MZ2153-1MG）和4-bromo-A23187（MZ2154-1MG），由于前者能更有效的转运镁离子。用来校正镁离子指示剂的溶液最初需不含重金属离子比如镁，否则会与镁离子指示剂结合。可通过二价阳离子螯合剂TPEN（MX4529-25MG）处理溶液。

 

3.1 对于具离子依赖性的光谱迁移的指示剂，比如Mag-Fura-2，Kd值（或Mg2+浓度，当Kd值已知）能通过以下公式进行换算：

 

R：代表荧光比值（Fλ1/Fλ2），λ1是离子复合物的检测波长，λ2是游离指示剂的检测波长。Min和Max表示最小和最大离子浓度。Q：λ2波长检测下的Fmin/Fmax的比值。Kd是离子-指示剂复合物的解离常数。

3.2 对于单波长指示剂比如Mag-Fluo-4，通过以下公式来确定Kd值，F指的是在单波长下测定的荧光强度。

 

在上述公式中，需注意F值依赖于指示剂浓度，但R值不依赖于指示剂浓度。

 

相关产品

货号 名称 规格
MS4301-1G Pluronic® F-127, Cell Culture Tested细胞培养级 1g
MS4302-1ML Pluronic® F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested 1ml
MX4541-1MG Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 1mg
MX4542-500UG Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4543-500UG Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4544-100UG Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 2×50μg
MS0049-5MG Valinomycin缬氨霉素 5mg
MZ2157-5MG Nigericin, Sodium Salt尼日利亚菌素（钠盐） 5mg
MZ8001-5MG Oligomycin (Mixture of A, B, C)寡霉素（A，B，C混合物） 5mg
MS0070-10MG Antimycin A抗霉素A 10mg
MZ2151-1MG Ionomycin, Free Base离子霉素（游离酸） 1mg
MZ2153-1MG Calcium Ionophore A23187钙离子载体 1mg
MZ2154-1MG Calcium Ionophore 4-bromo-A23187钙离子载体4-溴-A23187 1mg

 

 

应用示例（来自文献，仅用作参考）

文献一、Kolisek M et al. Mrs2p is an essential component of the major electrophoretic Mg2+ influx system in mitochondria. EMBO J. 2003 Mar 17;22(6):1235-44.

 

使用方法（荧光分光光度计测定[Mg2+]m和[Ca2+]m）：1）用DMSO配制Mag-fura 2 AM（0.5mM）或Fura 2 AM (0.5mM)储存液，工作浓度分别是5和10μM。2）线粒体分别加载Mag-fura 2 AM或Fura 2 AM测定游离线粒体内的Mg2+或Ca2+浓度，[Mg2+]m和[Ca2+]m。25℃，在SH缓冲液内分别用Mag-fura 2 AM（5μM）或Fura 2 AM（10μM），和5ul Pluronic F-127孵育线粒体（0.5mg/ml），35min。之后用SH缓冲液清洗线粒体2次以去除多余探针。最后，线粒体再孵育35min使得探针完全水解。之后清洗两次再开始荧光测定。

通过用荧光分光光度计测定探针加载线粒体的荧光值来确定离子浓度，最大激发波长分别为340和380nm，发射波长为509nm。所有的测定在25℃进行，3ml比色皿内含2ml线粒体悬浮液（0.5mg 蛋白/ml）。

 

 

 

Fig 1.Original record of an Mg2+ measurement with yeast mitochondria and of the calibration procedure. Mag‐fura 2 emission at a wavelength of 510 nm was measured upon excitation at 380 and 340 nm (standard excitation wavelength for the free mag‐fura 2 and for the ion‐bound mag‐fura 2, respectively). (A) Single wavelength fluorescence intensities of mag‐fura 2‐loaded yeast mitochondria as a function of time and [Mg2+]e. Measurements were started with mag‐fura 2‐loaded mitochondria in essentially Mg2+‐free buffer (see Materials and methods). Mg2+ was added to final concentrations of 1, 5 and 10 mM. [Mg2+]e was raised to 25 mM before the addition of SDS, resulting in Rmax, and the addition of EDTA led to Rmin values. Inset: autofluorescence of mag‐fura 2‐unloaded mitochondria. (B) The 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities shown in Figure 2A. Note that increases in the ratio are caused by an increase in the 340 nm intensity and a decrease in the 380 nm intensity, indicating that changes in the ratio are due in fact to alterations in the ratio of [Mg2+:mag‐fura 2]/[mag‐fura 2]. (C) Effect of an increase of the extramitochondrial [Ca2+] on the 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities.

 

——Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】

Fura-FF AM , Cell Permeant 钙离子荧光探针

发表于由

描述

Fura-FF AM , Cell Permeant 钙离子荧光探针

产品标签

Fura-FF AM；Fura-2 AM; Cal-520 AM; 钙离子荧光探针; Fluo-8 AM; Rhod-2 AM; Ionomycin离子霉素; CAS NO：348079-12-9；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 报价（元）
Fura-FF AM , Cell Permeant 钙离子荧光探针 MX4538-500UG 10×50μg 3382

产品描述

Fura-FF是钙离子指示剂Fura-2（货号：MX4502，MX4539）的二氟化衍生物。与Fura-2不同，Fura-FF对镁离子（Mg2+）基本不敏感，减少了该离子带来的测定干扰。Fura-FF比Fura-2，呈现出更高的钙离子解离常数（Kd=6μM versus 0.14μM）。然而，两者的光谱特征类似，体系不含钙离子时激发和发射波长是365/514nm，当体系含高浓度钙离子时激发和发射波长迁移到339/507nm。低亲和钙离子染料，包括：Fura-FF，更倾向于研究含高浓度钙离子的细胞器（比如：线粒体），或具相对较低钙离子缓冲能力的细胞系统，比如：神经元树突和神经树突棘。

Fura-FF AM是Fura-FF的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fura-FF，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

运输：冰袋运输。

产品特性

1）CAS NO：348079-12-9

2）化学名：2-[6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-5-[2-[6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl] amino]-2,3-difluorophenoxy]ethoxy]-2-benzofuranyl]-5-oxazolecarboxylic acid(acetyloxy)methyl ester

3）同义名：Fura-2FF, AM; Fura-FF, Acetoxymethyl Ester;

4）分子式：C43H43F2N3O24

5）分子量：1023.80

6）最大激发/发射波长：365/514 nm（Ca2+-free），339/507 nm（high Ca2+-bound）

7）溶解性：溶于DMSO（5mM）

8）化学结构式：

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液： 称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-1G）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2-7.4) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1） 用无水DMSO溶解Fura-FF AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Fura-FF AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fura-FF AM中加入12.2µl 无水DMSO）。准备Fura-FF AM工作液之前，有时需要往Fura-FF AM储存液中加入适量的10% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

【注①】：Fura-FF AM染色工作液制备前，添加一定体积的10% Pluronic F-127溶液到Fura-FF AM + DMSO储存液，从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%。

【注②】：Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

2） 用HHBS或其他生理缓冲液将 Fura-FF AM+DMSO储存液稀释到1-20µM的工作液。

【注①】：Fura-FF AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为2-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注②】：Fura-FF AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3） 【可选】如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone， 0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

4） 将准备好的Fura-FF AM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育20-120min。

【注①】：若使用含血清的培养基，血清内酯酶会降解AM，从而降低Fura-FF AM加载效果。而含酚红培养基会使本底值略偏高，建议加入染色工作液前，对细胞清洗2~3次。

【注②】：关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育30min，看荧光效果；如果细胞死亡较多，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。

【注③】：降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 室温再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7） 用合适的激发/发射波长来检测荧光。

相关产品

货号 名称 规格
MX4504-50UG Fluo-4, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯 50μg
MX4505-50UG Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯 50μg
MX4538-500UG Fura-FF AM , Cell Permeant 钙离子荧光探针 10×50μg
MX4540-100UG Fura Red, AM, Cell Permeant  钙离子荧光探针 2×50μg
MX4502-50UG Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯 50μg
MX4507-50UG Rhod-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯 50μg

 

 

 

Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

发表于由

描述

Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

（最经典的紫外激发比率型钙离子探针）

 

搜索关键词：

Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯；Fura-2, Acetoxymethyl Ester; 紫外光激发Ca2+荧光探针；比率测定型（ ratiometric fluorescent dye）；Fluo-3；Indo-1, AM；CAS NO：108964-32-5；

 

产品信息：现货供应，高纯品质。

产品名称

 产品编号 规格 价格（元）

Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

 MX4502-50UG 50μg 238
Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯 MX4502-250UG 5×50μg

828
Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯 MX4502-1MG 1mg

1758

【温馨提示】：见我司整理的钙离子荧光探针产品专题。

 

基本介绍：

Fura-2是一种常用的紫外光激发和比率测定型Ca2+荧光探针。一旦与Ca2+结合后，Fura-2的最大激发波长发生蓝色迁移，由原来的363nm（Ca2+-free）迁移到335nm（Ca2+-saturated），而最大发射波长基本未变化，保持在510nm左右。通常情况，分别用最大激发波长340nm和380nm来激发Fura-2，且用340/380nm激发下的荧光比值来检测细胞内Ca2+浓度。使用比值检测，可消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，探针的渗漏，细胞厚度差异等因素导致的检测误差。Fura-2自1985年合成以来，广泛用于各种细胞系统和生化用途，特别是数字显微成像。单波长检测，Fura-2与Ca2+结合后，推荐用最大激发和发射波长分别为340nm和510nm；双波长检测，则推荐用最大激发和发射波长分别为340nm和380nm；
Fura-2, AM是Fura-2的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fura-2，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以冻干粉的形式提供，使用时只需经无水DMSO充分溶解，配置成1~5mM的储存液，并稀释到合适的工作浓度即可。进行细胞内Ca2+检测，Fura-2, AM的常用浓度为0.5~5μM。

产品特性

CAS NO：108964-32-5
同义名：Fura-2, Acetoxymethyl Ester;
分子式：C44H47N3O24
分子量：1001.86
纯度：≥95% (HPLC)
外观：黄色粉末
最大激发/发射波长：363/512 nm（Ca2+-free），335/505 nm（Ca2+-saturated）
溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

Fura-2, AM激发光谱图

Description：Fluorescence excitation spectra of fura-2 (MX4502) in solutions containing 0–39.8 µM free Ca2+.

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Fura-2, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4） Fura-2, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5） Fura-2, AM具有相对较强的抗光淬灭能力，细胞孵育后1h内观察，都不会因荧光泄露和光漂白作用导致测定结果发生明显变化。

6） Fura-2不适合用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测，因很难用它们完成激发光谱的快速转换。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液： 称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1） 用无水DMSO溶解Fura-2, AM配制成1-5mM的储存液，或将已配好的Fura-2, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fura-2, AM中加入12.5µl 无水DMSO）。准备Fura-2, AM工作液之前，有时需要往Fura-2, AM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

【注①】：Fura-2, AM染色工作液制备前，添加等体积20% Pluronic F-127溶液到Fura-2, AM+DMSO储存液，从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%。

【注②】：Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

2） 用HHBS或其他生理缓冲液将 Fura-2, AM+DMSO储存液稀释到0.1-5µM的工作液。

【注①】：Fura-2, AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注②】：Fura-2, AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3） 【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone， 0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱，因此加入培养基后需要重新调整pH。

4） 将准备好的Fura-2, AM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。37℃孵育20-60min。

【注①】：若使用含血清的培养基，血清内酯酶会降解AM，从而降低Fura-2, AM加载效果。而含酚红培养基会使本底值略偏高，建议加入染色工作液前，对细胞清洗2~3次。

【注②】：关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育30min，看荧光效果；如果细胞死亡较多，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。

【注③】：降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如2.5mM丙磺酸的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 37℃再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7） 用荧光显微镜、荧光分光光度计或其他荧光检测设备，根据实验要求选择合适的波长进行检测。

 

Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

发表于由

描述

Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

 

搜索关键词：

Fura Red AM； Rhod-2, AM, Cell Permeant；Fluo-3, AM；可见光激发波长Ca2+荧光探针；Fluo-4；Fluo-8, AM；CAS NO：149732-62-7；

 

产品信息：

产品名称

 产品编号 规格 价格（元）

Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

 MX4540-100UG 2×50μg

982
Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针 MX4540-500UG 10×50μg

4282

 

基本介绍：

Fura Red是一种可见光激发的Fura-2类似物，提供独特的可能性使其与单波长激发、绿色荧光的钙离子探针（比如：Fluo-8）联合使用时，通过显微光度术、成像或流式细胞术来比率法测定单细胞内的Ca2+水平。Fura Red, AM是Fura Red的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fura Red，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。Fura Red, AM能够与Fluo-3 AM、Fluo-4 AM、Fluo-8 AM等同时加载进入细胞。两种钙离子探针结合使用的优势在于能用更长的激发波长。这比传统的紫外或近紫外激发的比率型探针对细胞造成更小的伤害，由于可见光波长对细胞的光毒性更小。Fura Red显著的斯托克斯位移使其能与荧光素或荧光素样的染料（使用单一激发波长）进行多色荧光检测。比如，研究者想同时测定单核细胞和粒细胞的钙流和氧化爆发，通过同时分析Fura Red和罗丹名123（二氢罗丹名123的氧化产物）的荧光值来满足目的。Fura Red也能与转染细胞内的蓝色荧光蛋白结合使用。

产品特性

1）CAS NO：149732-62-7

2）化学名：Glycine, N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-N-[5-[2-[2-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl] amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]-2-[(5-oxo-2-thioxo-4-imidazolidinylidene)methyl]-6-benzofuranyl]-, (acetyloxy)methyl ester

3）同义名：Fura Red, Acetoxymethyl Ester;

4）分子式：C47H52N4O24S

5）分子量：1088.99

6）化学结构式：

7）纯度：≥95% (HPLC)

8）最大激发/发射波长：471/652 nm（Ca2+-free），436/630 nm（Ca2+-bound）

9）溶解性：溶于DMSO（5mM）

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Fura Red, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4） Fura Red, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液： 称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-1G）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1） 用无水DMSO溶解Fura Red, AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Fura Red, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fura Red, AM中加入11.5µl 无水DMSO）。准备Fura Red, AM工作液之前，有时需要往Fura Red, AM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

2） 用HHBS或其他生理缓冲液将 Fura Red, AM+DMSO储存液稀释到1-20µM的工作液。

3） 【可选】如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone， 0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

4） 将准备好的Fura Red, AM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育20-120min。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 37℃再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7） 用合适的激发/发射波长来检测荧光（见附录I： Fura Red的激发和发射光谱）。

附录I Fura Red的激发和发射光

 

图：Fura Red在不含钙离子下的激发和发射光谱（上图）；Fura Red与钙离子结合后的激发和发射光谱（下图）。

 

 

 

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

发表于由

描述

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针

 

订购信息：

                              产品名称           产品编号 规格 价格（元）
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-50UG    50μg 642
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-100UG    2×50μg 982
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-500UG    10×50μg 3382

 

产品描述

Mag-Fura-2 AM是一种胞内镁离子指示剂，属于紫外激发的比率型探针，与镁离子结合的Kd值为1.9mM。与Fura-2类似，Mag-Fura-2的激发波长历经蓝色迁移从369nm到330nm。Mag-Fura-2 AM具细胞膜渗透性，只需简单孵育，即可加载进入细胞。

 

产品特性

1） CAS NO.：130100-20-8

2） 化学名：5-Oxazolecarboxylic acid, 2-[5-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethoxy]-6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy] -2-oxoethyl]amino]-2-benzofuranyl]-(acetyloxy)methyl ester

3） 同义名：Furaptra, AM ester

4） 分子式：C30H30N2O19

5） 分子量：722.56g/mol

6） 外观：黄色固体

7） 纯度：≥90%

8） Ex/Em：336/503 nm

9） 溶解性：溶于DMSO

10） 化学结构式：

 

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

 

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法：

1.储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fura-2 AM,，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液，比如50μgMag-Fura-2 AM（Mw：722.56 g/mol）溶于13.8μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完。

 

2.操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。加载温度范围是RT~37℃，更高温度会提高加载速度，但更低温度能最小化染料的内在化现象。表面活性剂Pluronic®F-127有时加入能促进AM探针在水溶性缓冲液内的均匀分散。

2.1 在所需温度（25℃~37℃）预孵育细胞10min，使其离子梯度达到稳定和平衡。

2.2 取4μl Mag-Fura-2 AM储存液和5μl 20% Pluronic®F-127，加入1ml细胞培养液，剧烈漩涡混匀得到均匀的探针分散液。

2.3 取250μl上述制备的探针分散液加入750μl含细胞的培养基内，混匀，此时得到终浓度为1~5μM的工作液，根据起始母液浓度来确定。

2.4 根据需求探针孵育15~60min。

2.5 细胞清洗3次，之后继续孵育30min以保证细胞内的探针完全去酯化。之后选择合适的仪器，进行荧光测定。

 

3.响应校正

镁离子指示剂的校正方法基本与钙离子指示剂类似。需注意校正是在所有指示剂都已去酯化且都与离子结合的假设上进行。校正包括完全不含离子和离子完全饱和相对于外部控制镁离子浓度的荧光测定。胞内校正可能以两种方式进行，要么通过去污剂裂解细胞（通常使用地高辛）将胞内指示剂释放进入周围溶液，要么通过一种离子载体来控制胞内镁离子，不用释放指示剂到周围溶液。比率型指示剂比如Mag-Fura-2也可能在无细胞溶液内进行校正，虽然偏好选择原位校正，由于指示剂对镁离子的亲和性依赖于胞浆环境。相对于离子霉素（MZ2151-1MG），镁离子校正时倾向选择离子载体A-23187（MZ2153-1MG）和4-bromo-A23187（MZ2154-1MG），由于前者能更有效的转运镁离子。用来校正镁离子指示剂的溶液最初需不含重金属离子比如镁，否则会与镁离子指示剂结合。可通过二价阳离子螯合剂TPEN（MX4529-25MG）处理溶液。

 

3.1 对于具离子依赖性的光谱迁移的指示剂，比如Mag-Fura-2，Kd值（或Mg2+浓度，当Kd值已知）能通过以下公式进行换算：

 

R：代表荧光比值（Fλ1/Fλ2），λ1是离子复合物的检测波长，λ2是游离指示剂的检测波长。Min和Max表示最小和最大离子浓度。Q：λ2波长检测下的Fmin/Fmax的比值。Kd是离子-指示剂复合物的解离常数。

3.2 对于单波长指示剂比如Mag-Fluo-4，通过以下公式来确定Kd值，F指的是在单波长下测定的荧光强度。

 

在上述公式中，需注意F值依赖于指示剂浓度，但R值不依赖于指示剂浓度。

 

相关产品

货号 名称 规格
MS4301-1G Pluronic® F-127, Cell Culture Tested细胞培养级 1g
MS4302-1ML Pluronic® F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested 1ml
MX4541-1MG Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 1mg
MX4542-500UG Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4543-500UG Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4544-100UG Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 2×50μg
MS0049-5MG Valinomycin缬氨霉素 5mg
MZ2157-5MG Nigericin, Sodium Salt尼日利亚菌素（钠盐） 5mg
MZ8001-5MG Oligomycin (Mixture of A, B, C)寡霉素（A，B，C混合物） 5mg
MS0070-10MG Antimycin A抗霉素A 10mg
MZ2151-1MG Ionomycin, Free Base离子霉素（游离酸） 1mg
MZ2153-1MG Calcium Ionophore A23187钙离子载体 1mg
MZ2154-1MG Calcium Ionophore 4-bromo-A23187钙离子载体4-溴-A23187 1mg

 

 

应用示例（来自文献，仅用作参考）

文献一、Kolisek M et al. Mrs2p is an essential component of the major electrophoretic Mg2+ influx system in mitochondria. EMBO J. 2003 Mar 17;22(6):1235-44.

 

使用方法（荧光分光光度计测定[Mg2+]m和[Ca2+]m）：1）用DMSO配制Mag-fura 2 AM（0.5mM）或Fura 2 AM (0.5mM)储存液，工作浓度分别是5和10μM。2）线粒体分别加载Mag-fura 2 AM或Fura 2 AM测定游离线粒体内的Mg2+或Ca2+浓度，[Mg2+]m和[Ca2+]m。25℃，在SH缓冲液内分别用Mag-fura 2 AM（5μM）或Fura 2 AM（10μM），和5ul Pluronic F-127孵育线粒体（0.5mg/ml），35min。之后用SH缓冲液清洗线粒体2次以去除多余探针。最后，线粒体再孵育35min使得探针完全水解。之后清洗两次再开始荧光测定。

通过用荧光分光光度计测定探针加载线粒体的荧光值来确定离子浓度，最大激发波长分别为340和380nm，发射波长为509nm。所有的测定在25℃进行，3ml比色皿内含2ml线粒体悬浮液（0.5mg 蛋白/ml）。

 

 

 

Fig 1.Original record of an Mg2+ measurement with yeast mitochondria and of the calibration procedure. Mag‐fura 2 emission at a wavelength of 510 nm was measured upon excitation at 380 and 340 nm (standard excitation wavelength for the free mag‐fura 2 and for the ion‐bound mag‐fura 2, respectively). (A) Single wavelength fluorescence intensities of mag‐fura 2‐loaded yeast mitochondria as a function of time and [Mg2+]e. Measurements were started with mag‐fura 2‐loaded mitochondria in essentially Mg2+‐free buffer (see Materials and methods). Mg2+ was added to final concentrations of 1, 5 and 10 mM. [Mg2+]e was raised to 25 mM before the addition of SDS, resulting in Rmax, and the addition of EDTA led to Rmin values. Inset: autofluorescence of mag‐fura 2‐unloaded mitochondria. (B) The 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities shown in Figure 2A. Note that increases in the ratio are caused by an increase in the 340 nm intensity and a decrease in the 380 nm intensity, indicating that changes in the ratio are due in fact to alterations in the ratio of [Mg2+:mag‐fura 2]/[mag‐fura 2]. (C) Effect of an increase of the extramitochondrial [Ca2+] on the 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities.

 

——Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

发表于由

描述

Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针

 

订购信息：

                              产品名称           产品编号 规格 价格（元）
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-50UG    50μg 642
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-100UG    2×50μg 982
    Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针         MX4542-500UG    10×50μg 3382

 

产品描述

Mag-Fura-2 AM是一种胞内镁离子指示剂，属于紫外激发的比率型探针，与镁离子结合的Kd值为1.9mM。与Fura-2类似，Mag-Fura-2的激发波长历经蓝色迁移从369nm到330nm。Mag-Fura-2 AM具细胞膜渗透性，只需简单孵育，即可加载进入细胞。

 

产品特性

1） CAS NO.：130100-20-8

2） 化学名：5-Oxazolecarboxylic acid, 2-[5-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethoxy]-6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy] -2-oxoethyl]amino]-2-benzofuranyl]-(acetyloxy)methyl ester

3） 同义名：Furaptra, AM ester

4） 分子式：C30H30N2O19

5） 分子量：722.56g/mol

6） 外观：黄色固体

7） 纯度：≥90%

8） Ex/Em：336/503 nm

9） 溶解性：溶于DMSO

10） 化学结构式：

 

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

 

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法：

1.储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fura-2 AM,，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液，比如50μgMag-Fura-2 AM（Mw：722.56 g/mol）溶于13.8μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完。

 

2.操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。加载温度范围是RT~37℃，更高温度会提高加载速度，但更低温度能最小化染料的内在化现象。表面活性剂Pluronic®F-127有时加入能促进AM探针在水溶性缓冲液内的均匀分散。

2.1 在所需温度（25℃~37℃）预孵育细胞10min，使其离子梯度达到稳定和平衡。

2.2 取4μl Mag-Fura-2 AM储存液和5μl 20% Pluronic®F-127，加入1ml细胞培养液，剧烈漩涡混匀得到均匀的探针分散液。

2.3 取250μl上述制备的探针分散液加入750μl含细胞的培养基内，混匀，此时得到终浓度为1~5μM的工作液，根据起始母液浓度来确定。

2.4 根据需求探针孵育15~60min。

2.5 细胞清洗3次，之后继续孵育30min以保证细胞内的探针完全去酯化。之后选择合适的仪器，进行荧光测定。

 

3.响应校正

镁离子指示剂的校正方法基本与钙离子指示剂类似。需注意校正是在所有指示剂都已去酯化且都与离子结合的假设上进行。校正包括完全不含离子和离子完全饱和相对于外部控制镁离子浓度的荧光测定。胞内校正可能以两种方式进行，要么通过去污剂裂解细胞（通常使用地高辛）将胞内指示剂释放进入周围溶液，要么通过一种离子载体来控制胞内镁离子，不用释放指示剂到周围溶液。比率型指示剂比如Mag-Fura-2也可能在无细胞溶液内进行校正，虽然偏好选择原位校正，由于指示剂对镁离子的亲和性依赖于胞浆环境。相对于离子霉素（MZ2151-1MG），镁离子校正时倾向选择离子载体A-23187（MZ2153-1MG）和4-bromo-A23187（MZ2154-1MG），由于前者能更有效的转运镁离子。用来校正镁离子指示剂的溶液最初需不含重金属离子比如镁，否则会与镁离子指示剂结合。可通过二价阳离子螯合剂TPEN（MX4529-25MG）处理溶液。

 

3.1 对于具离子依赖性的光谱迁移的指示剂，比如Mag-Fura-2，Kd值（或Mg2+浓度，当Kd值已知）能通过以下公式进行换算：

 

R：代表荧光比值（Fλ1/Fλ2），λ1是离子复合物的检测波长，λ2是游离指示剂的检测波长。Min和Max表示最小和最大离子浓度。Q：λ2波长检测下的Fmin/Fmax的比值。Kd是离子-指示剂复合物的解离常数。

3.2 对于单波长指示剂比如Mag-Fluo-4，通过以下公式来确定Kd值，F指的是在单波长下测定的荧光强度。

 

在上述公式中，需注意F值依赖于指示剂浓度，但R值不依赖于指示剂浓度。

 

相关产品

货号 名称 规格
MS4301-1G Pluronic® F-127, Cell Culture Tested细胞培养级 1g
MS4302-1ML Pluronic® F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested 1ml
MX4541-1MG Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 1mg
MX4542-500UG Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4543-500UG Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4544-100UG Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 2×50μg
MS0049-5MG Valinomycin缬氨霉素 5mg
MZ2157-5MG Nigericin, Sodium Salt尼日利亚菌素（钠盐） 5mg
MZ8001-5MG Oligomycin (Mixture of A, B, C)寡霉素（A，B，C混合物） 5mg
MS0070-10MG Antimycin A抗霉素A 10mg
MZ2151-1MG Ionomycin, Free Base离子霉素（游离酸） 1mg
MZ2153-1MG Calcium Ionophore A23187钙离子载体 1mg
MZ2154-1MG Calcium Ionophore 4-bromo-A23187钙离子载体4-溴-A23187 1mg

 

 

应用示例（来自文献，仅用作参考）

文献一、Kolisek M et al. Mrs2p is an essential component of the major electrophoretic Mg2+ influx system in mitochondria. EMBO J. 2003 Mar 17;22(6):1235-44.

 

使用方法（荧光分光光度计测定[Mg2+]m和[Ca2+]m）：1）用DMSO配制Mag-fura 2 AM（0.5mM）或Fura 2 AM (0.5mM)储存液，工作浓度分别是5和10μM。2）线粒体分别加载Mag-fura 2 AM或Fura 2 AM测定游离线粒体内的Mg2+或Ca2+浓度，[Mg2+]m和[Ca2+]m。25℃，在SH缓冲液内分别用Mag-fura 2 AM（5μM）或Fura 2 AM（10μM），和5ul Pluronic F-127孵育线粒体（0.5mg/ml），35min。之后用SH缓冲液清洗线粒体2次以去除多余探针。最后，线粒体再孵育35min使得探针完全水解。之后清洗两次再开始荧光测定。

通过用荧光分光光度计测定探针加载线粒体的荧光值来确定离子浓度，最大激发波长分别为340和380nm，发射波长为509nm。所有的测定在25℃进行，3ml比色皿内含2ml线粒体悬浮液（0.5mg 蛋白/ml）。

 

 

 

Fig 1.Original record of an Mg2+ measurement with yeast mitochondria and of the calibration procedure. Mag‐fura 2 emission at a wavelength of 510 nm was measured upon excitation at 380 and 340 nm (standard excitation wavelength for the free mag‐fura 2 and for the ion‐bound mag‐fura 2, respectively). (A) Single wavelength fluorescence intensities of mag‐fura 2‐loaded yeast mitochondria as a function of time and [Mg2+]e. Measurements were started with mag‐fura 2‐loaded mitochondria in essentially Mg2+‐free buffer (see Materials and methods). Mg2+ was added to final concentrations of 1, 5 and 10 mM. [Mg2+]e was raised to 25 mM before the addition of SDS, resulting in Rmax, and the addition of EDTA led to Rmin values. Inset: autofluorescence of mag‐fura 2‐unloaded mitochondria. (B) The 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities shown in Figure 2A. Note that increases in the ratio are caused by an increase in the 340 nm intensity and a decrease in the 380 nm intensity, indicating that changes in the ratio are due in fact to alterations in the ratio of [Mg2+:mag‐fura 2]/[mag‐fura 2]. (C) Effect of an increase of the extramitochondrial [Ca2+] on the 340/380 nm ratio of the fluorescence intensities.

 

——Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】

Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant 镁离子荧光探针

发表于由

描述

Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant

镁离子荧光探针

 

 

订购信息：

产品名称

 产品编号 规格   

价格（元）  
Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant MX4541-1MG 1mg 3382

 

产品描述

Mag-Fura-2四钾盐（Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt）是一种胞内镁离子指示剂，属于紫外激发的比率型探针，与镁离子结合的Kd值为1.9mM。与Fura-2类似，Mag-Fura-2的激发波长历经蓝色迁移从369nm到330nm。Mag-Fura-2四钾盐具水溶性，不具细胞膜渗透性，能通过显微注射或膜片钳灌注加载进入胞内。

 

 产品特性

1） CAS NO.：132319-57-4

2） 化学名：5-Oxazolecarboxylic acid, 2-[6-[bis(carboxymethyl)amino]-5-(carboxymethoxy)-2-benzofuranyl]-, tetrapotassium salt

3） 同义名：Furaptra,Tetrapotassium Salt;Mag-Fura-2四钾盐；Furaptra四钾盐；

4） 分子式：C18H10K4N2O11

5） 分子量：586.68g/mol

6） 外观：黄色固体

8） Ex/Em：336/503 nm

9） 溶解性：溶于水

10） 化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fura-2四钾盐,，置于室温回温至少20min。之后加入适量蒸馏水或水溶性缓冲液配制成相应浓度的储存液。未使用的储存液分装储存在-20℃，且避光保存。至少能稳定保存6个月。

相关产品

货号 名称 规格
MS4301-1G Pluronic® F-127, Cell Culture Tested细胞培养级 1g
MS4302-1ML Pluronic® F-127 (20% Solution in DMSO), Cell Culture Tested 1ml
MX4541-1MG Mag-Fura-2 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 1mg
MX4542-500UG Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4543-500UG Mag-Fluo-4 Tetrapotassium Salt, Cell Impermeant镁离子荧光探针 10×50μg
MX4544-100UG Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 2×50μg
MS0049-5MG Valinomycin缬氨霉素 5mg
MZ2157-5MG Nigericin, Sodium Salt尼日利亚菌素（钠盐） 5mg
MZ8001-5MG Oligomycin (Mixture of A, B, C)寡霉素（A，B，C混合物） 5mg
MS0070-10MG Antimycin A抗霉素A 10mg
MZ2151-1MG Ionomycin, Free Base离子霉素（游离酸） 1mg
MZ2153-1MG Calcium Ionophore A23187钙离子载体 1mg
MZ2154-1MG Calcium Ionophore 4-bromo-A23187钙离子载体4-溴-A23187 1mg

——Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio金畔所有】

Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

发表于由

描述

Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

（最经典的紫外激发比率型钙离子探针）

 

搜索关键词：

Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯；Fura-2, Acetoxymethyl Ester; 紫外光激发Ca2+荧光探针；比率测定型（ ratiometric fluorescent dye）；Fluo-3；Indo-1, AM；CAS NO：108964-32-5；

 

产品信息：现货供应，高纯品质。

产品名称

 产品编号 规格 价格（元）

Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

 MX4502-50UG 50μg 238
Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯 MX4502-250UG 5×50μg

828
Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯 MX4502-1MG 1mg

1758

【温馨提示】：见我司整理的钙离子荧光探针产品专题。

 

基本介绍：

Fura-2是一种常用的紫外光激发和比率测定型Ca2+荧光探针。一旦与Ca2+结合后，Fura-2的最大激发波长发生蓝色迁移，由原来的363nm（Ca2+-free）迁移到335nm（Ca2+-saturated），而最大发射波长基本未变化，保持在510nm左右。通常情况，分别用最大激发波长340nm和380nm来激发Fura-2，且用340/380nm激发下的荧光比值来检测细胞内Ca2+浓度。使用比值检测，可消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，探针的渗漏，细胞厚度差异等因素导致的检测误差。Fura-2自1985年合成以来，广泛用于各种细胞系统和生化用途，特别是数字显微成像。单波长检测，Fura-2与Ca2+结合后，推荐用最大激发和发射波长分别为340nm和510nm；双波长检测，则推荐用最大激发和发射波长分别为340nm和380nm；
Fura-2, AM是Fura-2的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fura-2，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以冻干粉的形式提供，使用时只需经无水DMSO充分溶解，配置成1~5mM的储存液，并稀释到合适的工作浓度即可。进行细胞内Ca2+检测，Fura-2, AM的常用浓度为0.5~5μM。

产品特性

CAS NO：108964-32-5
同义名：Fura-2, Acetoxymethyl Ester;
分子式：C44H47N3O24
分子量：1001.86
纯度：≥95% (HPLC)
外观：黄色粉末
最大激发/发射波长：363/512 nm（Ca2+-free），335/505 nm（Ca2+-saturated）
溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

Fura-2, AM激发光谱图

Description：Fluorescence excitation spectra of fura-2 (MX4502) in solutions containing 0–39.8 µM free Ca2+.

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Fura-2, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4） Fura-2, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5） Fura-2, AM具有相对较强的抗光淬灭能力，细胞孵育后1h内观察，都不会因荧光泄露和光漂白作用导致测定结果发生明显变化。

6） Fura-2不适合用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测，因很难用它们完成激发光谱的快速转换。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液： 称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1） 用无水DMSO溶解Fura-2, AM配制成1-5mM的储存液，或将已配好的Fura-2, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fura-2, AM中加入12.5µl 无水DMSO）。准备Fura-2, AM工作液之前，有时需要往Fura-2, AM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

【注①】：Fura-2, AM染色工作液制备前，添加等体积20% Pluronic F-127溶液到Fura-2, AM+DMSO储存液，从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%。

【注②】：Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

2） 用HHBS或其他生理缓冲液将 Fura-2, AM+DMSO储存液稀释到0.1-5µM的工作液。

【注①】：Fura-2, AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注②】：Fura-2, AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3） 【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone， 0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱，因此加入培养基后需要重新调整pH。

4） 将准备好的Fura-2, AM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。37℃孵育20-60min。

【注①】：若使用含血清的培养基，血清内酯酶会降解AM，从而降低Fura-2, AM加载效果。而含酚红培养基会使本底值略偏高，建议加入染色工作液前，对细胞清洗2~3次。

【注②】：关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育30min，看荧光效果；如果细胞死亡较多，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。

【注③】：降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如2.5mM丙磺酸的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 37℃再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7） 用荧光显微镜、荧光分光光度计或其他荧光检测设备，根据实验要求选择合适的波长进行检测。

 

Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

发表于由

描述

Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

（最经典的紫外激发比率型钙离子探针）

 

搜索关键词：

Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯；Fura-2, Acetoxymethyl Ester; 紫外光激发Ca2+荧光探针；比率测定型（ ratiometric fluorescent dye）；Fluo-3；Indo-1, AM；CAS NO：108964-32-5；

 

产品信息：现货供应，高纯品质。

产品名称

 产品编号 规格 价格（元）

Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

 MX4502-50UG 50μg 238
Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯 MX4502-250UG 5×50μg

828
Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯 MX4502-1MG 1mg

1758

【温馨提示】：见我司整理的钙离子荧光探针产品专题。

 

基本介绍：

Fura-2是一种常用的紫外光激发和比率测定型Ca2+荧光探针。一旦与Ca2+结合后，Fura-2的最大激发波长发生蓝色迁移，由原来的363nm（Ca2+-free）迁移到335nm（Ca2+-saturated），而最大发射波长基本未变化，保持在510nm左右。通常情况，分别用最大激发波长340nm和380nm来激发Fura-2，且用340/380nm激发下的荧光比值来检测细胞内Ca2+浓度。使用比值检测，可消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，探针的渗漏，细胞厚度差异等因素导致的检测误差。Fura-2自1985年合成以来，广泛用于各种细胞系统和生化用途，特别是数字显微成像。单波长检测，Fura-2与Ca2+结合后，推荐用最大激发和发射波长分别为340nm和510nm；双波长检测，则推荐用最大激发和发射波长分别为340nm和380nm；
Fura-2, AM是Fura-2的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fura-2，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以冻干粉的形式提供，使用时只需经无水DMSO充分溶解，配置成1~5mM的储存液，并稀释到合适的工作浓度即可。进行细胞内Ca2+检测，Fura-2, AM的常用浓度为0.5~5μM。

产品特性

CAS NO：108964-32-5
同义名：Fura-2, Acetoxymethyl Ester;
分子式：C44H47N3O24
分子量：1001.86
纯度：≥95% (HPLC)
外观：黄色粉末
最大激发/发射波长：363/512 nm（Ca2+-free），335/505 nm（Ca2+-saturated）
溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

Fura-2, AM激发光谱图

Description：Fluorescence excitation spectra of fura-2 (MX4502) in solutions containing 0–39.8 µM free Ca2+.

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Fura-2, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4） Fura-2, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5） Fura-2, AM具有相对较强的抗光淬灭能力，细胞孵育后1h内观察，都不会因荧光泄露和光漂白作用导致测定结果发生明显变化。

6） Fura-2不适合用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测，因很难用它们完成激发光谱的快速转换。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液： 称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1） 用无水DMSO溶解Fura-2, AM配制成1-5mM的储存液，或将已配好的Fura-2, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fura-2, AM中加入12.5µl 无水DMSO）。准备Fura-2, AM工作液之前，有时需要往Fura-2, AM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

【注①】：Fura-2, AM染色工作液制备前，添加等体积20% Pluronic F-127溶液到Fura-2, AM+DMSO储存液，从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%。

【注②】：Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

2） 用HHBS或其他生理缓冲液将 Fura-2, AM+DMSO储存液稀释到0.1-5µM的工作液。

【注①】：Fura-2, AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注②】：Fura-2, AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3） 【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone， 0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱，因此加入培养基后需要重新调整pH。

4） 将准备好的Fura-2, AM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。37℃孵育20-60min。

【注①】：若使用含血清的培养基，血清内酯酶会降解AM，从而降低Fura-2, AM加载效果。而含酚红培养基会使本底值略偏高，建议加入染色工作液前，对细胞清洗2~3次。

【注②】：关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育30min，看荧光效果；如果细胞死亡较多，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。

【注③】：降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如2.5mM丙磺酸的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 37℃再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7） 用荧光显微镜、荧光分光光度计或其他荧光检测设备，根据实验要求选择合适的波长进行检测。