描述

Lipo2000 Transfection Reagent 脂质体转染试剂

产品信息

产品描述

Lipo2000脂质体转染试剂（Lipo2000 Transfection Reagent）是一款多用途转染试剂，适用于核酸（DNA、RNA）的转染，能在绝大多数贴壁和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）提供高效转染。独特的配方使其能直接加入培养基，血清的存在不会影响转染效率。转染后无需去除DNA- Lipo2000复合物或更换培养基，也可根据自身需求在转染4-6h后更换新鲜培养基。

本品以无菌液体形式提供，浓度为1mg/ml。其使用方法和Lipofectamine™ 2000 Transfection Reagent基本一致，并且经过对HEK293、HeLa等细胞的转染测试，转染效率和Lipofectamine™ 2000相当。

通常情况下，对于24孔板的DNA转染，每次用2μl左右，则1.5mlLipo2000约可转染750个孔；对于24孔板的siRNA转染，每次用1μl左右，则1.5mlLipo2000约可转染1500个孔；

保存与运输方法

保存：+4℃保存，1年有效。切勿冻存。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）使用高纯的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，内毒素是影响转染效率高低的重要因素。

2）使用Lipo2000脂质体转染试剂需确保高细胞密度，建议转染时细胞密度达90-95%，有助于获得最高转染效率和表达水平，且能最小化高转染活性导致的细胞生长降低影响。可通过优化实验条件来降低细胞密度，但需注意不同实验间维持一个标准的接种步骤，因转染效率依赖于细胞培养密度。

3）转染过程中不要添加抗生素到培养基，否则会导致细胞死亡。

4）为了获得最佳的转染效率，制备转染复合物时要求用无血清培养基（比如Opti-MEM I）稀释DNA和转染试剂，因血清会影响复合物的形成。其他无血清培养基（比如DMEM）也能用来稀释DNA和转染试剂，但转染效率有可能会降低。另外，需要特别注意某些无血清配方会抑制Lipo2000介导的转染，比如CD293, SFMII, VP-SFM等。

5）初次使用制备复合物时，最好优化DNA（µg）和Lipo2000脂质体转染试剂（µl）的比例。DNA和Lipo2000的比例，绝大多数细胞系通常推荐1:2-1:3，比如：24孔板内接种0.5-2×105个细胞，使用0.8-1µg DNA和2-3µL Lipo2000。通过调整DNA/ Lipo2000优化转染效率很有必要。

6）Lipo2000脂质体转染试剂应该在4℃保存，不可冻存。使用后立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，否则有可能导致脂质体氧化而影响转染效率。

7）Lipo2000脂质体转染试剂不能涡旋或离心，宜缓慢晃动混匀。

8）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

转染步骤（以质粒DNA的24孔板为例）

【注意】：对大多数细胞来说，DNA（µg）和Lipo2000（µl）的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。

1. 细胞准备

1）贴壁细胞：转染前一天，用500 µl不含抗生素的培养基接种细胞，使之在转染时细胞达90-95%汇合（0.5~2×105 细胞/个孔，24孔板）。

2）悬浮细胞：转染当天，于准备DNA-Lipo2000复合物之前，用500µl不含抗生素的培养基接种4~8×105细胞即可。

2.按照以下体系配制DNA- Lipo2000脂质体转染试剂复合物：

1）对于每孔细胞，在EP管内分别加入50µl无血清培养基（比如Opti-MEM™ I Reduced Serum Medium）和0.8 µg DNA轻柔混匀，制成DNA稀释液。

2）对于每孔细胞，在EP管内分别加入50µl无血清培养基（比如Opti-MEM™ I Reduced Serum Medium）和2.0 µl Lipo2000（注意用前先混匀），轻柔混匀，制成Lipo2000稀释液，室温静置5min。【注意】：需要在30min内混合稀释的DNA和Lipo2000，更长的等待时间会降低活性。如果使用DMEM作为稀释培养基，那必须在5min内混合稀释的DNA和Lipo2000。  

3）将DNA稀释液和Lipo2000稀释液混合（总体积100µl），轻柔混匀，室温静置20min， 形成DNA-Lipo2000复合物，这一混合物可能呈浑浊状态，但不会抑制转染效率。【注意】：DNA-Lipo2000复合物在室温下至少可稳定保存5h。

3.将上方制备好的DNA-Lipo2000复合物加入接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。【注意】：如果要在无血清条件下转染，使用含血清的正常培养基进行细胞接种。再加入复合物前吸掉培养基，更换为500µl无血清培养基。

4. 37℃，5% CO2培养箱培养24-48h，直至能进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。然而，有必要在4-6 h后更换生长培养基，不会降低转染活性。

5.特殊说明

1）对于稳转细胞株：则在转染24h后，按照1:10或更高比例接种细胞到新鲜生长培养基。转染48h后加入筛选培养基。

2）对于悬浮细胞株：在细胞中加入DNA-Lipo2000复合物后，如需要可以4h后加入PMA和/或PHA。比如：对于Jurkat细胞，分别加入PHA-L（终浓度1µg/ml）和PMA（终浓度50ng/ml），可以提高CMV启动子活性和基因表达。对于K562细胞，只加入PMA（终浓度50ng/ml）足以提高启动子活性。

转染体系的放大或缩小

对于不同的细胞培养板，Lipo2000、DNA、细胞和培养基的使用量根据培养表面的不同按比例进行调整，具体参考表I。对于自动化、高通量体系，以96孔板形式制备更大的复合物体积。需要注意的是，需要进行快速的96孔板转染（细胞铺板和转染同时进行），直接在平板中制备复合物，然后将细胞悬液加入到复合物内，这样进一步减少了转染时间。此种改进步骤经过293-H，293-F，COS-7L和CHO细胞的试验，同传统方法相比活性稍低。

表I.不同细胞培养容器中转染时培养基、核酸及Lipo2000用量

【*】：不同厂商提供的细胞培养容器表面积可能有所不同。

【**】：稀释DNA/RNA或Lipo2000所用的无血清培养基用量。

【注意】：该表用量仅供参考，具体用量请根据细胞类型、铺板密度等其他实验条件进行优化。

附表II  Lipo2000脂质体转染试剂用于不同细胞转染用量参考（以96孔板为例）