描述
DNase I Solution (RNase & Protease-free)
脱氧核糖核酸酶I溶液（无RNase&蛋白酶）
关键词：
Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase，5′-寡核苷酸-水解酶，Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas，EC No: 3.1.21.1，CAS NO：9003-98-9
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| 产品名称 |
产品编号 |
规格 |
储存 |
价格（元) |
| DNase I Solution (RNase & Protease-free)
脱氧核糖核酸酶I溶液（无RNase &蛋白酶） |
MF0405-200U |
200U |
-20ºC |
198 |
| MF0405-1000U |
1000U |
-20ºC |
848 |
【温馨提示】：蛋白样品制备中核酸酶的降解推荐使用全能型的全能核酸酶Benzonase Nuclease，点击此处了解全能核酸酶的亮点在哪？
产品描述
脱氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，缩写DNase I，在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶，偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下，DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在条件下，DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I可水解多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。
脱氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，缩写DNase I，最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是最主要的来源之一。DNase I以两对二硫键结合的多种糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范围是pH 7-8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。
本品是即用型溶液形式的DNase I，不含RNase和蛋白酶，适用于各种RNA处理。另外还提供实验所需的反应缓冲液和终止液，节省时间且用起来更方便。
产品应用
◇ 制备不含DNA的RNA样本；
◇ RT-PCR反应前RNA样本内基因组DNA等可能存在DNA污染的去除；
◇ T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的体外RNA转录后DNA模板的去除；
◇ DNase I足迹法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白质相互作用；
◇ 缺口平移法标记探针用；
◇ 制备随机DNA片段文库；
◇ TUNEL细胞凋亡检测中用于剪切DNA制备阳性对照；
产品包装
| 组分编号 |
组分名称 |
货号（规格）
|
| MF0405-200U |
MF0405-1000U |
| MF0405-A |
DNase I Solution (RNase & Protease-free) |
200U |
1000U |
| MF0405-B |
10×Reaction Buffer |
200μl |
1ml |
| MF0405-C |
10×Stop Solution |
200μl |
1ml |
保存与运输方法
保存：-20℃冻存，1年稳定。
运输：冰袋运输。
注意事项
1） 本DNase I的储存缓冲液为50mM Tris-acetate(pH 7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v) glycerol。如需对其进行稀释，则使用本储存缓冲液进行稀释。
2） 酶的使用过程中需放在冰盒或冰浴内，使用结束立即放回-20℃保存。
3） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、RT-PCR反应前RNA样本内DNA污染的去除
1.1 DNA模板经核酸内切酶线性化，用酚/氯仿和氯仿/异丙醇提取DNA，用乙醇沉淀后，溶于适量无菌去离子水中。
1.2 往一个RNase-free EP管内依次加入下列试剂：
| RNA样本 |
1μg |
| 10×Reaction Buffer |
1μl |
| 用DEPC-treated Water补充 |
至9μl |
| DNase I (1U/μl) |
1μl |
【注意】：如果需要处理较大量的RNA样品，可按比例放大上述反应体系。条件许可下最好往体系内加入适量RNase抑制剂（货号：MF0218-2KU）以防止RNA降解。
1.3 37℃孵育30min。
1.4 往上述体系内加入1μl 10× Stop Solution使其终浓度为1×，混匀。之后65℃孵育10min使DNase I失活。【注意】：一定要先加入10× Stop Solution，然后再加热失活RNase I，否则先加热可能引起RNA被降解。
1.5 加热处理后的RNA样品即可直接用作RT-PCR反应用的模板。
二、体外RNA反转录后模板DNA的去除
2.1 每个含有0.5μg模板DNA的反转录体系中加入1U DNase I，某些情况下模板DNA完全消化所需的DNase I需通过实验来摸索。
2.2 37℃孵育15min。
2.3 酚/氯仿抽提失活DNase I。
三、其他用途请参考上述方法或参考文献等进行。
相关产品
| 货号 |
名称 |
规格 |
| MF0402-10MG |
Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein |
10MG |
| MF0401-15KU |
Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein |
15KU |
| MF0405-200U |
DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脱氧核糖核酸酶I溶液 |
200U |
| MF0203-100MG |
Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas |
100mg |
| MP1509-25KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶 |
25KU |
| MF0201-100MG |
Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K |
100mg |
| MF0218-2KU |
RNase Inhibitor (40U/µl), Murine小鼠RNA酶抑制剂 |
2KU |
| MF0404-500ML |
DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水（无DNase、RNase ) |
500ml |
