BL21 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

BL21;pGEX;pMAL;BL21 (DE3);Rosetta (DE3);羧苄青霉素钠;卡那霉素;链霉素;

货号 产品名称 规格             
MF2481-1000UL   BL21 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞   10×100μl
MF2481-5000UL BL21 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号

组分名称

货号(规格)

MF2481-1000UL   

MF2481-5000UL   

MF2481-A    BL21 Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2481-B Control Plasmid puC19, 10pg/μl    10μl 10μl

菌株描述

BL21菌株是最先开发的原核表达用的大肠杆菌菌株,适用于转化和非T7载体的常规蛋白表达,主要用于非毒性蛋白的表达。该菌株不含T7 RNA聚合酶基因,因此,不可用于T7启动子驱动的蛋白表达(如pET系列表达载体);但含大肠杆菌RNA聚合酶基因,可以用于tac或trc等利用大肠杆菌RNA聚合酶的原核标系统的表达(如pGEX,pMAL表达载体)。该菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶ompT的基因,这两种酶的缺失降低了外源重组蛋白在菌体内的降解,从而增加了蛋白表达量。对噬菌体T1(fhuA2)具有抗性。

BL21菌株基因型:E. coli B F-dcm ompT hsdS(rB-mB-) gal [malB+]K-12(λS)

产品描述

本品是大肠杆菌BL21菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   最好在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)   取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内,置于冰浴中。【注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】

以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2)   向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吹打),冰浴静置25min。

3)   42℃热击45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4)   向每个离心管中加入450 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5)   5000rpm离心1min收菌,留取100μl上清轻轻吹打重悬菌体,加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若预计的克隆较多,可直接吸取转化产物涂布平板;若预计的克隆较少,则同上离心(5,000 rpm,1min)后留取适量培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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