描述

BL21(DE3) Electrocompetent Cell 大肠杆菌电转感受态细胞

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。

产品组分：

菌株描述

BL21(DE3)菌株来源于大肠杆菌B/r菌株，特别构建适用于重组蛋白的高水平表达。BL21(DE3)菌株缺乏lon和ompT蛋白酶，从而改进重组蛋白的稳定性。DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG能诱导T7 RNA聚合酶的表达。BL21 (DE3)特别适合于噬菌体T7启动子为基础的表达系统（比如，pRSET，pCR T7和pET）。

BL21 (DE3)菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)

产品描述

我司（金畔生物）提供的BL21(DE3)电转感受态细胞经特殊工艺制作，适用于各种多肽、蛋白表达文库的构建，经pUC19质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1）   感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2）   整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3）   加入DNA的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。若转化大质粒或想得到较高转化效率，推荐使用高纯质粒抽提试剂盒提取质粒。

4）   为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。

5）   转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6）   对于连接产物的转化，大部分公司的连接体系或重组体系（比如，Thermo或NEB公司的T4连接酶体系，NEB公司的重组系统）不用纯化，能直接与BL21(DE3)电转感受态细胞混合后进行转化，需控制DNA浓度≤100ng/μl，体积≤5μl/50μl感受态细胞。过高浓度连接产物或过大体积连接产物都会降低转化效率，增加弧光放电的风险。

7）   电击杯里的离子会增加溶液的电导，增大在含细胞和DNA溶液中产生电流和弧光放电的风险。

8）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。

2)        取-80℃保存的感受态细胞插入冰中5min，待其完全融化。

3)        往50μl感受态细胞悬液中加入目的DNA（质粒或连接产物），用手拨打管底使其混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

【注意】：要测定转化效率，请使用1μl pUC19 Control Vector (10pg/μl)。

【注意】：对于连接产物，大部分公司的T4连接酶体系或50℃重组体系不用纯化，可直接与BL21(DE3)电转感受态细胞混合后进行电击转化，需控制DNA浓度≤100ng/μl，体积≤5μl/50μl感受态细胞。

【注意】：对盐浓度较高的DNA溶液或反应体系需用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液重悬，然后与电击感受态细胞混合进行电击转化。

4)        用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-DNA之后快速转移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

5)        启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV（此参数参考Bio-rad，具体使用请参考电转仪推荐参数来操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

6)        2min后从冰中取出电击杯，放在室温，加入700 μl无抗生素的SOC培养基（室温），用枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50ml离心管，向离心管内补加的SOC培养基定容至10ml。于37℃，225rpm振荡复苏培养1h。

【注意】：SOC培养基配方:2% Tryptone, 0.5% Yeast Extract, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 10 mM MgCl2,10 mM MgSO4, 20mM glucose。SOC培养基营养丰富，主要用于大肠杆菌感受态细胞转化的复苏步骤，能最大化感受态细胞的转化效率。

7)        5,000rpm离心1min，重悬后取100~200μl加到含相应抗生素的SOC平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径150mm培养皿2~5个），用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，37℃过夜培养13~17h。

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BL21(DE3) Electrocompetent Cell 大肠杆菌电转感受态细胞

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。

产品组分：

菌株描述

BL21(DE3)菌株来源于大肠杆菌B/r菌株，特别构建适用于重组蛋白的高水平表达。BL21(DE3)菌株缺乏lon和ompT蛋白酶，从而改进重组蛋白的稳定性。DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG能诱导T7 RNA聚合酶的表达。BL21 (DE3)特别适合于噬菌体T7启动子为基础的表达系统（比如，pRSET，pCR T7和pET）。

BL21 (DE3)菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)

产品描述

我司（金畔生物）提供的BL21(DE3)电转感受态细胞经特殊工艺制作，适用于各种多肽、蛋白表达文库的构建，经pUC19质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1）   感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2）   整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3）   加入DNA的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。若转化大质粒或想得到较高转化效率，推荐使用高纯质粒抽提试剂盒提取质粒。

4）   为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。

5）   转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6）   对于连接产物的转化，大部分公司的连接体系或重组体系（比如，Thermo或NEB公司的T4连接酶体系，NEB公司的重组系统）不用纯化，能直接与BL21(DE3)电转感受态细胞混合后进行转化，需控制DNA浓度≤100ng/μl，体积≤5μl/50μl感受态细胞。过高浓度连接产物或过大体积连接产物都会降低转化效率，增加弧光放电的风险。

7）   电击杯里的离子会增加溶液的电导，增大在含细胞和DNA溶液中产生电流和弧光放电的风险。

8）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。

2)        取-80℃保存的感受态细胞插入冰中5min，待其完全融化。

3)        往50μl感受态细胞悬液中加入目的DNA（质粒或连接产物），用手拨打管底使其混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

【注意】：要测定转化效率，请使用1μl pUC19 Control Vector (10pg/μl)。

【注意】：对于连接产物，大部分公司的T4连接酶体系或50℃重组体系不用纯化，可直接与BL21(DE3)电转感受态细胞混合后进行电击转化，需控制DNA浓度≤100ng/μl，体积≤5μl/50μl感受态细胞。

【注意】：对盐浓度较高的DNA溶液或反应体系需用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液重悬，然后与电击感受态细胞混合进行电击转化。

4)        用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-DNA之后快速转移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

5)        启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV（此参数参考Bio-rad，具体使用请参考电转仪推荐参数来操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

6)        2min后从冰中取出电击杯，放在室温，加入700 μl无抗生素的SOC培养基（室温），用枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50ml离心管，向离心管内补加的SOC培养基定容至10ml。于37℃，225rpm振荡复苏培养1h。

【注意】：SOC培养基配方:2% Tryptone, 0.5% Yeast Extract, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 10 mM MgCl2,10 mM MgSO4, 20mM glucose。SOC培养基营养丰富，主要用于大肠杆菌感受态细胞转化的复苏步骤，能最大化感受态细胞的转化效率。

7)        5,000rpm离心1min，重悬后取100~200μl加到含相应抗生素的SOC平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径150mm培养皿2~5个），用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，37℃过夜培养13~17h。

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描述

BL21 (DE3) Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

BL21 (DE3)；BL21 (DE3) pLysS；Rosetta (DE3)；表达感受态细胞；非毒性蛋白表达；pET表达载体；

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。网站：www.maokangbio.com。

【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

【好消息】：见我司整理的BL21系列表达感受态细胞常见问题。

菌株描述

BL21 (DE3)菌株来源于大肠杆菌B/r菌株，特别构建适用于重组蛋白的高水平表达。DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG能诱导T7 RNA聚合酶的表达。BL21 (DE3)特别适合于噬菌体T7启动子为基础的表达系统（比如，pRSET，pCR T7和pET）。特别适合非毒性蛋白的表达。

BL21 (DE3)菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)

产品描述

本品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品组分：

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(0.1ng/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）   取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内，置于冰浴中。【注意：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】

以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2）   向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴静置30min。

3）   42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4）   向每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，150 rpm振荡培养45min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5）   根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

BL21 (DE3)；BL21 (DE3) pLysS；Rosetta (DE3)；表达感受态细胞；非毒性蛋白表达；pET表达载体；

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。网站：www.maokangbio.com。

【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

【好消息】：见我司整理的BL21系列表达感受态细胞常见问题。

菌株描述

BL21 (DE3)菌株来源于大肠杆菌B/r菌株，特别构建适用于重组蛋白的高水平表达。DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG能诱导T7 RNA聚合酶的表达。BL21 (DE3)特别适合于噬菌体T7启动子为基础的表达系统（比如，pRSET，pCR T7和pET）。特别适合非毒性蛋白的表达。

BL21 (DE3)菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)

产品描述

本品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品组分：

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(0.1ng/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）   取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内，置于冰浴中。【注意：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】

以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2）   向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴静置30min。

3）   42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4）   向每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，150 rpm振荡培养45min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5）   根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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