Code: CM0437

A medium free from thioglycollate for the growth of aerobic and anaerobic organisms.

* Adjusted as required to meet performance standards

Directions
Suspend 40g in 1 litre of distilled water and boil to dissolve the medium completely. Sterilise by autoclaving at 121°C for 15 minutes. Mix well before pouring.

* 根据需要进行调整以满足性能标准
方向
将 40g 悬浮在 1 升蒸馏水中并煮沸以完全溶解培养基。 通过在 121°C 高压灭菌 15 分钟进行灭菌。 倒入前充分混合。

Description
Schaedler, Dubos and Costello¹ formulated this medium for the isolation of aerobic and anaerobic micro-organisms from the gastro-intestinal tract of mice. Mata, Carrillo and Villatoro² modified the formula in their studies on anaerobic human faecal microflora. The modified formula has been used in Oxoid Schaedler Anaerobe Agar/Broth and the medium can be used to create selective conditions under which the required, delicate and more nutritionally exacting micro-organisms of the intestinal tract would develop, despite the presence of antagonistic organisms. Normally such fastidious micro-organisms would be swamped by the growth of enterococci, coliform bacilli and other Gram-negative bacilli.

In both studies^1,2 the use of the base medium with selective agents (shown overleaf) for the isolation and enumeration of Lactobacillus, Streptococcus, Clostridium, Bacteroides and Flavobacterium species from faecal samples and various organs of the digestive tract.
Although thioglycollate is widely used in anaerobic media, to lower the redox potential in order to favour growth of anaerobic organisms, some workers have reported it to be inhibitory to some anaerobes^3,4.

Schaedler Anaerobe Agar contains cysteine hydrochloride and glucose, as reducing substances, with the advantage that cysteine inhibits the growth of Escherichia coli. Kari, Nagy, Kovacs & Hernadi⁵ have reported the inhibitory effect of cysteine on several enzymatic reactions of Escherichia coli in vitro.

Schaedler Anaerobe Agar has been shown to be a suitable alternative to blood agar for the enumeration of clostridia⁶ and has been used for the examination of food, waste products and ditch water⁷. These authors showed the necessity for strict anaerobic conditions for the successful recovery of obligate anaerobes when using this medium without the addition of blood.

Investigations at Oxoid have shown that Schaedler Anaerobe Agar gave similar results in recovery and colonial appearance to Oxoid Blood Agar Base No.2 when tested with the same organisms.

Technique
The sample suspension is diluted as necessary in order to obtain separated and countable colonies. A calibrated loopful is then spread on the surface of a previously dried Schaedler Anaerobe Agar plate. Conditions of incubation will vary according to the type of culture under test. Pure cultures may grow on the base medium and this is also used for general aerobic and anaerobic counts.

In the enumeration of Enterococcus faecalis (facultatively anaerobic) as an indicator organism in dehydrated or frozen foods and water, and for the detection of Clostridium, the medium can be used as follows:

Food sample (e.g. pre-cooked frozen food) suspensions are plated out by the surface spread technique and an aerobic viable count may be carried out at 25°C and 35°C. For pre-cooked meat products, an anaerobic viable count and a selective plate examination for Clostridium perfringens should also be performed.

Addition of Selective Agents
To 1,000ml of base agar, the following selective agents may be added:
1. Medium for anaerobic lactobacilli and anaerobic streptococci: NaCl 10.0g; Neomycin 0.002g. Incubate anaerobically at 35°C.
2. Medium for Bacteroides and clostridia: Placenta powder 2.0g; Neomycin 0.002g. Incubate anaerobically at 35°C.
3. Medium for flavobacteria: 7ml of 0.5% tyrothricin in ethanol. Incubate aerobically at 35°C.

描述
Schaedler、Dubos 和 Costello1 配制了这种培养基，用于从小鼠胃肠道中分离需氧和厌氧微生物。 Mata、Carrillo 和 Villatoro2 在他们对厌氧人类粪便微生物区系的研究中修改了公式。改良配方已用于 Oxoid Schaedler 厌氧菌琼脂/肉汤，培养基可用于创造选择性条件，在这些条件下，尽管存在拮抗性微生物，但肠道所需的、精致的和营养更严格的微生物仍会发育。通常这种挑剔的微生物会被肠球菌、大肠菌和其他革兰氏阴性杆菌的生长淹没。

在这两项研究 1,2 中，使用带有选择性试剂的基础培养基（如后页所示）从粪便样本和消化道的各种器官中分离和计数乳杆菌、链球菌、梭状芽孢杆菌、拟杆菌属和黄杆菌属。
尽管硫代乙醇酸盐广泛用于厌氧培养基中，为了降低氧化还原电位以促进厌氧生物的生长，一些工作人员报告说它对某些厌氧菌有抑制作用3,4。

Schaedler厌氧菌琼脂含有半胱氨酸盐酸盐和葡萄糖作为还原物质，具有半胱氨酸抑制大肠杆菌生长的优点。 Kari、Nagy、Kovacs 和 Hernadi5 报道了半胱氨酸在体外对大肠杆菌的几种酶促反应的抑制作用。

Schaedler 厌氧菌琼脂已被证明是用于计数梭状芽胞杆菌的血琼脂的合适替代品6，并已用于食品、废物和沟水的检查 7。这些作者表明，在不加血的情况下使用这种培养基成功回收专性厌氧菌需要严格的厌氧条件。

在 Oxoid 的研究表明，当用相同的微生物进行测试时，Schaedler 厌氧菌琼脂在恢复和菌落外观方面与 Oxoid 血琼脂基础 2 的结果相似。

技术
必要时稀释样品悬浮液以获得分离且可计数的菌落。然后将经过校准的环铺在先前干燥的 Schaedler 厌氧菌琼脂平板的表面上。孵化条件将根据待测培养物的类型而有所不同。纯培养物可以在基础培养基上生长，这也用于一般需氧菌和厌氧菌计数。

以粪肠球菌（兼性厌氧菌）作为脱水或冷冻食品和水中的指示菌进行计数，检测梭状芽胞杆菌时，可采用如下培养基：

食品样品（例如预煮冷冻食品）悬浮液通过表面扩散技术铺板，可在 25°C 和 35°C 下进行需氧活菌计数。对于预煮肉制品，还应进行厌氧菌计数和产气荚膜梭菌选择性平板检查。

添加选择性试剂
在 1,000 毫升基础琼脂中，可以添加以下选择性试剂：
1. 厌氧乳酸杆菌和厌氧链球菌培养基：NaCl 10.0g；新霉素 0.002g。 35°C 厌氧培养。
2、拟杆菌、梭状芽胞杆菌培养基：胎盘粉2.0g；新霉素 0.002g。 35°C 厌氧培养。
3. 黄杆菌培养基：7ml 0.5% 酪丝菌素的乙醇溶液。在 35°C 有氧培养。

Storage conditions and Shelf life
Store the dehydrated medium at 10-30°C and use before the expiry date on the label.
Prepared plates may be stored at 2-8°C if suitably protected.

Appearance
Dehydrated medium: Straw coloured, free-flowing powder
Prepared medium: Light straw to straw coloured gel

储存条件和保质期
将脱水培养基储存在 10-30°C 并在标签上的有效期之前使用。
如果适当保护，制备好的板可在 2-8°C 下储存。

外貌
脱水介质：稻草色、自由流动的粉末
制备培养基：浅稻草色至稻草色凝胶

Quality control

* This organism is available as a Culti-Loop®

Precautions
Note the comment on strict anaerobic conditions for obligate anaerobe isolation without blood.

References
1. Schaedler R. W., Dubos R. and Castello R. (1965) J. Exp. Med. 122. 59-66.
2. Mata L. J., Carrillo C. and Villatoro E. (1969) Appl. Microbiol. 17. 596-599.
3. Hibbert H. R. and Spencer R. (1970) J. Hyg. Camb. 68. 131-135.
4. Mossel D. A. A., Beerens H., Tahon-Castel Baron G. and Potspeel B. (1965) Ann. Inst. Pasteur de Lille 16. 147-156.
5. Kari C., Nagy Z., Kovacs P. and Hernadi F. (1971) J. Gen. Micro. 68. 349-356.
6. de Waart J. and Pouw H. (1970) Zbl. I. Abt. 0rig. 214. 551-552.
7. de Waart J. (1973) Personal Communication.

MUELLER-HINTON BROTH

Code: CM0405

An antimicrobial susceptibility testing medium which may be used in internationally recognized standard procedures.

一种可用于国际公认标准程序的抗菌药敏试验介质。

* Adjusted as required to meet performance standards

Directions
Place 21.0g in 1 litre of distilled water mix to dissolve completly. Sterilize by autoclaving at 121°C for 15 minutes. Chill and adjust cation levels if necessary¹.

Description
Oxoid Mueller-Hinton Broth has been produced in parallel with Oxoid Mueller-Hinton Agar CM0337. Where studies on antibiotic susceptibilities are being made both in broth and agar, it will be found to be of particular value to have media of identical nutrient formulation.
Mueller-Hinton Broth is recommended for broth dilution MIC studies¹.

Oxoid Mueller-Hinton Broth will require supplementation with the divalent cations Mg++ and Ca++ after sterilisation². The CLSI recommend the following cation levels Ca++, 20-25mg/litre; Mg++, 10-12.5mg/litre.

Lysed horse blood or thymidine phosphorylase may be added to the broth to improve the MIC endpoints of sulphonamides and trimethoprim³.
Mueller-Hinton Broth containing horse serum and agar added to create a semi-solid agar medium was used in microtitre plates in an agar dilution method for determining the MIC for Helicobacter pylori of a number of antibiotics. The method does not require prolonged incubation in carbon dioxide-enriched air and results are available in 48 hours compared to 3-4 days for agar diffusion testing on solid medium⁴.

For further details of antimicrobial susceptibility testing see relevant section.

方向
将 21.0g 放入 1 升蒸馏水中完全溶解。通过在 121°C 高压灭菌 15 分钟进行灭菌。必要时冷却并调整阳离子水平1。

描述
Oxoid Mueller-Hinton 肉汤与 Oxoid Mueller-Hinton 琼脂 CM0337 平行生产。当在肉汤和琼脂中都对抗生素敏感性进行研究时，将发现具有相同营养成分的培养基具有特别的价值。
建议将 Mueller-Hinton Broth 用于肉汤稀释 MIC 研究1。

Oxoid Mueller-Hinton Broth 在灭菌后需要补充二价阳离子 Mg++ 和 Ca++2。 CLSI 推荐以下阳离子水平 Ca++，20-25mg/L； Mg++，10-12.5mg/升。

可以将裂解的马血或胸苷磷酸化酶添加到肉汤中以改善磺胺类药物和甲氧苄啶3 的 MIC 终点。
Mueller-Hinton Broth 含有马血清和添加的琼脂以形成半固体琼脂培养基，该培养基用于微量滴定板中，采用琼脂稀释法测定多种抗生素对幽门螺杆菌的 MIC。该方法不需要在富含二氧化碳的空气中长时间孵育，并且在 48 小时内即可获得结果，而在固体培养基上进行琼脂扩散测试则需要 3-4 天4。

有关抗菌药物敏感性测试的更多详细信息，请参见相关部分。

Storage conditions and Shelf life
Store the dehydrated medium at 10-30°C and use before the expiry date on the label.
Store the prepared medium at 2-8°C.

Appearance
Dehydrated medium: Straw coloured, free-flowing powder
Prepared medium: Light straw to straw coloured solution

储存条件和保质期
将脱水培养基储存在 10-30°C 并在标签上的有效期之前使用。
将准备好的培养基储存在 2-8°C。

外貌
脱水介质：稻草色、自由流动的粉末
制备培养基：浅稻草色至稻草色溶液

Quality control

* This organism is available as a Culti-Loop®

Precautions
Monitor the performance of the broth routinely using the standard QC organisms. If the broth does not yield the expected MIC values, modify the volumes of Mg++ and Ca++ solutions until the MIC values approximate to those in Table 3 in reference¹.

If the thymidine content is lowered, after the addition of lysed horse blood or thymidine phosphorylase, the MIC values may be lower.

防范措施
使用标准 QC 生物定期监测肉汤的性能。 如果肉汤没有产生预期的 MIC 值，请修改 Mg++ 和 Ca++ 溶液的体积，直到 MIC 值接近参考 1 中表 3 中的值。

如果胸苷含量降低，加入裂解马血或胸苷磷酸化酶后，MIC值可能会降低。

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正文中列出的所有试剂只能用于测试或研究，不能作为”药品”，”食品”，”家庭用品”等使用。
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References  参考文献
1. National Committee for Clinical Laboratory Standards (2000) Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for bacteria that grow Aerobically. Approved Standard M7-A5. NCCLS. Villanova, Pa.
2. Thornsberry C., Gavan T. L. and Gerlach E. H. (1977) Cumitech 6. American Society for Microbiology. Washington DC.
3. Swenson J. M. and Thornsberry C. (1978) Curr. Microbiol. l. 189-193.
4. Kobayashi, Hasegawa M., Saika T. et al (1997) J. Antimicrob. Chemother. 40. 713-716.

支原体琼脂（Mycoplasma Agar）

用于选择性分离支原体

支原体琼脂基础 CM0401

配方表：

*可根据标准需要自行调整支原体添加剂G SR0059C

配方表：

配制方法：

取35.5g的CM0401培养基到1L蒸馏水中，加热溶解，分装培养基，每瓶80ml，121℃灭菌15分钟，冷却到50℃，每瓶培养基加入1瓶已安装说明书溶解的SR0059C。

肺炎支原体双向培养基（Mycoplasma pneumoniae Bi-phasic Medium）

用于选择性分离肺炎支原体

支原体添加剂P SR0060C

配方表：

配制方法：

往每瓶SR0060C中加入20ml无菌蒸馏水，混匀溶解。往10个小瓶中每个加入1ml的支原体琼脂基础，121℃灭菌15分钟。在上述10小瓶培养基中分别加入2ml溶解后的支原体添加剂P，即SR0060C。

产品描述：

Oxoid支原体琼脂基础是一种基础培养基，加入合适的添加剂后，可以用来培养支原体。

Edward强调过在基础培养基中加入有毒物质的重要性，Lynn & Morton对加入琼脂培养基中的抑制剂也给予了特殊的重视。Oxoid的支原体培养基基础不用含有有毒物质和抑制剂，可以选择性地添加它们，同时它含有的矿物质优化了菌落的生长性能，同时也不会干扰培养基的澄清度。

Hayflick建议在培养基中加入10% v/v的25% w/v的面包酵母提取物，Lemcke则用Oxoid酵母粉LP0021加入。大部分的支原体需要富含血清的培养基，常用的是马血清(20% v/v)，猪或人血清可以替代马血清，但是人血清里面的抗体和抗生素会对培养基产生重要的影响。Edward建议将DNA加入培养基可以促进牛支原体和其他支原体的生长，在每升培养基中加入20mg脱氧核糖核酸钠（引述自Lemcke）。

为了阻止污染微生物阻碍生长较慢的支原体的生长，抗菌物质必须加入到培养基中。青霉素和乙酸亚铊是最常用的试剂，但是T-strain支原体对乙酸亚铊敏感。Hutchinson和 Fallon 报道说在培养基中加入1mg/ml的氨苄西林可以替代青霉素和乙酸亚铊。青霉素的添加量应该在50-500 units/ml，乙酸亚铊的添加量应该在1/2000到1/8000之间。如果要做T-Strain支原体的研究，就去除乙酸亚铊。

两种添加剂，支原体添加剂G SR0059和支原体添加剂P SR0060，可以优化支原体的生长情况。支原体添加剂G SR0059是一种一般的添加剂，由Hayflick的配方而来， 当加入到Oxoid支原体肉汤基础或者支原体琼脂基础后，就组成完全选择性培养基，促进需要甾醇的支原体的生长。

支原体添加剂P是一种液体添加剂，由Mycoplasma Reference Laboratory, CPHLS, Colindale报道的配方而来，与Oxoid支原体琼脂基础一起使用，组成双向培养基，用来分离和初步鉴定肺炎支原体。

许多种的支原体是需氧菌或兼性厌氧菌，但有些支原体喜欢微需氧条件（通过加入二氧化碳），或者喜欢严格厌氧。

致病性支原体菌株在35℃下生长最好，腐生菌株经常在22-30℃下生长，T-支原体的最佳生长温度是36℃.支原体属在pH 7.4-8.0生长最好，但是T-支原体最适在pH 6.0-6.5.

技术要点：

琼脂平板

使用Oxoid的支原体琼脂基础CM0041和添加剂SR0059制备好支原体琼脂平板（常用55mm平板）以培养样品。平板可在湿润的需氧环境，厌氧环境和 10% CO₂-90% N₂环境中培养。在培养7天后，用60倍的显微镜查看琼脂表面，并使用倾斜透射光。菌落特制是菌落表面中心会陷入，给人一种“煎鸡蛋”的外观形态。在进行鉴定之前有必要使用再培养对菌株进行纯化。

双向培养基

双向培养基由1ml的支原体琼脂基础和2ml 支原体添加剂P组成，双向培养基瓶可以与拭子或一小片痰一起35℃下培养最多3个月，任何由于真菌或者细菌的生长导致浑浊的培养基都必须被丢弃。

肺炎支原体的生长会发酵葡萄糖产酸，使亚甲基蓝还原，并且使酚红指示剂变黄色。出现这种颜色变化的培养基需要在琼脂培养基上进一步培养，可以用CM0401加SR0059C。

注意事项：

必须采取有效措施预防乙酸亚铊中毒；
不要使用醋酸铊培养基分离解脲支原体；
以下情况下可确证是否为支原体结果：
(1) 具有典型的形态
(2) 无血清介质中无菌落生长
(3) 菌落嵌入琼脂表面

支原体肉汤（Mycoplasma Broth）

用于从临床样本种选择性分离培养支原体

支原体肉汤基础 CM0403，新货号CM1166

配方表：

*可根据标准需要自行调整配制方法：

取25.5g的CM0403培养基到1L蒸馏水中，混匀溶解，分装培养基，每瓶80ml，121℃灭菌15分钟，冷却到50℃，每瓶培养基加入1瓶已安装说明书溶解的SR0059C。

注意事项：

乙酸亚铊有毒，必须采取有效措施预防中毒。

当肉汤中的指示剂发生颜色变化时，要立刻转移到琼脂上培养，以防pH的变化损害微生物。