SARS-CoV-2 N501Y Mutation Detection Kit

SARS-CoV-2 N501Y 突变检测试剂盒

◆试剂盒组成

◆背景

新冠病毒突变株在世界范围内不断扩散，感染人数也在不断增多。如Alpha (B.1.1.7)、Beta (B.1.351) 和 Gamma (P.1) 突变株都有着N501位点的突变，与常规毒株相比，具有更强的感染性。

※ Alpha (B.1.1.7)：英国最先检测出的突变株

       Beta (B.1.351)：南非最先检测出的突变株

       Gamma (P.1)：巴西最先检测出的突变株

通过FUJIFILM Wako研发的Primer技术，可以高灵敏度检测难以检测的基因点突变。本试剂盒可以快速、简便地检测N501Y突变。

◆特点

●      判定容易

    使用突变株与常规株（无突变）的Primer/Probe （引物/探针）套装，通过比较Ct值进行判定

●      使用一步法RT-qPCR，快速检测突变

    约70 min即可完成

●      使用FUJIFILM Wako研发的Primer/Probe（引物/探针）套装，高灵敏度检测突变

●      所有突变株可在相同反应条件下进行检测

     由于N501Y、E484K、L452R、E484Q的PCR反应条件相同，因此可在同一块96孔板中进行检测。

◆检测原理

采用TaqMan^® 探针的One Step RT-qPCR法进行检测。

利用FUJIFILM Wako开发的Primer引物技术，高灵敏度检测点突变。

◆突变株的检测应用数据

本试剂盒已检测出以下4种新冠病毒（SARS-CoV-2）株。

● Alpha (B.1.1.7)突变株（QHN001、N501Y突变，由国立感染症研究所提供）

● Beta (B.1.351)突变株（TY8-612、N501Y突变、E484K突变，由国立感染症研究所提供）

● Gamma (P.1)突变株（TY7-501、N501Y突变、E484K突变，由国立感染症研究所提供）

● VR-1986HK（N501Y无突变、E484K无突变 ATCC)

拷贝数：5000、500、50copies/Well 3种

循环数：45

①  Alpha (B.1.1.7)突变株：QHN001（N501Y突变）

对于含有N501Y突变的alpha (B.1.1.7)突变株，利用突变株检测用“N501Y Mutant type Primer/Probe”，可以确认到扩增信号。另外，在常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Prime＆Probe”中未观察到扩增，由此判断为N501Y突变株。

②Beta (B.1.351)突变株：TY8-612（N501Y突变、E484K突变）

常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Prime/Probe”，在5,000 copies的条件下可观察到轻微的扩增信号，但突变株的可以在更低Ct值下检测到，由此判断为N501Y突变株。在复制500 copies和50 copies的条件下，未检测到常规株（非突变）的扩增信号。

③Gamma (P.1)突变株：TY7-501（N501Y突变、E484K突变）

对于含有N501Y突变的巴西株突变株，利用突变株检测用的“N501Y Mutant type Primer/Probe”，可以确认到扩增信号。

常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Prime＆Probe”，在复制5,000 copies的条件下可观察到扩增信号，但突变株的可以在更低Ct值下检测到，由此判断为N501Y突变株。在500 copies和500copies的条件下，未能检测到常规株（非突变）的扩增信号。

④VR-1986HK（N501Y无突变、E484K无突变）

对于不含N501Y突变和E484K突变的VR-1986HK，利用常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Primer/Probe”，可以确认到扩增信号。在突变株检测用的“N501Y Mutant type Prime/Probe”中未观察到扩增，由此判断为常规株的突变株。

◆PCR反应条件

◆常规株以及突变株的基因型

◆产品列表

◆相关产品

FAQ

Q：能否判定新冠病毒阳性/阴性？

A：本试剂盒检测阳性样品中是否存在基因突变，无法判定阳性/阴性。

Q：能否检测用直接PCR法简单提取的RNA样品？

A：本试剂盒无法检测简单提取的RNA。请使用RNA提取/纯化试剂盒等生成的RNA。

      离心柱：ISOSPIN Viral RNA（产品编号： 310-08931, 日本基因）

      自动核酸提取仪：QuickGene-Auto 12S/24S（倉敷紡績，还需要QuickGene AutoS RNA Virus Kit）

Q：试剂盒包装“200 Reactions”是什么意思？

A：【200 Reactions】是指实时PCR可以分开200孔进行。1个样品需要2个孔，即100个样品。

 ①    含有常规株的Primer＆Probe的孔

 ②    含有突变株的Primer＆Probe的孔

Q：试剂盒中是否包含病毒的阳性对照RNA？

A：本试剂盒不含阳性对照。若有需要，请向FUJIFILM Wako客服咨询。

Q：当野生株和突变株的扩增曲线均起峰时，应如何判断？

A：如果病毒量高，无论是突变株样品，还是野生株，都有可能在其Primer＆Probe中观察到扩增信号。然而，在此情况下，突变株的扩增信号上升

      得更快（Ct值小）。请务必通过突变株和常规株用的两种Primer＆Probe进行检测，以确定 Ct 值的差异。

Q：是否存在E484K单独突变？

A：不含N501Y突变、但含E484K突变的E484K单独突变株，已被确认为R.1株。但目前的信息较少，日本国立传染病研究所认为它是需要关注的突

      变株（VOI），而不是高关注突变株（VOC）。