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CFDA, SE 细胞增殖示踪荧光探针

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描述

CFDA, SE细胞增殖示踪荧光探针

产品关键词：

CFDA, SE (CFSE)；Calcein AM钙黄绿素；活细胞染色探针；Fluorescein diacetate (FDA)；PKH26；CAS NO：150347-59-4；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）
CFDA, SE 细胞增殖示踪荧光探针 MX3009-5MG 5mg 580
CFDA, SE 细胞增殖示踪荧光探针 MX3009-25MG 25mg 1520

【温馨提示】：见我司集奇生物（maokangbio）提供的CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 细胞增殖与示踪检测试剂盒（#MX3010-500T）。

产品描述

CFDA, SE，英文全名5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester，CAS NO. 150347-59-4，是一种稳定的、细胞膜渗透性的非荧光染料，由两个醋酸基团和一个琥珀酰亚胺酯（SE）官能团组成的一个荧光分子。一旦主动扩散进入细胞，其醋酸基团被胞内酯酶切割，生成荧光素酯CFSE。CFSE具有高度荧光，且能通过其琥珀酰亚胺酯基团共价结合到细胞内的蛋白氨基基团。正是这个共价偶联反应，CFSE能够极其长期的保留在细胞内，长达数个月。另外，归因于这一稳定连接，一旦染料进入细胞，不会转移到邻近细胞。无活力细胞仍然是非荧光。而活细胞一旦分化，CFSE能够很均匀的分散到子细胞中，每分裂一次子代细胞约能得到亲本细胞1/2的荧光强度，因此，通过流式细胞仪对荧光强度的检测，能够依次分选出未分裂细胞，分裂一次的细胞（1/2荧光强度），分裂两次的细胞（1/4荧光强度），分裂三次的细胞（1/8荧光强度），以及以此类推其他分裂次数的细胞。CFSE可以检测分裂多达8次或更多次数的细胞增殖。

CFSE广泛用于细胞增殖和体内细胞示踪研究。CFSE的最大激发和发射波长分别为492nm和517nm，标记细胞后呈绿色荧光。使用流式细胞仪检测可用FL1检测通道。也能用荧光显微镜观察，使用FITC滤片。

产品特性

1） CAS NO.：150347-59-4

2） 化学名：3′,6′-bis(acetyloxy)-3-oxo-2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl ester-spiro[isobenzofuran-1(3H),9′-[9H]xanthene] -ar-carboxylic acid

3） 同义名：5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester, CFDA-SE

4） 分子式：C29H19NO11

5） 分子量：557.46

6） 纯度：≥94%（HPLC）

7） Ex/Em：492/517nm

8） 外观：近乎白色至黄色粉末或结晶

9） 溶解性：溶于DMSO，DMF

10）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

1. 储存液制备

将低温保存的冻干粉产品置于室温回温至少20min，之后短暂低速离心，让所有粉末都掉落至管底。称取适量粉末用高质量无水DMSO溶解配制10mM储存液。比如5mg CFDA, SE（Mw: 557.46）用897μl DMSO充分溶解即得到10mM储存液。根据单次用量分装，置于≤-20℃避光干燥保存，避免反复冻融。储存液最好是一个月内用完，最多不超过三个月。

2. 工作液制备

于正式实验前，用HHBS缓冲液或其他生理缓冲液（pH 7.0）稀释储存液到1-10μM工作浓度，涡旋混匀。

【注意事项】：

1） CFDA, SE是胺反应性。CFDA, SE标记步骤不可使用含首胺的缓冲液，比如，HHBS或PBS是推荐的CFDA, SE稀释缓冲液。

2） CFDA, SE的染色浓度需要根据使用的细胞类型和实验目的来进行优化调整。比如，如果用于细胞增殖的荧光逐渐稀释分析，相对高浓度的CFDA, SE染色工作液比较理想；如果仅是用来标记细胞用作另外一种荧光标志探针的复染剂，相对低浓度的CFDA, SE染色工作液比较理想，能够良好的防止不同滤片设置间的荧光溢出。

3. 染色步骤

此染色步骤仅做指导，具体实验步骤可根据实际情况来做适当调整。

3.1 室温300×g离心细胞5min，吸掉上清。

3.2 用预热的无菌HHBS，PBS或其他生理缓冲液清洗细胞以去除任何残留的血清蛋白。之后同上离心细胞，吸掉上清。

3.3 用上述配制好的CFDA, SE染色工作液重新悬浮细胞，制备成1-3 x 107cells/mL的单细胞悬液。

3.4 室温或37℃避光孵育15~30min。中间可偶尔的轻轻颠倒混匀使得细胞均匀接触到染料。

3.5 加入5倍原始染色体积的细胞培养液（含10% FBS）来淬灭染色过程，轻轻颠倒几次混匀。

3.6 室温300×g离心细胞5min，吸掉上清。再用10ml完全细胞培养液清洗细胞一次。

3.7 再用10ml完全细胞培养液重新悬浮细胞，37℃孵育5min，以促进CFDA, SE在细胞内的充分反应和未反应的CFDA, SE重新回到完全细胞培养液中。离心去上清，完成最后一次清洗。

3.8 之后用完全细胞液重悬细胞，此时可用荧光显微镜或流式细胞仪来观察标记效果。或开始用药物刺激处理或继续常规培养。经适当时间后用流式细胞仪检测细胞增殖，或用于特定目的的细胞示踪。标记细胞也可用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

产品编号 产品名称 规格
MX3010-500T CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 500T
MX3009-5MG CFDA, SE细胞增殖示踪荧光探针 5mg
MX3012-500T Calcein AM/PI Double Stain Kit 活细胞/死细胞双染试剂盒 500T
MX3011-50UG Calcein, AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素（绿色） 50μg

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 细胞增殖与示踪检测试剂盒

发表于由

描述

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

细胞增殖与示踪检测试剂盒

产品关键词：

CFDA, SE；Calcein AM 钙黄绿素；Cell Division 细胞分化（分裂）；Fluorescein diacetate (FDA)；PKH26；CAS NO：150347-59-4；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）
CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒

 MX3010-500T 500T 498
MX3010-1000T 1000T 768

【温馨提示】：见我司集奇生物提供的CFDA SE 超纯冻干粉末（#MX3009-5MG）。

【温馨提示】：见我司集奇生物提供的PKH26红色荧光探针用于常规细胞膜标记（#MX4021-100UL）。

产品描述

CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒（CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit）是一款基于荧光探针CFDA, SE，用于细胞增殖检测和细胞荧光示踪的检测试剂盒。此方法目前广泛替代MTT法或者3H-胸腺嘧啶核苷掺入法（3H-thymidine incorporation）等细胞增殖检测方法。本试剂盒包含粉末形式的CFDA, SE探针，细胞培养级的溶剂，以及细胞标记液，使用方便，操作简单。按照每个样本的标记体积为1ml来算，我司（金畔生物）提供两种规格的试剂盒，分别可检测500个和1000个样品。

CFDA, SE，英文全名5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester，CAS NO. 150347-59-4，是一种稳定的、细胞膜渗透性的非荧光染料，由两个醋酸基团和一个琥珀酰亚胺酯（SE）官能团组成的一个荧光分子。一旦主动扩散进入细胞，其醋酸基团被胞内酯酶切割，生成荧光素酯CFSE。CFSE具有高度荧光，且能通过其琥珀酰亚胺酯基团共价结合到细胞内的蛋白氨基基团。正是这个共价偶联反应，CFSE能够极其长期的保留在细胞内，长达数个月。另外，归因于这一稳定连接，一旦染料进入细胞，不会转移到邻近细胞。无活力细胞仍然是非荧光。而活细胞一旦分化，CFSE能够很均匀的分散到子细胞中，每分裂一次子代细胞约能得到亲本细胞1/2的荧光强度，因此，通过流式细胞仪对荧光强度的检测，能够依次分选出未分裂细胞，分裂一次的细胞（1/2荧光强度），分裂两次的细胞（1/4荧光强度），分裂三次的细胞（1/8荧光强度），以及以此类推其他分裂次数的细胞。CFSE可以检测分裂多达8次或更多次数的细胞增殖。

CFSE广泛用于细胞增殖和体内细胞示踪研究。CFSE的最大激发和发射波长分别为492nm和517nm，标记细胞后呈绿色荧光。使用流式细胞仪检测可用FL1检测通道。也能用荧光显微镜观察，使用FITC滤片。

产品包装

编号 组分 保存方法

产品编号/规格
MX3012-500T MX3012-1000T
MX3010-A CFDA SE粉末 -20ºC避光保存 1管 1管×2
MX3010-B CFDA SE溶剂 -20ºC避光保存 1ml 1ml×2
MX3010-C 细胞标记液（10X） -20ºC~4℃保存 50ml×2 50ml×4

保存与运输方法

保存：-20ºC保存，开封前1年有效，其中组分A（CFDA SE粉末）需严格避光，组分B避免强光照射。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） CFDA SE溶剂在低温（如4℃，冰浴）等条件下会凝固而粘在离心管底、管壁或盖子上，可将其置于25℃温育片刻直至全部融解后使用。

2） CFDA SE粉末经溶剂溶剂配制成储存液后一个月内用完最好，最多不超过三个月。因CFDA SE容易被水解，并在水溶液中变质。使用过程中尽量避免接触水。而在标记过程中接触到水是在允许范围内。

3） 荧光染料均存在淬灭问题，操作和储存过程中需注意避光，以减缓荧光淬灭。

4） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. CFDA SE储存液（1000X）制备

a） 将低温保存的CFDA SE粉末置于室温回温至少20min，之后短暂低速离心，让所有粉末都掉落至管底。同时也提前将CFDA SE溶剂置于室温或25℃水浴片刻直至充分融解。

b） 吸取一定量CFDA SE溶剂（比如400μl）到CFDA SE粉末中，充分溶解，短暂低速离心，之后全部转移到剩下的CFDA SE溶剂中，混匀后，此即为CFDA SE储存液（1000X）。此配制过程需要避光。

c） 按照单次用量分装，用铝箔纸包好后，置于≤-20℃避光干燥保存，最好一个月内用完，最长不超过三个月。-70℃保存能适当延长保存周期。

2. CFDA SE标记液（1X）制备

准备适量无菌的细胞培养级去离子水，根据实验需要用量，配制适量的CFDA SE标记液（1X）。比如，取10ml 细胞标记液（10X），加入90ml 去离子水，充分混匀后，即得到CFDA SE标记液（1X），短期置于4℃保存，长期不用可置于-20℃保存。

3. 染色步骤

a） 室温300×g离心细胞5min，吸掉上清。

b） PBS或其他生理缓冲液清洗细胞以去除任何残留的血清蛋白。之后再同上离心吸掉上清。

c） 用1ml CFDA SE标记液（1X）重悬细胞，调整密度为1-5 x 106cells/mL，转移到15ml离心管内。

d） 用CFDA SE标记液（1X）将CFDA SE储存液（1000X）稀释到2X。比如，取2μl CFDA SE储存液（1000X）到1ml CFDA SE标记液（1X），混匀后即为CFDA SE储存液（2X）。

e） 将1ml CFDA SE储存液（2X）加入到步骤c）中含1ml 待标记细胞的15ml离心管内，轻轻混匀。

f） 37℃避光孵育15min。【具体的孵育时间可根据实际情况做适当调整，常用孵育时间10-30min。】

g） 立即加入10ml完全细胞培养液（含血清）来淬灭染色过程，室温颠倒几次混匀。

h） 室温离心去上清，再用5-10ml完全细胞培养液清洗一次。

i） 再加入5-10ml完全细胞培养液，37℃孵育5min，以促进CFDA, SE在细胞内的充分反应和未反应的CFDA, SE重新回到完全细胞培养液中。离心去上清，完成最后一次清洗。

j） 之后用完全细胞液重悬细胞，此时可用荧光显微镜（Ex/Em=492/517nm，FITC滤片）或流式细胞仪（FL1通道）来观察标记效果。或开始用药物刺激处理或继续常规培养。经适当时间后用流式细胞仪检测细胞增殖，或用于特定目的的细胞示踪。标记细胞也可用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。标记的细胞呈绿色荧光。

常见应用和数据示例：

根据荧光信号的稀释来检测细胞增殖和分化（示踪）（Cell proliferation and cell division by Dye Dilution Method），此方法主要用来体内外检测淋巴细胞（T细胞和B细胞）的增殖，也能用来检测NK细胞，成纤维细胞甚至细菌。也有用来研究可移植造血干细胞的增殖。

示例1（体外）.

Fig 1. Murine CD4+lymphocytes, labelled with CDFA-SE were cultured with antigen-presenting cells with different peptides to stimulate either the memory or the memory and naïve cells. Up to five cell divisions can be observed.

示例2（体内）.

Fig 2. Ability of CFSE-labeled ovalbumin (OVA)-specific T cell receptor transgenic CD8+ OT-I T cells, when adoptively transferred into C57BL/6 mice to respond to OVA, data shown 3 days after adoptive transfer. Left panel: CD8+, CD45.1+ OT-1 T cells in recipient mice. Right panel: CFSE proliferation profile. Note non-divided population of CD8+ T cells in recipient mice not receiving antigen (light grey histogram) and auto-fluorescence of non-labeled lymphocytes (dark grey histogram). The Figure depicts CD8+ T cells that have divided 1-6 times based on CFSE dilution peaks. [Quah BJ et al. The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation. J Vis Exp. 2010 Oct 12;(44).]

相关产品

产品编号 产品名称 规格
MX3010-500T CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 500T
MX3009-5MG CFDA, SE细胞增殖示踪荧光探针 5mg
MX3012-500T Calcein AM/PI Double Stain Kit活细胞/死细胞双染试剂盒 500T
MX3011-50UG Calcein, AM, Ultra Pure Grade钙黄绿素（绿色） 50μg
MX4021-100UL PKH26 Red Fluorescent Probe for General Cell Membrane Labeling

PKH26红色荧光探针（用于常规细胞膜标记）

 100μl

CFDA (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate) 活细胞示踪探针

发表于由

描述

CFDA (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate) 活细胞示踪探针

产品关键词：

5(6)-CFDA；Fluorescein diacetate (FDA) 二乙酸荧光素；；Calcein AM钙黄绿素；CDCFDA； CAS NO：124387-19-5；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）
CFDA (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate) MX4104-25MG 25mg 452
CFDA (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate) MX4104-100MG 100mg 992

产品描述

CFDA（5(6)-Carboxyfluorescein diacetate，CAS：124387-19-5），一种细胞膜渗透性的酯酶底物，用作一种活细胞探针，不仅能用来测定激活其荧光所需的酶活性，也能用来检测维持荧光产物保留在胞内的细胞膜完整性。一旦被胞内酯酶水解后，代谢产生羧基荧光素（Carboxyfluorescein, CF）。与荧光素相比，羧基荧光素含有更多的负电荷，从而能更好的保留在胞内。

产品特性

1） CAS NO：124387-19-5

2） 化学名：Spiro(isobenzofuran-1(3H),9′-(9H)xanthene)-ar-carboxylic acid, 3′,6′-bis(acetyloxy)-3-oxo-

3） 同义名：5(6)-CFDA; 5(6)-CFDA, mixed isomers;5-(and-6)-Carboxyfluorescein Diacetate, mixed isomers; 5(6)-Carboxy-di-O-acetylfluorescein; 5(6)-羧基荧光素二乙酸酯；

4） 分子式：C25H16O9

5） 分子量：460.39 g/mol

6） 外观：浅黄色至深黄色粉末

7） 纯度：≥90%（HPLC）

8） EX/Em：492/517nm (0.1 M Tris pH 8.0 (esterase))

9） 溶解性：溶于DMSO

10）化学结构式：

保存与运输方法

保存：2-8℃避光干燥保存，长期不用可置于-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：室温运输。

常见应用

CFDA（5(6)-Carboxyfluorescein diacetate，CAS：124387-19-5）常用来检测细菌活性和代谢活性。多与细胞核染料碘化丙啶（PI）或DAPI联合使用，以下列出此探针的一些应用文献，仅供交流学习用。

另外有资料显示，革兰氏阴性菌用CFDA染色所得的荧光强度会低于革兰氏阳性菌，原因在于，革兰氏阴性菌的外膜结构会在一定程度上阻挡CFDA进入细胞。对于革兰氏阴性菌染色，可使用添加含EDTA的染色缓冲液（比如0.1M-Phosphate buffer (pH8.5), 5%(w/v) NaCl, 0.5 mM EDTA）或戊二醛（参考文献：Morono Y et al. Application of glutaraldehyde for the staining of esterase-active cells with carboxyfluorescein diacetate. Biotechnol Lett. 2004 Mar;26(5):379-83.）

文献1）Yamaguchi N et al. Rapid monitoring of bacteria in dialysis fluids by fluorescent vital staining and microcolony methods. Nephrol Dial Transplant. 2007 Feb;22(2):612-6. Epub 2006 Nov 22.

检测背景：CFDA是一种比较流行的、灵敏的荧光底物用于预估活微生物（细菌、酵母或真菌）的酯酶活性。细胞质内的酯酶活性是微生物生理活性的一种指标。通过CFDA-DAPI双染色方法同时确定总细菌数和具有生理活性的细菌数（具有酯酶活性）。

检测对象：500ml透析液样本的细菌细胞

检测方法：Bacterial cells in 500 ml of dialysis fluid samples were vacuum-filtered onto polycarbonate black filters and then incubated in staining buffer [0.1 mol/l phosphate buffer (pH8.5), 5% (w/v) NaCl, 0.5 mmol/l EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid)] containing DAPI (final concentration, 1 μg/ml) and CFDA (final concentration, 150 μg/ml) in a filtration funnel for 5 min at room temperature (∼25°C). The staining buffer in the funnel was then removed by vacuum filtration. The filters were mounted on glass slides with immersion oil and fluorescing cells were counted at 1000 × magnification using an E-400 epifluorescence microscope equipped with a 100 W Hg lamp.

检测结果：


Fig 1.Bacterial cells in dialysis fluid. (A) Total bacterial cells stained with 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) and observed under ultraviolet excitation. (B) Esterase-active cells stained with carboxyfluorescein diacetate (CFDA) and observed under blue excitation. (C) Microcolonies stained with SYBR Gold and observed under blue excitation.

文献2）Majeed M et al. Rapid assessment of viable but non-culturable Bacillus coagulans MTCC 5856 in commercial formulations using Flow cytometry. PLoS One. 2018 Feb 23;13(2):e0192836.

检测对象：B. coagulans MTCC 5856 spores

检测方法：Double staining with CFDA and PI were carried out by incubating the spore suspension (107/ml) with 50μM CFDA at 37°C for 60 minutes in and 10μM PI in the last 10 min. The time for CFDA staining was standardized earlier at different times and 60 minutes was found to be optimum.

检测结果：

Fig 2. Flow cytometric analysis of B coagulans MTCC 5856 spores.10 mg of dry spores were suspended in 1ml of PBS and activated for 30 min at 75°C, followed by fluorescent staining as described in the methods section. Data represents mean± standard deviation of at least 3 independent experiments. A: Gating strategy for SYTOBC ™ staining- The microbeads and the stained spores are gated separately based on unstained control B: Gating strategy for CFDA and PI staining. The dot plot represents a double staining for both CFDA and PI. The quadrant 4(Q4) represents live cells, Q1- dead cells and Q2 damaged cells. The double positive cells were not considered for enumerating the live spores. C: Representative dot plot for the FCM analysis of Live and Dead spores D: Table showing the calculation of viable spores.

注意事项

1） 本品保存过程中远离氧化剂。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 名称 规格
MX3009-25MG CFDA, SE (CFSE)细胞增殖示踪荧光探针 25mg
MX3010-500T CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 500T
MX3011-50UG Calcein, AM, Ultra Pure Grade钙黄绿素（绿色） 50μg
MX3012-500T Calcein AM/PI Double Stain Kit活细胞/死细胞双染试剂盒 500T
MX4101-1G Fluorescein diacetate (FDA)二乙酸荧光素 1g
MX4102-25MG CDCFDA, SE活细胞示踪探针 25mg
MX4103-100MG CDCFDA (5(6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein diacetate)活细胞示踪探针 100mg
MX4104-25MG CFDA (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate)活细胞示踪探针 25mg

CFDA (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate) 活细胞示踪探针

发表于由

描述

CFDA (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate) 活细胞示踪探针

产品关键词：

5(6)-CFDA；Fluorescein diacetate (FDA) 二乙酸荧光素；；Calcein AM钙黄绿素；CDCFDA； CAS NO：124387-19-5；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）
CFDA (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate) MX4104-25MG 25mg 452
CFDA (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate) MX4104-100MG 100mg 992

产品描述

CFDA（5(6)-Carboxyfluorescein diacetate，CAS：124387-19-5），一种细胞膜渗透性的酯酶底物，用作一种活细胞探针，不仅能用来测定激活其荧光所需的酶活性，也能用来检测维持荧光产物保留在胞内的细胞膜完整性。一旦被胞内酯酶水解后，代谢产生羧基荧光素（Carboxyfluorescein, CF）。与荧光素相比，羧基荧光素含有更多的负电荷，从而能更好的保留在胞内。

产品特性

1） CAS NO：124387-19-5

2） 化学名：Spiro(isobenzofuran-1(3H),9′-(9H)xanthene)-ar-carboxylic acid, 3′,6′-bis(acetyloxy)-3-oxo-

3） 同义名：5(6)-CFDA; 5(6)-CFDA, mixed isomers;5-(and-6)-Carboxyfluorescein Diacetate, mixed isomers; 5(6)-Carboxy-di-O-acetylfluorescein; 5(6)-羧基荧光素二乙酸酯；

4） 分子式：C25H16O9

5） 分子量：460.39 g/mol

6） 外观：浅黄色至深黄色粉末

7） 纯度：≥90%（HPLC）

8） EX/Em：492/517nm (0.1 M Tris pH 8.0 (esterase))

9） 溶解性：溶于DMSO

10）化学结构式：

保存与运输方法

保存：2-8℃避光干燥保存，长期不用可置于-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：室温运输。

常见应用

CFDA（5(6)-Carboxyfluorescein diacetate，CAS：124387-19-5）常用来检测细菌活性和代谢活性。多与细胞核染料碘化丙啶（PI）或DAPI联合使用，以下列出此探针的一些应用文献，仅供交流学习用。

另外有资料显示，革兰氏阴性菌用CFDA染色所得的荧光强度会低于革兰氏阳性菌，原因在于，革兰氏阴性菌的外膜结构会在一定程度上阻挡CFDA进入细胞。对于革兰氏阴性菌染色，可使用添加含EDTA的染色缓冲液（比如0.1M-Phosphate buffer (pH8.5), 5%(w/v) NaCl, 0.5 mM EDTA）或戊二醛（参考文献：Morono Y et al. Application of glutaraldehyde for the staining of esterase-active cells with carboxyfluorescein diacetate. Biotechnol Lett. 2004 Mar;26(5):379-83.）

文献1）Yamaguchi N et al. Rapid monitoring of bacteria in dialysis fluids by fluorescent vital staining and microcolony methods. Nephrol Dial Transplant. 2007 Feb;22(2):612-6. Epub 2006 Nov 22.

检测背景：CFDA是一种比较流行的、灵敏的荧光底物用于预估活微生物（细菌、酵母或真菌）的酯酶活性。细胞质内的酯酶活性是微生物生理活性的一种指标。通过CFDA-DAPI双染色方法同时确定总细菌数和具有生理活性的细菌数（具有酯酶活性）。

检测对象：500ml透析液样本的细菌细胞

检测方法：Bacterial cells in 500 ml of dialysis fluid samples were vacuum-filtered onto polycarbonate black filters and then incubated in staining buffer [0.1 mol/l phosphate buffer (pH8.5), 5% (w/v) NaCl, 0.5 mmol/l EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid)] containing DAPI (final concentration, 1 μg/ml) and CFDA (final concentration, 150 μg/ml) in a filtration funnel for 5 min at room temperature (∼25°C). The staining buffer in the funnel was then removed by vacuum filtration. The filters were mounted on glass slides with immersion oil and fluorescing cells were counted at 1000 × magnification using an E-400 epifluorescence microscope equipped with a 100 W Hg lamp.

检测结果：


Fig 1.Bacterial cells in dialysis fluid. (A) Total bacterial cells stained with 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) and observed under ultraviolet excitation. (B) Esterase-active cells stained with carboxyfluorescein diacetate (CFDA) and observed under blue excitation. (C) Microcolonies stained with SYBR Gold and observed under blue excitation.

文献2）Majeed M et al. Rapid assessment of viable but non-culturable Bacillus coagulans MTCC 5856 in commercial formulations using Flow cytometry. PLoS One. 2018 Feb 23;13(2):e0192836.

检测对象：B. coagulans MTCC 5856 spores

检测方法：Double staining with CFDA and PI were carried out by incubating the spore suspension (107/ml) with 50μM CFDA at 37°C for 60 minutes in and 10μM PI in the last 10 min. The time for CFDA staining was standardized earlier at different times and 60 minutes was found to be optimum.

检测结果：

Fig 2. Flow cytometric analysis of B coagulans MTCC 5856 spores.10 mg of dry spores were suspended in 1ml of PBS and activated for 30 min at 75°C, followed by fluorescent staining as described in the methods section. Data represents mean± standard deviation of at least 3 independent experiments. A: Gating strategy for SYTOBC ™ staining- The microbeads and the stained spores are gated separately based on unstained control B: Gating strategy for CFDA and PI staining. The dot plot represents a double staining for both CFDA and PI. The quadrant 4(Q4) represents live cells, Q1- dead cells and Q2 damaged cells. The double positive cells were not considered for enumerating the live spores. C: Representative dot plot for the FCM analysis of Live and Dead spores D: Table showing the calculation of viable spores.

注意事项

1） 本品保存过程中远离氧化剂。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 名称 规格
MX3009-25MG CFDA, SE (CFSE)细胞增殖示踪荧光探针 25mg
MX3010-500T CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 500T
MX3011-50UG Calcein, AM, Ultra Pure Grade钙黄绿素（绿色） 50μg
MX3012-500T Calcein AM/PI Double Stain Kit活细胞/死细胞双染试剂盒 500T
MX4101-1G Fluorescein diacetate (FDA)二乙酸荧光素 1g
MX4102-25MG CDCFDA, SE活细胞示踪探针 25mg
MX4103-100MG CDCFDA (5(6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein diacetate)活细胞示踪探针 100mg
MX4104-25MG CFDA (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate)活细胞示踪探针 25mg

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 细胞增殖与示踪检测试剂盒

发表于由

描述

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

细胞增殖与示踪检测试剂盒

产品关键词：

CFDA, SE；Calcein AM 钙黄绿素；Cell Division 细胞分化（分裂）；Fluorescein diacetate (FDA)；PKH26；CAS NO：150347-59-4；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）
CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒

 MX3010-500T 500T 498
MX3010-1000T 1000T 768

【温馨提示】：见我司集奇生物提供的CFDA SE 超纯冻干粉末（#MX3009-5MG）。

【温馨提示】：见我司集奇生物提供的PKH26红色荧光探针用于常规细胞膜标记（#MX4021-100UL）。

产品描述

CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒（CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit）是一款基于荧光探针CFDA, SE，用于细胞增殖检测和细胞荧光示踪的检测试剂盒。此方法目前广泛替代MTT法或者3H-胸腺嘧啶核苷掺入法（3H-thymidine incorporation）等细胞增殖检测方法。本试剂盒包含粉末形式的CFDA, SE探针，细胞培养级的溶剂，以及细胞标记液，使用方便，操作简单。按照每个样本的标记体积为1ml来算，我司（金畔生物）提供两种规格的试剂盒，分别可检测500个和1000个样品。

CFDA, SE，英文全名5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester，CAS NO. 150347-59-4，是一种稳定的、细胞膜渗透性的非荧光染料，由两个醋酸基团和一个琥珀酰亚胺酯（SE）官能团组成的一个荧光分子。一旦主动扩散进入细胞，其醋酸基团被胞内酯酶切割，生成荧光素酯CFSE。CFSE具有高度荧光，且能通过其琥珀酰亚胺酯基团共价结合到细胞内的蛋白氨基基团。正是这个共价偶联反应，CFSE能够极其长期的保留在细胞内，长达数个月。另外，归因于这一稳定连接，一旦染料进入细胞，不会转移到邻近细胞。无活力细胞仍然是非荧光。而活细胞一旦分化，CFSE能够很均匀的分散到子细胞中，每分裂一次子代细胞约能得到亲本细胞1/2的荧光强度，因此，通过流式细胞仪对荧光强度的检测，能够依次分选出未分裂细胞，分裂一次的细胞（1/2荧光强度），分裂两次的细胞（1/4荧光强度），分裂三次的细胞（1/8荧光强度），以及以此类推其他分裂次数的细胞。CFSE可以检测分裂多达8次或更多次数的细胞增殖。

CFSE广泛用于细胞增殖和体内细胞示踪研究。CFSE的最大激发和发射波长分别为492nm和517nm，标记细胞后呈绿色荧光。使用流式细胞仪检测可用FL1检测通道。也能用荧光显微镜观察，使用FITC滤片。

产品包装

编号 组分 保存方法

产品编号/规格
MX3012-500T MX3012-1000T
MX3010-A CFDA SE粉末 -20ºC避光保存 1管 1管×2
MX3010-B CFDA SE溶剂 -20ºC避光保存 1ml 1ml×2
MX3010-C 细胞标记液（10X） -20ºC~4℃保存 50ml×2 50ml×4

保存与运输方法

保存：-20ºC保存，开封前1年有效，其中组分A（CFDA SE粉末）需严格避光，组分B避免强光照射。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） CFDA SE溶剂在低温（如4℃，冰浴）等条件下会凝固而粘在离心管底、管壁或盖子上，可将其置于25℃温育片刻直至全部融解后使用。

2） CFDA SE粉末经溶剂溶剂配制成储存液后一个月内用完最好，最多不超过三个月。因CFDA SE容易被水解，并在水溶液中变质。使用过程中尽量避免接触水。而在标记过程中接触到水是在允许范围内。

3） 荧光染料均存在淬灭问题，操作和储存过程中需注意避光，以减缓荧光淬灭。

4） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. CFDA SE储存液（1000X）制备

a） 将低温保存的CFDA SE粉末置于室温回温至少20min，之后短暂低速离心，让所有粉末都掉落至管底。同时也提前将CFDA SE溶剂置于室温或25℃水浴片刻直至充分融解。

b） 吸取一定量CFDA SE溶剂（比如400μl）到CFDA SE粉末中，充分溶解，短暂低速离心，之后全部转移到剩下的CFDA SE溶剂中，混匀后，此即为CFDA SE储存液（1000X）。此配制过程需要避光。

c） 按照单次用量分装，用铝箔纸包好后，置于≤-20℃避光干燥保存，最好一个月内用完，最长不超过三个月。-70℃保存能适当延长保存周期。

2. CFDA SE标记液（1X）制备

准备适量无菌的细胞培养级去离子水，根据实验需要用量，配制适量的CFDA SE标记液（1X）。比如，取10ml 细胞标记液（10X），加入90ml 去离子水，充分混匀后，即得到CFDA SE标记液（1X），短期置于4℃保存，长期不用可置于-20℃保存。

3. 染色步骤

a） 室温300×g离心细胞5min，吸掉上清。

b） PBS或其他生理缓冲液清洗细胞以去除任何残留的血清蛋白。之后再同上离心吸掉上清。

c） 用1ml CFDA SE标记液（1X）重悬细胞，调整密度为1-5 x 106cells/mL，转移到15ml离心管内。

d） 用CFDA SE标记液（1X）将CFDA SE储存液（1000X）稀释到2X。比如，取2μl CFDA SE储存液（1000X）到1ml CFDA SE标记液（1X），混匀后即为CFDA SE储存液（2X）。

e） 将1ml CFDA SE储存液（2X）加入到步骤c）中含1ml 待标记细胞的15ml离心管内，轻轻混匀。

f） 37℃避光孵育15min。【具体的孵育时间可根据实际情况做适当调整，常用孵育时间10-30min。】

g） 立即加入10ml完全细胞培养液（含血清）来淬灭染色过程，室温颠倒几次混匀。

h） 室温离心去上清，再用5-10ml完全细胞培养液清洗一次。

i） 再加入5-10ml完全细胞培养液，37℃孵育5min，以促进CFDA, SE在细胞内的充分反应和未反应的CFDA, SE重新回到完全细胞培养液中。离心去上清，完成最后一次清洗。

j） 之后用完全细胞液重悬细胞，此时可用荧光显微镜（Ex/Em=492/517nm，FITC滤片）或流式细胞仪（FL1通道）来观察标记效果。或开始用药物刺激处理或继续常规培养。经适当时间后用流式细胞仪检测细胞增殖，或用于特定目的的细胞示踪。标记细胞也可用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。标记的细胞呈绿色荧光。

常见应用和数据示例：

根据荧光信号的稀释来检测细胞增殖和分化（示踪）（Cell proliferation and cell division by Dye Dilution Method），此方法主要用来体内外检测淋巴细胞（T细胞和B细胞）的增殖，也能用来检测NK细胞，成纤维细胞甚至细菌。也有用来研究可移植造血干细胞的增殖。

示例1（体外）.

Fig 1. Murine CD4+lymphocytes, labelled with CDFA-SE were cultured with antigen-presenting cells with different peptides to stimulate either the memory or the memory and naïve cells. Up to five cell divisions can be observed.

示例2（体内）.

Fig 2. Ability of CFSE-labeled ovalbumin (OVA)-specific T cell receptor transgenic CD8+ OT-I T cells, when adoptively transferred into C57BL/6 mice to respond to OVA, data shown 3 days after adoptive transfer. Left panel: CD8+, CD45.1+ OT-1 T cells in recipient mice. Right panel: CFSE proliferation profile. Note non-divided population of CD8+ T cells in recipient mice not receiving antigen (light grey histogram) and auto-fluorescence of non-labeled lymphocytes (dark grey histogram). The Figure depicts CD8+ T cells that have divided 1-6 times based on CFSE dilution peaks. [Quah BJ et al. The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation. J Vis Exp. 2010 Oct 12;(44).]

相关产品

产品编号 产品名称 规格
MX3010-500T CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 500T
MX3009-5MG CFDA, SE细胞增殖示踪荧光探针 5mg
MX3012-500T Calcein AM/PI Double Stain Kit活细胞/死细胞双染试剂盒 500T
MX3011-50UG Calcein, AM, Ultra Pure Grade钙黄绿素（绿色） 50μg
MX4021-100UL PKH26 Red Fluorescent Probe for General Cell Membrane Labeling

PKH26红色荧光探针（用于常规细胞膜标记）

 100μl

CFDA, SE 细胞增殖示踪荧光探针

发表于由

描述

CFDA, SE细胞增殖示踪荧光探针

产品关键词：

CFDA, SE (CFSE)；Calcein AM钙黄绿素；活细胞染色探针；Fluorescein diacetate (FDA)；PKH26；CAS NO：150347-59-4；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）
CFDA, SE 细胞增殖示踪荧光探针 MX3009-5MG 5mg 580
CFDA, SE 细胞增殖示踪荧光探针 MX3009-25MG 25mg 1520

【温馨提示】：见我司集奇生物（maokangbio）提供的CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 细胞增殖与示踪检测试剂盒（#MX3010-500T）。

产品描述

CFDA, SE，英文全名5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester，CAS NO. 150347-59-4，是一种稳定的、细胞膜渗透性的非荧光染料，由两个醋酸基团和一个琥珀酰亚胺酯（SE）官能团组成的一个荧光分子。一旦主动扩散进入细胞，其醋酸基团被胞内酯酶切割，生成荧光素酯CFSE。CFSE具有高度荧光，且能通过其琥珀酰亚胺酯基团共价结合到细胞内的蛋白氨基基团。正是这个共价偶联反应，CFSE能够极其长期的保留在细胞内，长达数个月。另外，归因于这一稳定连接，一旦染料进入细胞，不会转移到邻近细胞。无活力细胞仍然是非荧光。而活细胞一旦分化，CFSE能够很均匀的分散到子细胞中，每分裂一次子代细胞约能得到亲本细胞1/2的荧光强度，因此，通过流式细胞仪对荧光强度的检测，能够依次分选出未分裂细胞，分裂一次的细胞（1/2荧光强度），分裂两次的细胞（1/4荧光强度），分裂三次的细胞（1/8荧光强度），以及以此类推其他分裂次数的细胞。CFSE可以检测分裂多达8次或更多次数的细胞增殖。

CFSE广泛用于细胞增殖和体内细胞示踪研究。CFSE的最大激发和发射波长分别为492nm和517nm，标记细胞后呈绿色荧光。使用流式细胞仪检测可用FL1检测通道。也能用荧光显微镜观察，使用FITC滤片。

产品特性

1） CAS NO.：150347-59-4

2） 化学名：3′,6′-bis(acetyloxy)-3-oxo-2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl ester-spiro[isobenzofuran-1(3H),9′-[9H]xanthene] -ar-carboxylic acid

3） 同义名：5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester, CFDA-SE

4） 分子式：C29H19NO11

5） 分子量：557.46

6） 纯度：≥94%（HPLC）

7） Ex/Em：492/517nm

8） 外观：近乎白色至黄色粉末或结晶

9） 溶解性：溶于DMSO，DMF

10）化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

1. 储存液制备

将低温保存的冻干粉产品置于室温回温至少20min，之后短暂低速离心，让所有粉末都掉落至管底。称取适量粉末用高质量无水DMSO溶解配制10mM储存液。比如5mg CFDA, SE（Mw: 557.46）用897μl DMSO充分溶解即得到10mM储存液。根据单次用量分装，置于≤-20℃避光干燥保存，避免反复冻融。储存液最好是一个月内用完，最多不超过三个月。

2. 工作液制备

于正式实验前，用HHBS缓冲液或其他生理缓冲液（pH 7.0）稀释储存液到1-10μM工作浓度，涡旋混匀。

【注意事项】：

1） CFDA, SE是胺反应性。CFDA, SE标记步骤不可使用含首胺的缓冲液，比如，HHBS或PBS是推荐的CFDA, SE稀释缓冲液。

2） CFDA, SE的染色浓度需要根据使用的细胞类型和实验目的来进行优化调整。比如，如果用于细胞增殖的荧光逐渐稀释分析，相对高浓度的CFDA, SE染色工作液比较理想；如果仅是用来标记细胞用作另外一种荧光标志探针的复染剂，相对低浓度的CFDA, SE染色工作液比较理想，能够良好的防止不同滤片设置间的荧光溢出。

3. 染色步骤

此染色步骤仅做指导，具体实验步骤可根据实际情况来做适当调整。

3.1 室温300×g离心细胞5min，吸掉上清。

3.2 用预热的无菌HHBS，PBS或其他生理缓冲液清洗细胞以去除任何残留的血清蛋白。之后同上离心细胞，吸掉上清。

3.3 用上述配制好的CFDA, SE染色工作液重新悬浮细胞，制备成1-3 x 107cells/mL的单细胞悬液。

3.4 室温或37℃避光孵育15~30min。中间可偶尔的轻轻颠倒混匀使得细胞均匀接触到染料。

3.5 加入5倍原始染色体积的细胞培养液（含10% FBS）来淬灭染色过程，轻轻颠倒几次混匀。

3.6 室温300×g离心细胞5min，吸掉上清。再用10ml完全细胞培养液清洗细胞一次。

3.7 再用10ml完全细胞培养液重新悬浮细胞，37℃孵育5min，以促进CFDA, SE在细胞内的充分反应和未反应的CFDA, SE重新回到完全细胞培养液中。离心去上清，完成最后一次清洗。

3.8 之后用完全细胞液重悬细胞，此时可用荧光显微镜或流式细胞仪来观察标记效果。或开始用药物刺激处理或继续常规培养。经适当时间后用流式细胞仪检测细胞增殖，或用于特定目的的细胞示踪。标记细胞也可用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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产品编号 产品名称 规格
MX3010-500T CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 500T
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MX3012-500T Calcein AM/PI Double Stain Kit 活细胞/死细胞双染试剂盒 500T
MX3011-50UG Calcein, AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素（绿色） 50μg

CFDA, SE；150347-59-4

发表于由

5(6)-CFDA, SE 是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞示踪染料，不仅可用于细胞增殖的体外实验，还可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程。 5(6)-CFDA, SE 是二乙酸荧光素（Fluorescein diacetate， FDA）的衍生物，具有细胞膜渗透性，本身不具有荧光发光性。当通过被动运输穿透细胞膜进入活细胞后，被胞浆内的酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester，CFSE），可发强烈的绿色荧光，不能穿透细胞膜，能完好的保留在胞内。CFSE 还可自发并不可逆地与细胞内的氨基结合从而偶联到细胞蛋白质上，同时过量且未被偶联的 5(6)-CFDA, SE通过被动扩散回到细胞外培养基内，被后续清洗步骤所清除。经 5(6)-CFDA, SE 标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数月，因此非常适用于细胞群落分析。

产品名称 CFDA, SE；150347-59-4
目录号 910805
中文名称 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester
英文名称 5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯
CAS 150347-59-4
分子式 C29H19NO11
分子量 557.46
存储条件 -20°干燥，避光
保存时间 一年
Ex/Em(nm) 504/529