Fluo-3, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针,超级纯


描述

Fluo-3, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针,超级纯

 

搜索关键词:

Fluo-3 AM;Fluo-4, AM;Rhod-2 AM;Rhod-4 AM;Fura-2 AM;可见光激发波长Ca2+荧光探针;CAS:121714-22-5;

 

产品信息:

产品名称

产品编号             规格             价格(元)   

Fluo-3, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针,超级纯

MX4503-1MG-A 20×50μg

4145

Fluo-3, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针,超级纯 MX4503-1MG-B 1mg

2965

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基本介绍:

Fluo-3是一种常用的可见光激发波长Ca2+荧光探针,具有较高的Ca2+捕获能力,通过荧光强度的变化直接反映Ca2+信号的动力学变化。当Fluo-3以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的,但一旦与Ca2+结合即可产生很强的荧光,荧光信号增强60~80倍,此时的最大激发波长为506nm,最大发射波长为526nm。可通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等来检测胞内钙离子水平的变化。

Fluo-3, AM是Fluo-3的一种乙酰甲酯衍生物,具有细胞膜渗透性,只需简单培养,即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内,即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-3,从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以冻干粉的形式提供,使用时只需经无水DMSO充分溶解,配置成2~5mM的储存液,并依据具体实验和相关文献资料调整到需要的工作浓度即可。

产品特性

CAS NO:121714-22-5

同义名:Fluo-3, Acetoxymethyl Ester

分子式:C51H50Cl2N2O23

分子量:1129.85

纯度:≥95% (HPLC)

解离常数(Kd):390nM (Ca2+)

最大激发/发射波长:506/526 nm

溶解性:溶于DMSO(2-5mM)

化学结构式:

保存与运输方法

保存:-20℃干燥避光保存,有效期至少1年。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)  荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

2)  乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量,开封前请将其短暂离心,以保证粉末落入管底。

3)  Fluo-3, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4)  基于BAPTA结构的钙离子指示剂比如Fluo-3,Fluo-4,能够结合很多重金属阳离子(比如:Mn2+、Zn2+、Pb2+)且实质上亲和力高于Ca2+。因此,由于这些重金属离子存在对钙测定的干扰可使用重金属螯合剂-TPEN(MX4529-25MG)来控制。

5)  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法(针对人T细胞Ca2+浓度检测)

A,  试剂准备

1)  配制Pluronic F-127母液

100mgPluronic F-127粉末(货号:MS4301-100MG)中加入500μl DMSO,配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存,不用冷藏。如有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。

2)Hanks Balanced Salt Solution(HBSS),w/o Ca2+,Mg2+

3)HEPES Buffer Saline

配方:10mM HEPES,1mM Na2HPO4,137mM NaCl,5mM KCl,1mM CaCl2,0.5mM MgCl2,5mM glucose,0.1% BSA,pH 7.4

B,  操作步骤

1)  用无水DMSO溶解Fluo-3, AM配制成2-5mM的储存液,或将已配好的Fluo-3, AM储存液取出于室温回温。(如:若配制成4mM的母液,需向50µg Fluo-3,AM中加入11µl无水DMSO)。

2)  向Fluo-3, AM+DMSO溶液中加入等体积的20% Pluronic F-127溶液,Pluronic F-127可以防止Fluo-3, AM在HBSS中聚合并促使探针更好进入细胞。【注】:Pluronic F-127可降低Fluo-3, AM的稳定性,因此只建议在配制工作液时加入,不建议将其加入储存液长期保存。

3)  用HBSS稀释Fluo-3, AM溶液,制备2-5µM的Fluo-3, AM工作液。【注】:推荐该探针加载浓度在4-5µM,具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性,建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低浓度探针。

4)  将Fluo-3, AM工作液加入细胞,加入量以覆盖细胞为准。37℃孵育20min。

5)  加入5倍体积的含有1% FBS的HBSS,继续孵育40min。

6)  用HEPES Buffer Saline洗涤细胞3次,然后用HEPES Buffer Saline使细胞重悬,制成1×105cells/ml的溶液。

7)  37℃孵育10min,之后用流式细胞仪或者共聚焦显微镜进行荧光钙离子检测。最大激发波长506nm,最大发射波长526nm。

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