描述

BY4741 Chemically Competent Cell 

酵母菌化学感受态细胞

温馨提示

见我司（金畔生物）整理的酵母双杂交（Yeast two-hybrid assay）产品专题。

产品信息

产品包装

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

产品描述

BY4741菌株是来源于S288C的一组缺失菌株成员之一，这些菌株通过敲除其常用选择性标记基因来最小化或去除与对应载体上常用的选择性标记基因的同源性，同时不会显著影响邻近基因的表达。BY4741是实验室常用菌株，为配子MATa型，广泛应用于钠-钾离子平衡，细胞抗盐，各种金属离子的吸收，重金属毒性研究，各种糖类、碳源对真核细胞生长的影响，以及过氧化物、超氧化物的吸收和运输的研究中。

BY4741菌株是组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸和尿嘧啶缺陷型菌株，可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入BY4741细胞。质粒pYES2的筛选标志为Ura，可用SD-Ura进行筛选。

本品为经特殊工艺制备的BY4741酵母菌化学感受态细胞，用pYES2质粒检测转化效率＞103cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52

注意事项

1. 最好在冰上融化感受态细胞。
2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。
3. BY4741对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。
4. 若使用pYES2质粒表达蛋白，需在培养基中加入2%半乳糖，以诱导目的基因的表达。注意筛选培养基中不用加半乳糖。当需要目的蛋白表达时，需加入半乳糖代替葡萄糖作为碳源。
5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；
6. 酵母感受态细胞不易长期保存，随着保存时间的延长转化效率会不断下降，建议不超过3个月。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态，方法如下：95-100℃水浴或金属浴3min，快速插入冰中，静置3min。重复一次。
2. 取100 µl冰上融化的BY4741化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒1-3 µg，单链Carrier DNA10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。
3. 之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。
4. 5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。
5. 用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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