描述
Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞
产品关键词：
GAL4-AbA酵母单杂交系统；Y1HGold；pAbAi；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal ；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；
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| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| MF2362-1000UL | Y1HGold Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 | 10×100μl | 290 |
| MF2362-5000UL | Y1HGold Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 | 50×100μl | 1320 |
产品组分：
| 组分编号 | 组分名称 | 保存 |
货号（规格） |
|
| MF2362-1000UL | MF2362-5000UL | |||
| MF2362-A | Y1HGoldCompetent Cell | -80℃ | 10×100μl | 50×100μl |
| MF2362-B | pGADT7 Control Vector (10ng/μl) | -80℃ | 10μl | 10μl |
| MF2362-C | Carrier DNA (5μg/μl) | -20℃ | 100μl | 500μl |
| MF2362-D | PEG/LiAC Solution | +4℃ | 5ml | 25ml |
产品描述
酵母单杂交是在酵母双杂交的基础上发展起来，不同于双杂交用来研究蛋白-蛋白间的相互作用，单杂交主要用于研究蛋白和DNA的相互作用。
Y1HGold是Clontech GAL4-AbA酵母单杂交系统用的菌株，MATα型，能直接转化质粒进行文库筛选。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pAbAi和pGADT7。前者筛选标志为Ura，用于表达pBait-AbAi构建子（通过将bait-DNA 单拷贝或串联重复序列克隆到pAbAi载体所得）；后者筛选标志为Leu，用于表达GAL4 AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统的工作原理在于：基因组整合有pBait-AbAi的酵母报告菌株，当诱捕蛋白（prey）结合到诱饵序列（bait-DNA），GAL4 AD会激活AUR1-C报告基因的表达，这一表达使得细胞能够在含筛选抗生素金担子素（Aureobasidin A，AbA）的培养基上生长。与传统的营养缺陷报告基因相比，AUR1-C（AbAr）在很低浓度（100-200 ng/ml）下即可以有效杀死非抗性克隆，大大降低背景克隆生长。这一优势也可降低酵母单杂交假阳性发生的概率。
本品为经特殊工艺制备的Y1HGold酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。
基因型
MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1
保存与运输方法
保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 最好在冰上融化感受态细胞。
2） 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。
3） Y1HGold对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。
4） 菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。
5） 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；
6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1） 取100 µl冰上融化的Y1HGold化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。
2） 之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。
3） 5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。
4） 用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入恒温培养箱29℃培养48-96 h。
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