BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

BL21 Star (DE3) pLysS;Rosetta (DE3);BL21 (DE3);表达感受态细胞;pET表达载体;IPTG诱导;非毒性蛋白表达;

货号 产品名称 规格                  
MF2336-1000UL     BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞      10×100μl
MF2336-5000UL BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2336-1000UL       MF2336-5000UL     
MF2336-A      BL21-AI Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2336-B Control Plasmid puC19, 10pg/μl     10μl 10μl

菌株描述

BL21-AI菌株来源于BL21菌株,是一种大肠杆菌B/r菌株(E. Coli B/r)。含有一个染色体整合的编码T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的基因到araBAD操纵子的araB位点,通过操控araBAD启动子来调节T7 RNA聚合酶的表达。此菌株已经敲除araB基因。tetA基因赋予四环素抗性,允许用四环素来验证菌株。

由于T7 RNAP基因位于araBAD操纵子的araB位点,因此,可通过糖类(L-阿拉伯糖和葡萄糖)来调节T7 RNA聚合酶的表达。在培养基内加入L-阿拉伯糖,能够诱导araBAD启动子下游T7 RNA聚合酶表达,进而促进目的蛋白表达;而在培养基加入葡萄糖,能够抑制araBAD启动子下游T7 RNA聚合酶表达,进而抑制目的蛋白表达。BL21-AI菌株适用于任何以T7启动子为基础的表达载体,进行高水平的重组蛋白表达。由于T7 RNA聚合酶的表达水平能被高度调控,该菌株特别适用于表达对其他BL21菌株有毒或抑制生长的蛋白。

BL21-AI菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶OmpT的基因,这两种酶的缺失能够降低外源重组蛋白在菌体内的降解,从而增加了蛋白表达量。最终,BL21-AI菌株表达所得的重组蛋白产量与其他BL21菌株相近。

BL21-AI菌株基因型:F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA

需求条件

建议在以下几个情况下选择BL21-AI菌株来表达您的目的基因:

a)   正在使用T7启动子为基础的表达载体(高拷贝或低拷贝皆可)

b)   当使用其他BL21菌株发现生长抑制现象(比如毒性)

c)   正要表达一种已知的毒性蛋白

产品描述

本品是大肠杆菌BL21-AI菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热激转化。特别适合任何以T7启动子为基础的表达载体系统,且要求严格调控和大量表达毒性蛋白的应用。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   最好在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)  从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。

2)   42℃热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3)   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4)   低速离心收菌(比如4000rpm,2min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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