BL21 (DE3)、Rosetta (DE3)、BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

BL21 (DE3);Rosetta (DE3);Kanamycin(kan)卡那霉素;Carbenicillin 羧苄青霉素;In-fusion 一步法克隆检测试剂盒;

货号 产品名称 规格     
MF2332-1000UL    BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大肠杆菌感受态细胞     10×100μl     
MF2332-5000UL BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大肠杆菌感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号        组分名称

货号(规格)

MF2332-1000UL      MF2332-5000UL    
MF2332-A BL21 (DE3) pLysS Competent Cell       10×100μl 50×100μl
MF2332-B Control Plasmid puC19, 0.1ng/μl 10μl 10μl

菌株描述

BL21 (DE3) pLysS菌株携带质粒pLysS,具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,从而能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)。

BL21 (DE3) pLysS菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pLysS Camr

产品描述

本品是大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1)感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)最好在冰上融化感受态细胞。

3)进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5)产品包装内含质粒pUC19 DNA(0.1ng/μl),供对照实验用。

6)BL21(DE3)pLysS菌株携带质粒pLysS,除复苏培养基不含抗生素外,其余所用培养基/培养液均应含34μg/ml氯霉素,以防止质粒丢失。

7)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内,置于冰浴中。【注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2)向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴静置30min。

3)42℃热击45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4)向每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,150 rpm振荡培养45min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5)根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收, 倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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