DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脱氧核糖核酸酶I溶液(无RNase,蛋白酶)


描述

DNase I Solution (RNase & Protease-free)

脱氧核糖核酸酶I溶液(无RNase&蛋白酶)

关键词:

Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase,5′-寡核苷酸-水解酶,Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas,EC No: 3.1.21.1,CAS NO:9003-98-9

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  DNase I Solution (RNase & Protease-free)       

  脱氧核糖核酸酶I溶液(无RNase &蛋白酶)

MF0405-200U          200U -20ºC 198
MF0405-1000U 1000U -20ºC 848

【温馨提示】:蛋白样品制备中核酸酶的降解推荐使用全能型的全能核酸酶Benzonase Nuclease,点击此处了解全能核酸酶的亮点在哪?

产品描述

脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶,偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键,产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸,平均消化产物最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下,DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点;而在Mn2+存在条件下,DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I可水解多种形式DNA,如单链DNA、双链DNA,甚至染色质(其切割速率受组蛋白影响)。

脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,最早从胰腺中分离而来,至今哺乳动物胰腺也是最主要的来源之一。DNase I以两对二硫键结合的多种糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范围是pH 7-8,DNase的活性依赖于Ca2+,并可被二价金属离子如Co2+,Mn2+,Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解,而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。

本品是即用型溶液形式的DNase I,不含RNase和蛋白酶,适用于各种RNA处理。另外还提供实验所需的反应缓冲液和终止液,节省时间且用起来更方便。

产品应用

◇   制备不含DNA的RNA样本;

◇   RT-PCR反应前RNA样本内基因组DNA等可能存在DNA污染的去除;

◇   T7,T3,SP6等RNA聚合酶催化的体外RNA转录后DNA模板的去除;

◇   DNase I足迹法(DNase I footprinting)研究DNA-蛋白质相互作用;

◇   缺口平移法标记探针用;

◇   制备随机DNA片段文库;

◇   TUNEL细胞凋亡检测中用于剪切DNA制备阳性对照;

产品包装

组分编号           组分名称

货号(规格)

MF0405-200U       MF0405-1000U    
MF0405-A DNase I Solution (RNase & Protease-free)       200U 1000U
MF0405-B 10×Reaction Buffer 200μl 1ml
MF0405-C 10×Stop Solution 200μl 1ml

保存与运输方法

保存:-20℃冻存,1年稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)   本DNase I的储存缓冲液为50mM Tris-acetate(pH 7.5),10mM CaCl2,50%(v/v) glycerol。如需对其进行稀释,则使用本储存缓冲液进行稀释。

2)   酶的使用过程中需放在冰盒或冰浴内,使用结束立即放回-20℃保存。

3)  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、RT-PCR反应前RNA样本内DNA污染的去除

1.1    DNA模板经核酸内切酶线性化,用酚/氯仿和氯仿/异丙醇提取DNA,用乙醇沉淀后,溶于适量无菌去离子水中。

1.2    往一个RNase-free EP管内依次加入下列试剂:

RNA样本 1μg                
10×Reaction Buffer 1μl
用DEPC-treated Water补充    至9μl
DNase I (1U/μl) 1μl

【注意】:如果需要处理较大量的RNA样品,可按比例放大上述反应体系。条件许可下最好往体系内加入适量RNase抑制剂(货号:MF0218-2KU)以防止RNA降解。

1.3    37℃孵育30min。

1.4    往上述体系内加入1μl 10× Stop Solution使其终浓度为1×,混匀。之后65℃孵育10min使DNase I失活。【注意】:一定要先加入10× Stop Solution,然后再加热失活RNase I,否则先加热可能引起RNA被降解。

1.5    加热处理后的RNA样品即可直接用作RT-PCR反应用的模板。

二、体外RNA反转录后模板DNA的去除

2.1 每个含有0.5μg模板DNA的反转录体系中加入1U DNase I,某些情况下模板DNA完全消化所需的DNase I需通过实验来摸索。

2.2 37℃孵育15min。

2.3 酚/氯仿抽提失活DNase I。

三、其他用途请参考上述方法或参考文献等进行。

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货号 名称 规格          
MF0402-10MG       Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein       10MG
MF0401-15KU Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein 15KU
MF0405-200U DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脱氧核糖核酸酶I溶液 200U
MF0203-100MG Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas 100mg
MP1509-25KU Benzonase Nuclease 全能核酸酶 25KU
MF0201-100MG Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K 100mg
MF0218-2KU RNase Inhibitor (40U/µl), Murine小鼠RNA酶抑制剂 2KU
MF0404-500ML DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(无DNase、RNase )  500ml