Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素(100 mg/ml)


描述

Zeocin (100mg/ml)  博莱霉素(100 mg/ml)

【温馨提示】:如果你对市场上常见中文名都叫【博莱霉素】,但英文名又不同的一些产品感到有所迷惑,可参考我司【金畔生物】整理的Bleomycins (BLMs) 博莱霉素家族常用抗生素成员的应用选择,也许有所收获。

博莱霉素家族常见产品:

筛选抗生素:Zeocin【冻干粉】  Zeocin【100mg/ml】     Phleomycin 腐草霉素

细胞功能研究:Bleomycin Sulfate 硫酸博莱霉素     Bleomycin A5 Hydrochloride 盐酸博莱霉素A5

产品标签

Zeocin 博莱霉素(博来霉素);Phleomycin 腐草霉素;Sh ble基因;Streptomyces verticillus 轮枝链霉菌;Hygromycin B 潮霉素B;G418遗传霉素;CAS NO.:11006-33-0

 

产品信息

产品名称

产品编号 规格 价格(元)    

Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素(100 mg/ml)   

MS0009-125MG       125mg  

420

Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素(100 mg/ml) MS0009-500MG 4×125mg

1480

Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素(100 mg/ml) MS0009-1000MG 8×125mg

2850

【提示1】:另现货供应Invitrogen原装进口的Zeocin(博来霉素);

【提示2】:对Zeocin不敏感的细胞,如丝状真菌和一些酵母菌,建议使用腐草霉素(货号:MS0008-1ML),抗性基因同样为Sh ble。

【提示3】:特价供应含Zeo+基因序列的质粒— — pcDNA 3.1/Zeo(+)(Invitrogen of Thermo),序列图谱点击下载文档。

产品描述

Zeocin™是博来霉素/腐草霉素(bleomycin/phleomycin)抗生素家族的成员之一,从轮枝链霉菌Streptomyces verticillus中分离得到。作用谱广泛,对细菌、真菌(包括酵母菌)、植物和哺乳动物细胞具很强的毒性。

Zeocin™是腐草霉素D1的商业名称,一种碱性、水溶性、铜离子螯合的糖肽抗生素。铜离子的存在使得溶液为蓝色,此铜螯合的形式为无活性。当抗生素进入细胞后,二价铜离子(Cu2+)被还原为一价铜离子(Cu+),并被细胞内的巯基化合物去除。铜离子被去除后,Zeocin被活化,嵌入DNA使其断裂,最终导致细胞死亡。来自Streptoalloteichus hindustanus的Sh ble基因赋予Zeocin抗性,该基因编码一种13,665Da大小的蛋白,以化学计量方式结合Zeocin,抑制其DNA双链切割活性。因此,能表达此蛋白的真核和原核宿主细胞被赋予Zeocin抗性。

本品为溶于去离子水的无菌溶液,浓度为100mg/ml,细胞培养级别。

产品特性

1)CAS NO.:11006-33-0

2)化学式:C55H83N19O21S2Cu

3)分子量:1137.41 g/mol

4)外观:蓝色溶液(100mg/ml in deionized,autoclaved water)

保存与运输方法

保存:-20℃避光保存,至少1年有效,避免反复冻融。

运输:冰袋运输。

建议工作浓度

1)大肠杆菌筛选:25-50μg/mL(低盐LB培养基,NaCl浓度不能超过5g/L)

2)酵母菌筛选:50-300μg/mL(YPD或基本培养基)

3)哺乳动物细胞筛选:50-1000μg/mL(合适培养基,根据细胞系而不同)

注意事项

1)Zeocin™对光敏感,需将抗生素,或含该抗生素的平板或培养基置于黑暗处。

2)降低细菌培养基的盐浓度,调整pH到7.5使其保持活性,因高离子强度和酸或碱性都会抑制Zeocin™活性。

3)储存Zeocin™在-30°C~-10°C,使用前需冰上融化。

4)Zeocin™有毒,操作时需注意防护,切勿与身体或皮肤直接接触。

5)Zeocin™是Invivogen公司的商标产品。

6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤(以哺乳动物细胞为例)

【注1】:Zeocin™的杀灭机制不同于新生霉素(neomycin)和潮霉素B(hygromycin B),细胞不会聚集成团和从培养板表面脱落。一旦接触到Zeocin™,敏感细胞会出现如下的形态变化:1)细胞体积明显增加(类似于巨细胞病毒感染容纳性细胞引起的肿大效应);2)异常的细胞形状包括细胞长臂(long appendages)出现;3)胞浆内出现大型空泡(源于内质网、高尔基体或支撑蛋白的破裂);4)质膜和核膜破裂,导致膜上出现许多孔。这些敏感细胞最终会完全破损,仅仅以细胞碎片的形式存在。

【注2】:Zeocin™抗性细胞按正常周期分化产生不同于敏感细胞的克隆。抗性细胞在形态上,与未接触Zeocin™的正常细胞没有任何差异。

【注3】:Zeocin™用于哺乳动物细胞筛选常用浓度为50-1000µg/ml(平均常用浓度为250-400μg/mL),影响筛选浓度的主要因素包括离子强度,细胞类型,细胞密度以及生长速率。以下步骤仅作参考,请根据自身实验体系做适当调整。

一、细胞对Zeocin™敏感性的确定(杀灭曲线建立)

1)重新铺板或者将满盘细胞重新分盘,使得细胞密度约25%,按照8个平板/组准备,培养24h,去除旧培养基。

2)加入含不同浓度Zeocin™的筛选培养基,Zeocin™浓度可设置为0, 50, 100, 200, 400, 600, 800和1000 μg/ml,每个浓度做3个平行;也可根据自身实验体系,设置不同的浓度梯度。

3)每3-4天更换新鲜的筛选培养基,并观察存活细胞的比例。选择在合适时间(1-2周内)杀死大多数细胞的浓度为最佳工作浓度。【注】:若是难以在显微观察下区分活细胞,建议使用台盼蓝染色来计算存活细胞的数量,以确定Zeocin™的最适浓度。

二、筛选稳定转染细胞系

1)转染细胞,用100mm培养皿进行培养。以未转染的细胞作为阴性对照。

2)转染后,用预热的1X PBS洗涤一次,加入新鲜培养基。

3)转染48-72h后,用含有最佳浓度Zeocin™(由灭杀曲线确定)的新鲜培养基筛选细胞。为了更好的鉴定和筛选细胞集落,建议将细胞按比例稀释成一系列浓度。

【注】:若待筛选细胞对Zeocin的抗性明显强于大部分细胞,按照以下方法克服此类耐性:用含Zeocin™培养基进行细胞分盘,置于37°C孵育2-3h,使得细胞贴壁。然后将细胞置于4°C,2h。记得使用Hepes作为培养基的缓冲体系。重新将细胞置于37°C孵育。4°C孵育细胞的目的是短时间内终止细胞分化,使得Zeocin™能发挥作用,杀死细胞。

4)每3-4天更换新鲜的选择培养基,直到出现细胞集落。

5)挑选并转移克隆到96或48孔板中。在进行更大孔径培养板或培养皿上扩大培养之前,确保培养细胞密度近100%。

三、稳定转染细胞系的维持培养

可采取以下方式维持培养稳定转染细胞:

1)使用含相同剂量Zeocin™的筛选培养基来维持培养;

2)降低Zeocin™剂量为原来的一半进行维持培养;

3)使用正好能预防敏感细胞生长但不足以致死的Zeocin剂量来维持培养【根据杀灭曲线来判断】;