Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas,≥500 uns/mg protein 脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺


描述

DNase I from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein

脱氧核糖核酸酶I (DNase I),来源于牛胰腺

关键词:

Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase,5′-寡核苷酸-水解酶,Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas,EC No: 3.1.21.1,CAS NO:9003-98-9

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Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein   

脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺

MF0402-10MG    10MG   -20ºC 250
MF0402-50MG 50MG -20ºC 680

产品描述

脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶,偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键,产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸,平均消化产物最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下,DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点;而在Mn2+存在条件下,DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I可水解多种形式DNA,如单链DNA、双链DNA,甚至染色质(其切割速率受组蛋白影响)。

脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,最早从胰腺中分离而来,至今哺乳动物胰腺也是最主要的来源之一。DNase I以两对二硫键结合的多种糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范围是pH 7-8,DNase的活性依赖于Ca2+,并可被二价金属离子如Co2+,Mn2+,Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解,而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。

本品来自牛胰腺,亲和色谱纯化制备所得,常用于去除蛋白或RNA样品中的DNA,或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以冻干粉形式供应,比活≥500 Kunit Units/mg蛋白。

产品特性

1)   CAS NO:9003-98-9

2)   分子量:~31 kDa

3)   同义名:DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脱氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶,脱氧核糖核酸酶A

4)   比活力:≥500 Kunit Units/mg protein

5)   活力定义:在50µl含40mM Tris-HCl, pH8.0,2.5 mM MgSO4,1mM CaCl2的反应缓冲体系中,37℃,10min内完全降解1µg λ-DNA所需的酶量即为一个活力单位。此反应条件下得到的一个单位DNase活力约等于一个Kuntiz unit。

6)   激活剂:多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

7)   抑制剂:EGTA,EDTA,盐离子浓度(>100mM)都能降低DNase活性

8)   热失活:含终止溶液(20mM EGTA,pH 8.0)内65℃,处理10min

9)   溶解性:溶于缓冲液(≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl(pH 7.5), 1mM MgCl2, 50% 甘油)

保存与运输方法

保存:冻干粉-20℃干燥冻存,至少3年稳定。

运输:冰袋运输。

使用方法

一、   储存液制备

将低温保存的本品置于室温回温至少20min,低速短时离心后,加入适量缓冲液配制成至少≥1mg/ml储存液(如:20mM Tris-HCl(pH 7.5), 1mM MgCl2, 50% 甘油),根据一定用量分装置于-20℃保存,至少1年稳定。

二、   反应缓冲液制备

建议1×反应缓冲液:40mM Tris-HCl(pH 8.0), 2.5mM (up to 10mM) MgSO4,1mM (up to 10mM) CaCl2

【注意】:当起始原料含EGTA,EDTA,其他螯合剂,和/或高浓度盐离子,此时反应缓冲液需更高浓度的Mg2+和Ca2+。

三、使用步骤(作为参考,具体实验可做适当调整)

2.1 往一个RNase-free PCR管内加入:1µg RNA样本;49 µl 1×反应缓冲液;1 µl DNase I, 1 unit/ml;【注意:酶的实际比活力请见产品标签】,混匀。

2.2 37℃孵育10-15min。【注意:消化时间不要超过15min或消化温度不要高于37℃,否则残留的RNase A污染可能会开始降解RNA】

2.3 加入1µl终止液(20mM EGTA,pH 8.0)结合Ca2+和Mg2+,之后于65-70℃失活10min,终止反应。【注意:必须在热失活之前加入终止液】

注意事项

1)  在不同的反应缓冲体系内,用来完全消化一定量DNA所需的DNase I量不同,请根据具体的工作体系或实验经验来决定。【注意:盐浓度>100mM会降低DNase I活性】

2)  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。