Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐


描述

Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐

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Puromycin 嘌呤霉素;G418 Sulfate G418硫酸盐;Geneticin遗传霉素;Puromycin resistance gene (Pac);Blasticidin S 杀稻瘟菌素(灭瘟散);Zeocin博莱霉素;CAS:58-58-2

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)    促销价(元)
Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐      MS0011-25MG        25mg            540 432
Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐 MS0011-100MG 100mg 1800 1440
Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐 MS0011-500MG 500mg 8500 6800

产品描述

嘌呤霉素(Puromycin),来源于白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)代谢产物的一种氨基糖苷类抗生素,

有效抑制革兰氏阳性菌生长,对抗酸杆菌的抑制活性相对较弱,但对革兰氏阴性菌的抑制活性更弱。还能抑制原生生物、藻类、哺乳动物和昆虫细胞的生长,一般2天内能杀死99%的细胞。作用机制在于:嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的结构类似物,能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸肽链中,导致肽链合成的永久终止,进而阻止蛋白质合成。嘌呤霉素还具有抗肿瘤活性。作为蛋白合成抑制剂,用来研究细胞分化中控制基因顺序表达和协同表达的转录调控机制。

对嘌呤霉素的抗性来自嘌呤霉素产生菌内发现的pac基因,其表达产物嘌呤霉素N-乙酰转移酶(puromycin N-acetyl-transferase)可通过乙酰化嘌呤霉素使其失活。这一特性使得嘌呤霉素常用来筛选和维持培养携带pac基因的哺乳动物细胞株,特别是慢病毒感染的细胞株。现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。某些情况下,也能用来筛选携带pac基因的大肠杆菌菌株。嘌呤霉素在CRISPR/Cas9基因编辑系统中也发挥重要作用。

本品为嘌呤霉素的二盐酸盐形式,CAS NO:58-58-2,粉末形式,可溶于水配制成50mg/ml储存液,0.22µm滤膜过滤除菌后,-20℃冻存。真核细胞常用的筛选浓度为1-10µg/ml。

产品特性

1)   化学名:3′-[α-Amino-p-methoxyhydrocinnamamido]-3′-deoxy-N,N-dimethyladenosine dihydrochloride

2)   同义名:Stylomycin hydrochloride; CL 13900 dihydrochloride; P638 dihydrochloride; CL16536; NSC 3055;

3)   CAS NO:58-58-2

4)   分子式:C22H29N7O5·2HCl

5)   分子量:544.43 g/mol

6)   外观:白色至灰白色粉末

7)   纯度:>98% (HPLC)

8)   熔点:175-177 °C

9)   溶解性:溶于水(50mg/ml),乙醇(~1mg/ml),DMSO(~10mg/ml),PBS,pH 7.2(~10mg/ml)

10)化学结构: 

保存与运输方法

保存:-20℃干燥保存,4年有效。

运输:冰袋运输。

使用方法

1、  储存液制备

用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的储存液,经0.22 μm滤膜过滤除菌,按照单次用量分装,于-20℃冻存,避免反复冻融。也可溶于甲醇,配制成10 mg/ml的储存液。

2、  建议工作浓度

哺乳动物细胞:1-10 μg/ml,最佳浓度使用宿主细胞杀灭实验(杀灭曲线)来确定;

大肠杆菌:LB琼脂培养基筛选敏感转化菌株,使用浓度为100-125μg/ml。

【注意】:使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌阳性转化子不仅需精确的pH值调节,而且受宿主细胞本身状态影响。

3、杀灭曲线的建立

嘌呤霉素合适的筛选浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、代谢情况,以及细胞所处周期等因素有关。为了筛选到稳定表达的细胞株,确定杀死未转染或感染细胞所需的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次实验一定要建立杀灭曲线(kill curve),筛选到适合自身实验体系的最优筛选浓度。

1)   于24孔板加入500 μl/孔制备好的细胞悬液,铺足够的孔以保证后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜。理想情况开始抗生素筛选时,细胞达到较高的密度(~60-80%),常用的细胞密度如下:

贴壁细胞:0.8 – 3.0 x 105cells/ml

悬浮细胞:2.5 – 5.0 x 105cells/ml

2)   准备筛选培养基:含梯度浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(比如,设置0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μg/ml,这11个筛选浓度,每个浓度2个复孔);

3)   将孵育过夜的细胞清洗后,更换新鲜制备的梯度筛选培养基;之后置于37℃,5%CO2培养箱内孵育;

4)   根据细胞的生长状态,约2-3天更换新鲜的筛选培养基;

5)   每日监测细胞,观察存活细胞率,从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非感染细胞的抗生素最低浓度,也就是将用到的最优筛选浓度。

【注意】:如果发现细胞开始变圆但没有从平板表面脱落可能是以下情况,

a)变圆但是未脱落是细胞开始死亡的一个信号,这些需要更长的筛选时间;

b)若在建议浓度1-10μg/ml范围内还不能完全处死细胞,此时需要检测药物是否有效,避免药物的反复冻融(<5)。

注意事项

1)   嘌呤霉素为有毒化合物,操作时需注意防护,切勿与身体或皮肤直接接触。

2)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常用筛选抗生素及其使用浓度

名称 抗性基因 有效筛选浓度(µg/mL)
潮霉素B(Hygromycin B) 大肠杆菌潮霉素抗性基因(hyg,hph) 哺乳动物细胞:200-500

细菌/植物细胞:100-300

真菌:300-1000

杀稻瘟菌素S(Blasticidin S) 蜡样芽孢杆菌的bsr基因

土曲霉的BSD基因

哺乳动物细胞:1-10

大肠杆菌:25-100

博莱霉素(Zeocin) Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene) 哺乳动物细胞:50-1000

大肠杆菌:25-50

酵母菌:50-300

腐草霉素(Phleomycin) Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene) 酵母菌:10

丝状真菌:25-150

遗传霉素(Geneticin,G418) Tn601 (903)或Tn5来源的新霉素抗性基因(neo) 哺乳动物细胞:200-2000

植物细胞:10-100

酵母细胞:500-1000

网柄菌属:10-100

嘌呤霉素(Puromycin) 链霉菌来源的嘌呤霉素N-乙酰转移酶基因(pac) 哺乳动物细胞:1-10

大肠杆菌:100-125

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货号 名称 规格           
MS0003-1G Hygromycin B潮霉素B(冻干粉) 1g
MS0003-20ML        Hygromycin B (50 mg/ml)潮霉素B(50 mg/ml) 20ml
MS0007-1ML Blasticidin S (10 mg/ml)杀稻瘟菌素S(灭瘟素)(10 mg/ml)    1ml
MS0008-1ML Phleomycin (20mg/ml)腐草霉素(20 mg/ml) 1ml
MS0009-125MG Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素(100 mg/ml) 125mg
MS0010-1G G418 Sulfate (Geneticin) 遗传霉素 1g
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