LabAssay™ NEFA LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒

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LabAssay™ NEFA
LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒

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LabAssay™ NEFALabAssay™ NEFA                               LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒

LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒


  

在血液中NEFA(Non-esterified Fatty Acid:游离脂肪酸)与白蛋白结合,被转运至外周组织,成为外周组织重要的能源来源。游离脂肪酸的浓度通过脂肪组织释放、外周组织消耗以及肝脏摄取进行调节。

本产品采用了基于酰基辅酶A合成酶(ACS)、酰基辅酶A氧化酶(ACOD)和3-甲基-N-乙基-N-(β-羟乙基)-苯胺(MEHA)的蓝紫色显色酶法。不可用于体外诊断。


检测原理

样品中的游离脂肪酸(NEFA)在酰基辅酶A(Acyl-CoA)和腺苷- 5'-三磷酸二钠(ATP)存在下,通过酰基辅酶A合成酶(ACS)的作用,生成酰基辅酶A、AMP以及焦磷酸(PPi)。生成的酰基辅酶A在酰基辅酶A氧化酶(ACOD)的作用下被氧化,同时生成2,3-反式烯酰辅酶A(2,3-trans-Enoyl-CoA)和过氧化氢。生成的过氧化氢在过氧化物酶(POD)的作用下,与3-甲基-N-乙基-N-(β-羟乙基)-苯胺(MEHA)和4-氨基安替比林(4-Aminoantipyrine)进行定量氧化缩合,生成蓝紫色色素。通过测定这种蓝紫色的吸光度,即可计算样品中的NEFA浓度。

LabAssay™ NEFA                               LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒

◆性能

● 标准曲线范围:0.4~1.97 mEq/L

● 检测时间:约 20 min

● 样品:血清、血浆(小鼠、大鼠、人、犬、猫)

● 所需样品量:4 μL

● 测定波长:550 nm

◆试剂盒组成

1.显色剂A——10 mL用×4瓶

2.显色剂A溶解液——45 mL×1瓶

3.显色剂B——20 mL用×4瓶

4.显色剂B溶解液——90 mL×1瓶

5.标准溶液(油酸1 mEq/L)——7 mL×1瓶

5. ※ 油酸1 mEq/L=1 mmol

◆标准曲线示例

LabAssay™ NEFA                               LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒


◆检测操作方法

微孔板法

按下表条件进行反应。

No.

标准溶液 蒸馏水或去离子水 样品量 浓度
1 80 µL 120 µL 4 μL 0.40 mEq/L
2 120 µL 80 µL 4 μL 0.60 mEq/L
3 160 µL 40 µL 4 μL 0.80 mEq/L
4 未经稀释 4 μL 1.00 mEq/L
5 未经稀释 8 μL 1.97 mEq/L*1

*1样品量通常是4 μL, 但在这里使用了8 μL。NEFA的浓度需要根据上表校正。

Test

标准

空白对照

样品盲检*2

显色试剂 A

80 μL

80 μL

80 μL

80 μL

待测物

血清 4 μL

标准溶液 4 μL

蒸馏水或去离子水 4 µL

充分混合*3、37 ℃加热10 min。

显色试剂 B

160 μL

160 μL

160 μL

160 μL

待测物

血清 4 μL

充分混合*3、37 ℃加热10 min。

恢复至室温,在30 min内以空白作为对照,测定样品和标准溶液的吸光度。

550 nm 吸光过滤

*2:普通的样品无需样品盲检。请使用乳糜血清或溶血血清进行测试。

*3:使用板式搅拌机,在600~1000 rpm下搅拌1 min左右。

◆加标回收测试

NEFA的加标回收测试,将已知含量的标准品加标到人、小鼠、大鼠样品中,n=2。

人样品

人样品

添加量(mEq/L)

测定值(mEq/L)

回收量(mEq/L)

回收率(%)

血清样品

0.69

0.4

1.14

0.45

111.80%

0.61

1.34

0.64

105.70%

0.78

1.54

0.85

108.50%

1.01

1.73

1.03

102.30%

血浆(EDTA)

样品

0.28

0.4

0.7

0.43

105.30%

0.61

0.9

0.62

102.50%

0.78

1.12

0.84

106.80%

1.01

1.34

1.06

105.40%

小鼠样品

小鼠样品

添加量(mEq/L)

测定值(mEq/L)

回收量(mEq/L)

回收率(%)

血清样品

0.7

0.4

1.07

0.37

91.70%

0.61

1.31

0.61

100.10%

0.78

1.44

0.74

94.50%

1.01

1.62

0.92

91.30%

血浆(EDTA)

样品

0.62

0.4

0.99

0.37

92.50%

0.61

1.29

0.68

111.50%

0.78

1.38

0.77

97.80%

1.01

1.62

1

99.10%

大鼠样品

大鼠样品

添加量(mEq/L)

测定值(mEq/L)

回收量(mEq/L)

回收率(%)

大鼠血清样品

0.57

0.4

1

0.43

106.40%

0.61

1.21

0.65

106.20%

0.78

1.4

0.83

106.40%

1.01

1.57

1.01

99.70%

大鼠血浆

(EDTA)样品

0.41

0.4

0.86

0.45

111.50%

0.61

1.07

0.66

108.50%

0.78

1.27

0.86

109.50%

1.01

1.44

1.02

101.40%

培养基样品

样品

添加量(mEq/L)

测定值(mEq/L)

回收量(mEq/L)

回收率(%)

50%培养基

+标准品

0.03

0.374

0.409

0.38

101.60%

0.683

0.71

0.68

99.60%

0.829

0.812

0.782

94.40%

1.013

1.059

1.03

101.70%

◆样品检测示例

人血清样本

测定值(mEq/L)

mean

SD

CV(%)

混合人血清,男性

0.686

0.688

0.687

0.001

0.2

混合人血浆

(K2EDTA),男性

0.354

0.35

※0.352

0.003

0.8

※参考值

20%稀释CD-1(ICR)雄性小鼠正常血清

序号

测定值(mEq/L)

Mean(mEq/L)

SD

CV(%)

1

1.119

1.117

1.118

0.001

0.1

2

0.783

0.793

0.788

0.007

0.9

3

0.7

0.731

0.715

0.022

3.1

4

0.795

0.792

0.794

0.002

0.2

5

0.825

0.833

0.829

0.005

0.6

100%CD-1(ICR)雄性小鼠正常血浆(K2EDTA)

序号

测定值(mEq/L)

Mean(mEq/L)

SD

CV(%)

1

0.311

0.308

※0.309

0.002

0.6

2

0.319

0.321

※0.320

0.002

0.6

3

0.202

0.208

※0.205

0.004

2

4

0.173

0.185

※0.179

0.008

4.6

5

0.293

0.318

※0.305

0.017

5.6

※参考值

10%稀释雄性Sprague Dawley大鼠正常血清

序号

测定值(mEq/L)

Mean(mEq/L)

SD

CV(%)

1

0.3

0.3

※0.300

0

0

2

0.373

0.368

※0.371

0.004

1.1

3

0.301

0.277

※0.289

0.017

5.8

4

0.365

0.364

※0.365

0

0.1

5

0.403

0.362

※0.382

0.029

7.6

※参考值

100%雄性Sprague Dawley大鼠正常血浆(K2EDTA)

样品批次

测定值(mEq/L)

Mean

SD

CV(%)

RAT432145

0.336

0.33

※0.333

0.004

1.2

RAT432146

0.358

0.354

※0.356

0.003

0.8

RAT432147

0.311

0.339

※0.325

0.02

6

RAT432148

0.222

0.214

※0.218

0.005

2.6

RAT432149

0.522

0.508

0.515

0.01

1.9

※参考值


◆样品检测示例

100%雄性比格犬正常血清

序号

测定值(mEq/L)

Mean(mEq/L)

SD

CV(%)

年龄

1

0.654

0.657

0.656

0.0027

0.4

4

2

0.642

0.688

0.665

0.032

4.8

6

3

0.419

0.431

0.425

0.009

2

6

4

0.377

0.383

※0.38

0.0057

1.5

11

5

0.887

0.877

0.882

0.007

0.8

12

6

0.604

0.595

0.599

0.006

1.1

6

7

0.987

1.025

1.006

0.0267

2.7

10

8

0.501

0.51

0.506

0.006

1.2

4

※参考值

100%雄性比格犬正常血浆(EDTA)

序号

测定值(mEq/L)

Mean(mEq/L)

SD

CV(%)

年龄

1

0.44

0.444

0.442

0.0033

0.7

4

2

0.419

0.435

0.427

0.011

2.6

6

3

0.311

0.306

※0.308

0.0037

1.2

10

4

0.47

0.487

0.478

0.0123

2.6

12

5

0.472

0.475

0.473

0.005

1

6

6

0.37

0.364

※0.367

0.0047

1.2

11

7

0.789

0.77

0.78

0.0133

1.7

10

8

0.439

0.384

0.411

0.0387

9.4

12

※参考值

100% 雄性短毛猫正常血清

序号

测定值(mEq/L)

Mean(mEq/L)

SD

CV(%)

年龄

1

0.709

0.726

0.717

0.0117

1.6

3

2

0.628

0.642

0.635

0.01

1.6

3

3

1.004

1.003

1.004

0.0053

0.5

6

4

0.974

0.987

0.981

0.0093

0.9

4

5

0.624

0.649

0.636

0.017

2.7

6

6

1.175

1.212

1.193

0.0267

2.3

6

7

1.086

0.959

1.022

0.0893

8.8

1

8

0.371

0.393

※0.382

0.0157

4.1

1

※参考值

100%雄性短毛猫正常血浆(EDTA)

序号

测定值(mEq/L)

Mean(mEq/L)

SD

CV(%)

年龄

1

1.092

1.107

1.099

0.0103

0.9

0.5

2

0.177

0.172

※0.174

0.0033

2

1

3

0.243

0.24

※0.241

0.0043

1.7

3

4

0.32

0.319

※0.320

0.0067

2.2

0.5

5

0.363

0.354

※0.359

0.006

1.7

3

6

0.206

0.189

※0.197

0.012

6.2

3

7

0.232

0.199

※0.215

0.024

11.1

0.5

8

0.142

0.12

※0.131

0.016

12.3

1

※参考值

◆稀释线性度测试

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※ 产品已更新,旧编号为:294-63601

参考文献

1)

Kobayashi, Y. et al. : J. Pharmacogn. Nat. Prod., online (2015). Effects of Morus alba L. (Mulberry) Leaf Extract in Hypercholesterolemic Mice on Suppression of Cholesterol Synthesis
※小鼠肝组织提取物

2)

Gao, F. et al. : Evid. Based Complement. Alternat. Med., 2015, 801291 (2015).Effect of Keishibukuryogan on Genetic and Dietary Obesity Models
※大鼠肝组织提取物

3)

Ogawa, K. et al. : Reprod. Med. Biol., online (2018). Non-esterified fatty acid-associated ability of follicular fluid to support porcine oocyte maturation and development
※猪卵泡来源卵泡液

4)

Wang, F. et al. : J. Mol. Endocrinol.52, 133 (2014). LGR4 acts as a link between the peripheral circadian clock and lipid metabolism in liver
※小鼠血浆

5)

Uchida, K. et al. : Exp. Anim.58, 181 (2009). Hyperlipidemia and hyperinsulinemia in the spontaneous osteoarthritis mouse model, STR/Ort
※小鼠血清


产品列表

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
633-52001 LabAssay™ NEFA 
LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒
500 tests

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