SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

产品中心 > 生命科学 > 疾病研究 > 传染性疾病

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit
SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit

SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

试剂盒组成

20 Reactions

RT酶混合物(20×)

20 µL x 1支

一步反应混合物(2×)

200 μL x 1支

484E Wild Type Primer & Probe   Mixture(probe:FAM)
484E野生型引物&探针混合物(探针:FAM)

10 µL x 1支

E484K Mutant Type Primer & Probe   Mixture(probe:FAM)
E484K突变型引物&探针混合物(探针:FAM)

10 µL x 1支

200 Reactions

RT酶混合物(20×)

200 µL x 1支

一步反应混合物(2×)

1 mL x 2支

484E Wild Type Primer & Probe   Mixture(probe:FAM)
484E野生型引物&探针混合物(探针:FAM)

100 µL x 1支

E484K Mutant Type Primer & Probe   Mixture(probe:FAM)
E484K突变型引物&探针混合物(探针:FAM)

100 µL x 1支

背景

新冠病毒突变株在世界范围内不断扩散,感染人数也在不断增多。

有报告指出,新冠病毒Beta(B.1.351)突变株和Gamma(P.1)突变株含有的E484K突变或会逃避免疫,使疫苗的效果降低1-3)


※ Beta(B.1.351)突变株:在南非首次发现的突变株

※ Gamma(P.1)突变株:在巴西首次发现的突变株

 

通过FUJIFILM Wako开发的Primer设计技术,可以高灵敏检测难以被检测的基因点突变。本产品是快速简便检测E484K突变的试剂盒。

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

特点

判定容易

通过比较使用突变株与野生株Primer/Probe Set时的Ct值来判定

一步法RT-qPCR快速检测突变

约70 min即可完成

使用FUJIFILM Wako研发的Primer/Probe,高灵敏检测突变

所有突变株均可在相同的反应条件下检测

由于N501Y、E484K、L452R、E484Q的PCR反应条件均相同,可在同一个96孔板中进行检测。

 

 

检测原理

采用TaqMan®探针的一步法RT-qPCR。

利用FUJIFILM Wako开发的Primer,高灵敏度检测点突变。

▼使用前

病毒RNA量较多情况下,在突变株中使用常规株(非突变)检测用“484E Wild type Primer & Probe Mixture”,也可以观察到扩增信号。务必使用常规株(非突变)检测用的“484E Wild type Primer & Probe Mixture”和突变株检测用的“E484K Mutant Type Primer & Probe Mixture”两种试剂进行检测。

比较两个Ct值,若突变株检测用“E484K Mutant Type Primer & Probe Mixture”的Ct值小,则可判断病毒为E484K突变株。

突变株的检测应用数据

本试剂盒已经检出以下3种新冠病毒(SARS-CoV-2)株。

● Gamma株(P.1)突变株(TY7-501、E484K突变N501Y突变,由日本国立感染症研究所提供)

● Beta株(B.1.351)突变株(TY8-612、E484K突变、N501Y突变,由日本国立感染症研究所提供)

● Alpha株(B.1.1.7)突变株(QHN001、E484K无突变N501Y突变,由日本国立感染症研究所提供)

● VR-1986HK(E484K无突变N501Y突变ATCC)

样品拷贝份数:5000、500、50 copies/Well

循环数:45

 


 gamma(P.1)株:TY7-501(E484K突变、N501Y突变)

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

5000 copies

500 copies

50 copies

Gamma株

(含有E484K突变)

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

对于含有E484K突变的gamma株(P.1)突变株,使用突变株检测用的“E484K Mutant type Primer & Probe”,可以确认到扩增信号

常规株(非突变)检测用的“484E Wild type Primer & Probe”,在5000 copies的条件下可以观察到扩增信号,但可以在更低Ct值下检测到突变株,由此判断为E484K突变株。在500 copies和50 copies的条件下,未能检测到常规(非突变)的扩增信号。



 Beta株(B.1.351):TY8-612(E484K突变、N501Y突变)

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

5000 copies

500 copies

50 copies

Beta株

(含有E494K突变)

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

对于含有E484K突变的beta株(B.1351)突变株,使用突变株检测用的“E484K Mutant type Primer/Probe”,可以确认到扩增信号

常规株(非突变)检测用的“484E Wild type Primer/Probe”,在5000 copies的条件下可观察到轻微的扩增信号,但可以在更低的Ct值下检测到突变株,由此判断为E484K突变株。在500 copies和50 copies的条件下,未能检测到常规(非突变)的扩增信号。



 Alpha株(B.1.1.7):QHN001(E484K无突变N501Y突变)

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

5000 copies

500 copies

50 copies

alpha株

(含有E484K突变)

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

对于不含E484K突变的alpha株(B.1.1.7)突变株,利用常规(非突变)检测用的“484E Wild type Primer&Probe”,可以确认到扩增信号

突变株检测用的“E484K Mutant type Primer&Probe”,在5000copies的条件下可观察到扩增信号,但可以在更低的Ct值下检测到常规(非突变),由此判断为常规株的突变株。在500 copies和50 copies的条件下,未能检测到突变株的扩增信号。

 


④ VR-1986HKE484K无突变N501Y无突变)

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

5000 copies

500 copies

50 copies

无突变

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

对于不含N501Y突变和E484K突变的VR-1986HK,利用常规(非突变)检测用的“484E Wild type Primer&Probe”,可以确认到扩增信号

关于突变株检测用的“E484K Mutant type Primer&Probe”,在5000 copies的条件下可观察到扩增信号,但可以在更低的Ct值下检测到常规(非突变),由此判断为常规株的突变株。在500 copies和50 copies的条件下,未能检测到突变株的扩增信号。

PCR反应条件

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

◆常规株以及突变株的基因型

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

FAQ

Q:能否判定新冠病毒阳性/阴性?

A:本试剂盒检测阳性样品中是否存在基因突变,无法判定阳性/阴性。

Q:能否检测用直接PCR法简单提取的RNA样品?

A本试剂盒无法检测简单提取的RNA。请使用RNA提取/纯化试剂盒等生成的RNA。

      离心柱:ISOSPIN Viral RNA(产品编号: 310-08931, 日本基因)

      自动核酸提取仪:QuickGene-Auto 12S/24S(倉敷紡績,还需要QuickGene AutoS RNA Virus Kit)

Q:试剂盒包装“200 Reactions”是什么意思?

A:【200 Reactions】是指实时PCR可以分开200孔进行。1个样品需要2个孔,即100个样品。

 ①    含有常规株的Primer&Probe的孔

 ②    含有突变株的Primer&Probe的孔

Q:试剂盒中是否包含病毒的阳性对照RNA?

A:本试剂盒不含阳性对照。若有需要,请向FUJIFILM Wako客服咨询。

Q:当野生株和突变株的扩增曲线均起峰时,应如何判断?

A如果病毒量高,无论是突变株样品,还是野生株,都有可能在其Primer&Probe中观察到扩增信号。然而,在此情况下,突变株的扩增信号上升

      得更快(Ct值小)。请务必通过突变株和常规株用的两种Primer&Probe进行检测,以确定 Ct 值的差异。

Q:是否存在E484K单独突变?

A不含N501Y突变、但含E484K突变的E484K单独突变株,已被确认为R.1株。但目前的信息较少,日本国立传染病研究所认为它是需要关注的突

      株(VOI),而不是高关注突变株(VOC)。

参考文献

1.

Nelson, G., Buzko, O., Spilman, P., Niazi, K., Rabizadeh, S., Soon-Shiong, P. : bioRxiv (2021). doi:https://doi.org/10.1101/2021.01.13.426558

2.

 Jangra, S., Ye, C., Rathnasinghe, R., Stadlbauer, D., PVI study group, Krammer,F., Simon, V., Martinez-Sobrido, L., García-Sastre, A., Schotsaert, M. : medRxiv (2021). doi:https://doi.org/10.1101/2021.01.26.21250543

3.

Wang, Z. et al. : Nature (2021). doi:10.1038/s41586-021-03324-6


产品列表

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
287-35603 SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit 
SARS-CoV-2 E484K突变检测试剂盒
20 Reactions
281-35601 SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit 
SARS-CoV-2 E484K突变检测试剂盒
200 Reactions

免责声明

1. 本公司密切关注本网站发布的内容,但不保证发布内容的准确性、完整性、可靠性和最新性等。

2. 本公司不保证使用本网站期间不会出现故障或计算机病毒污染的风险。

3. 无论何种原因,使用本网站时给用户或第三方造成的任何不利或损害,本公司概不负责。此外,对于用户与其他用户或第三方之间因本网站发生的任何交易、通讯

3. 纠纷,本公司概不负责。

4. 本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗,仅可用于科研等非医疗目的。如任何用户将本网站提供的产品和服务用临床诊断或治

4. 疗,以及他特定的用途或行为,本公司概不保证其安全性和有效性,并且不负任何相关的法律责任。