高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒 Mature BDNF ELISA Kit Wako, High Sensitive

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高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒
Mature BDNF ELISA Kit Wako, High Sensitive

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Mature BDNF ELISA Kit Wako, High Sensitive

脑源性神经营养因子(BDNF: Brain-derived neurotrophic factor)是大脑中丰富的神经营养因子之一,参与神经发生、神经保护和突触形成等。此外,它还有望作为抑郁症等精神疾病的生物标志物。

BDNF的前体proBDNF经加工,成为Mature BDNF(mBDNF)。据报告,proBDNF和mBDNF拥有不同的生理活性,因此,区分和检测每种BDNF非常重要。

高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒Wako可高灵敏度检测样品中的mBDNF。采用发光检测系统,灵敏度是显色检测系统mBDNF ELISA试剂盒(产品编号:296-83201)的约35倍。因此,可以检测传统试剂盒难以检测的小鼠血清、血浆和人唾液中的mBDNF。此外,与proBDNF的交叉性也比现有产品低,可特异性检测mBDNF。

高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒                              Mature BDNF ELISA Kit Wako, High Sensitive

通知

  本试剂盒为“高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒(产品编号:298-83901,以下称旧款试剂盒)”的改良试剂盒。旧款产品已于2023年6月

  30日终止销售。

  相比旧款试剂盒,本产品可更高灵敏度地检测mBDNF,并且两款试剂盒的检测值具有相关性。推荐使用过旧款试剂盒的客户继续使用本试剂

  盒。

◆特点

● 高灵敏度检测mBDNF

     标准曲线的下限值为0.116 pg/mL,可检测传统试剂盒难以检测的小鼠血清、血浆和人唾液中的mBDNF。

● 与proBDNF几乎无交叉,可特异性检测mBDNF

     与人proBDNF的交叉率为1.30%,与小鼠proBDNF的交叉率为0.328%。

表1 比较FUJIFILM Wako试剂盒和传统试剂盒


本试剂盒
(发光系统)

FUJIFILM Wako
(显色系统)

A公司试剂盒

B公司试剂盒

C公司试剂盒

标准曲线下限值

0.116 pg/mL

4.1 pg/mL

62.5 pg/mL

15.6 pg/mL

15.0 pg/mL

与人proBDNF的交叉率

1.30 %

约10 %

约10 %

约15 %

约50 %

◆试剂盒组成

96次用

  抗体包被酶标板

1 plate 

  Mature BDNF标准品 (冻干品)

1支

  缓冲液

60 mL

  生物素标记抗体(冻干品)

1支

   HRP-Streptavidin溶液

100 μL

  发光试剂 1

6 mL

  发光试剂 2

6 mL

  清洗液(10x)

100 mL

  封板膜

4 张

◆检测原理

高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒                              Mature BDNF ELISA Kit Wako, High Sensitive

本试剂盒使用mBDNF的N端断面特异性单克隆抗体与BDNF单克隆抗体组合而成的夹心法ELISA。通过使用Mature BDNF的N端断面识别抗体,抑制与proBDNF的交叉反应性,并使用发光底物提高了灵敏度。

◆试剂盒性能


  标准曲线范围   0.116 – 50 pg/mL
  检测对象   Mature BDNF
  检测对象样品   人:血清/血浆/唾液
  小鼠:血清/血浆/脑匀浆
  大鼠:血清/血浆
  所需样品量   13 μL(4倍稀释时)
  检测时间   约4 h
  检测法   发光系统(需要发光检测用读取器)

◆标准曲线示例

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◆检测数据

加标回收测试

样品

添加量
    (pg/mL)

检测值
    (pg/mL)

回收量
    (pg/mL)

回收率(%)

唾液

0

0.386

0.5

0.875

0.489

97.8

5

5.47

5.08

102

30

30.1

29.7

99

平均  

99.6

血清

0

5.74

0.5

6.21

0.47

94

5

10.9

5.16

103

30

35.7

30

100

平均  

99

血浆

0

4.27

0.5

4.78

0.51

102

5

9.53

5.26

105

30

34.4

30.1

100

平均  

102

小鼠

样品

添加量
    (pg/mL)

检测值
    (pg/mL)

回收量
    (pg/mL)

回收率(%)

血清

0

0.646

0.5

1.11

0.464

92.8

5

5.38

4.73

94.6

30

30.7

30.1

100

平均  

95.8

血浆

0

0.116

0.5

0.614

0.498

99.6

5

4.78

4.66

93.2

30

32.2

32.1

107

平均  

99.9

大鼠

样品

添加量
(pg/mL)

检测值
(pg/mL)

回收量
(pg/mL)

回收率(%)

血清

0

0.86

0.5

1.33

0.47

94

5

6.03

5.17

103

30

28.5

27.6

92

平均  

96.3

血浆

0

0.767

0.5

1.26

0.493

98.6

5

5.95

5.18

104

30

28.4

27.6

92

平均  

98.2

稀释线性测试

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小鼠

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大鼠

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与其他相似蛋白的交叉率


确认与proBDNF和神经营养因子家族(NGF、NT-3和NT-4)之间的交叉性。

生物种类

蛋白

交叉率(%)

proBDNF

1.3

NGFβ

< 0.232

NT-3

< 0.232

NT-4

< 0.232

小鼠

proBDNF

0.328

NGFβ

< 0.232

NT-3

< 0.232

NT-4

< 0.232

【结果】

可以确认与proBDNF和神经营养因子家族(NGF、NT-3和NT-4)几乎没有交叉。

野生型和BDNF敲除小鼠脑匀浆的检测

为确认对BDNF的特异性,使用本试剂盒检测野生型小鼠和BDNF敲除小鼠脑匀浆中的mBDNF。

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【结果】

BDNF敲除小鼠的检测值非常低,可确认对BDNF的特异性高。

◆产品列表

产品编号

产品名称

产品规格

产品等级

290-85801

Mature BDNF ELISA Kit Wako, High Sensitive
高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒

96次

免疫化学用

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Mature BDNF ELISA Kit Wako
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免疫化学用

017-28071

Anti BDNF, Monoclonal Antibody(2D7)
抗BDNF,单克隆抗体(2D7)

100 μL

免疫化学用

014-28081

Anti BDNF, Monoclonal Antibody(3C8)
抗BDNF,单克隆抗体(3C8)

100 μL

免疫化学用

019-28411

Anti proBDNF, Monoclonal Antibody(3C10H)
抗proBDNF,单克隆抗体(3C10H)

100 μL

免疫化学用

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FAQ


◆关于样品

Q1. 

如何储存样品?

A1. 

长期存储样品建议在-80℃以下冻存。

Q2.

采集唾液样品的推荐方法?

A2. 

采集检测用的唾液推荐使用流涏法。流涏法是通过将唾液滴入小瓶或试管来收集样品的方法。

已确认使用棉花和灭活的聚合物材料制的棉签采集的样品,检测结果与流涏法相当。但需注意,不同的棉签材质,可能会吸附待测物质。


Q3.

若唾液样品的检测效果不好,应如何解决?

A3.

使用粘稠的唾液可能会无法得到预期的检测值。这时,可先将采集的唾液进行冻融,去除粘蛋白等不溶物,然后使用离心分离(例如:1500×g,15 min)后的上清液作为样品进行检测。


Q4. 

检测小鼠脑匀浆时推荐使用何种提取Buffer?

A4. 

请使用添加了Protease Inhibitor的RIPA Buffer。为了避免Buffer中表面活性剂成分的影响,请使用试剂盒随附的Buffer稀释2倍以上后使用。


Q5. 

请问各样品的推荐稀释倍率是多少?

A5. 

稀释倍率的标准如下所示。实验前,请在标准曲线范围内选择合适的稀释倍率。

样品

稀释倍率

  小鼠血清和血浆 

4倍

  小鼠脑匀浆
  (提取缓冲液: RIPA Buffer+Protease Inhibitor)

2~320倍

  大鼠血清

50倍(标准)

  大鼠血浆

30倍(标准)

  人血清

10~800倍(标准)

  人血浆

10~80倍(标准)

  人唾液

2~8倍

◆关于本试剂盒

Q1.

使用本产品进行检测时需要哪些器具和设备?

A1.

● 纯净水(蒸馏水)

● 标准溶液/样品稀释用试管

● 清洗液稀释用玻璃器皿(量筒、烧杯)

● 可更换吸头的移液器(可准确吸取10 µL和200-500 µL的一次性吸头)

● 多道移液器(可连续分液100 µL)

● 纸巾等吸水性材料(擦拭清洗后微孔板上残留的液体)

● 混合振荡器(Vortex型)

● 微孔板振荡器(约600~800 rpm)

● 96孔板用洗板机(建议使用)或洗瓶

● 96孔板用读取器(发光检测用)

● 数据处理软件

Q2. 

试剂盒中的抗体可单独购买吗?

A2.

不可以。

Q3. 

试剂盒可以拆分使用吗?

A3. 

可以。试剂盒使用了8联排可拆卸酶标板,并配有足够标准品。但拆分使用时,每次都需要绘制标准曲线,因此可检测的样品数量会减少。

单次使用 → 40个样品(80孔)*标准品占用16孔

分两次使用 → 32 个样品(64 孔) *标准品占用32孔


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