金畔生物试剂,Hyperactive pAG-Tn5 Transposon for CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposon for CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposon for CUT&Tag

CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposon for CUT&Tag

抗体兼容性强:Protein AG可兼容多种来源抗体

细胞起始量低:可兼容低至单细胞

纯度高:蛋白纯度高,核酸残留低

Hyperactive pAG-Tn5 Transposon for CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposon是已与接头包埋的转座子,专门适用于蛋白质-DNA互作研究的CUT&Tag (Cleavage Under Target&Tagmentation)技术。CUT&Tag技术是一种研究蛋白质-DNA相互作用的新技术,将定向进化的转座酶与Protein AG相融合,在抗体引导下靶向目的蛋白,并在目的位点附近进行DNA的片段化。与传统的蛋白质-DNA互作研究方法ChIP-Seq相比,CUT&Tag具有显著优势,该技术实验周期短,信噪比高,可重复性好,且细胞投入量低,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。

Hyperactive pAG-Tn5 Transposon for CUT&Tag

片段化活性检测

使用S614针对不同DNA投入量(50 ng和100 ng)进行片段化活性检测,如图所示,1 μl转座子即可快速(10 min)实现DNA片段化。

Hyperactive pAG-Tn5 Transposon for CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposon for CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposon for CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposon for CUT&Tag

-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。

金畔生物试剂,Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag

CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag

抗体兼容性强:Protein AG可兼容多种来源抗体

细胞起始量低:可兼容低细胞投入量,低至单细胞

纯度高:蛋白纯度高,核酸残留低

Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag是将融合蛋白Protein AG与经过工程学改造的高活性Tn5转座酶进行融合,形成同时具备转座活性与融合蛋白Protein AG活性的新型融合酶,专门适用于蛋白质-DNA互作研究的CUT&Tag (Cleavage Under Target&Tagmentation)技术。CUT&Tag技术是一种研究蛋白质-DNA相互作用的新技术,将定向进化的转座酶与Protein AG相融合,在抗体引导下靶向目的蛋白,并在目的位点附近进行DNA的片段化。与传统的蛋白质-DNA互作研究方法ChIP-Seq相比,CUT&Tag具有显著优势,该技术实验周期短,信噪比高,可重复性好,且细胞投入量低,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。

Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag

片段化活性检测

使用S604两种包埋体系(2 μg和10 μg体系)生成的转座子针对不同DNA投入量(50 ng和100 ng)进行片段化活性检测,如图所示,1 μl转座子即可快速(10 min)实现DNA片段化。

Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag

Hyperactive pAG-Tn5 Transposase for CUT&Tag整个试剂盒于-85 ~ -65℃保存,干冰运输;

收到货后Hyperactive pAG-Tn5 Transposase于-85 ~ -65℃保存,其余组分可于-30 ~ -15℃保存;

生成的转座子于-30 ~ -15℃保存,有效期一年。

 

金畔生物试剂,Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

快速高效靶向切割目的片段,文库构建优质且真实。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

操作体验好:实验流程简单,包含DNA提取模块,告别酚氯仿抽提。

产品性能好:转录因子、辅因子成功率高,产出更稳定,结果更真实。

结果更准确:含有Spike in DNA组分,校正组间差异。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina是针对Illumina高通量测序平台定向开发的用于研究蛋白质-DNA相互作用的试剂盒。CUT&RUN(Cleavage Under Target and Release Using Nuclease)技术是一种研究蛋白质-DNA相互作用的新方法,使用Protein G融合的MNase核酸酶,在抗体引导下精准靶向目的蛋白,并在目的位点附近进行DNA的片段化切割。本试剂盒优化了实验反应体系和建库流程,与传统的ChIP-Seq相比,具有实验成功率高、抗体兼容性强、实验周期短、操作简单等优势,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。试剂盒中所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,较大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

1. 优质的文库产出

以100,000个K562细胞为样本,参照HD102实验流程对不同丰度靶蛋白进行CUT&RUN实验和文库构建。在不同组蛋白和转录因子体系中,HD102文库产出稳定,文库峰型呈现典型的Ladder状分布,HD102精准靶向和高效切割的特性保证了优质的文库产出。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

图1 HD102文库产出

 

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

图2 HD102文库峰型

 

2. 高质量的下机数据

以100,000个K562细胞为样本,参照HD102实验流程对不同丰度靶蛋白进行CUT&RUN实验和文库构建。通过HD102获得的下机数据TSS富集以及IGV视图信噪比高,对目的基因位点有明显富集。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

图3 HD102 TSS富集图

 

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

图4 HD102 Chr1 IGV全局视图

 

3. Spike in DNA校正组间差异

以5,000、10,000、100,000个293细胞为样本,参照HD102实验流程对组蛋白H3K4me3进行CUT&RUN实验和文库构建,并按照说明书推荐的Spike in DNA投入量进行校正。使用HD102建库获得的热图和Plotfile在校准前由于高低细胞投入量获得的数据量的差异,导致富集效果存在显著差异,通过Spike in DNA进行均一化校准之后,可以真实反应不同细胞投入量下的富集效果。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

图5 HD102 Spike in DNA校正前后TSS富集比较

 

4. 多组学比较

以100,000个293细胞为样本进行CUT&RUN、CUT&Tag、ATAC和mRNA-seq多组学比较分析。IGV视图显示HD102在关键位点上的富集情况与ATAC和CUT&Tag技术一致,且在mRNA-seq中可以找到相应基因位点,实验结果真实可靠。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for Illumina

BOX1:2 ~ 8 ℃保存,根据不同目的地调整运输方式;

BOX2:15 ~ 25 ℃保存,常温运输;

BOX3:-30 ~ -15 ℃保存,≤0℃运输。

金畔生物试剂,Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR

快速高效靶向切割目的片段,无需建库即可实现基因定量。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR

操作体验好:实验流程简单,包含DNA提取模块,告别酚氯仿抽提。

产品性能好:转录因子、辅因子成功率高,产出更稳定,结果更真实。

结果更准确:含有Spike in DNA组分,校正组间差异。

区分下游实验:无需建库,可直接进行qPCR,满足不同实验需求。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR是用于研究蛋白质-DNA相互作用的试剂盒。CUT&RUN(Cleavage Under Target and Release Using Nuclease)技术是一种研究蛋白质-DNA相互作用的新方法,使用Protein G融合的MNase核酸酶,在抗体引导下精准靶向目的蛋白,并在目的位点附近进行DNA的片段化切割。本试剂盒优化了实验反应体系和操作流程,与传统的ChIP-qPCR相比,具有检测成功率高、抗体兼容性强、实验周期短、操作简单等优势,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。试剂盒中所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,较大程度上保证了实验结果的稳定性和重复性。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR

1. 目的蛋白兼容性

以10,000和100,000个239细胞为样本,在不同靶蛋白体系中,针对不同的目的基因富集片段设计qPCR引物,均可以成功进行qPCR扩增。结果表明HD101可兼容不同类型、不同丰度的靶蛋白,目的基因片段富集效果好。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR

图1  293细胞中H3K4me3、H3K27me3、CTCF、Ezh2互作DNA的富集程度

 

2. 细胞类型兼容性测试

在293、Hela、K562三种不同细胞类型中,针对组蛋白H3K4me3和转录因子CTCF设计目的基因qPCR引物,可以成功富集目的片段,并进行qPCR扩增,结果表明HD101在不同的细胞类型中发挥稳定。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR

图2 不同类型细胞中H3K4me3、CTCF互作DNA的富集程度

 

3. 细胞投入量兼容性测试

投入5,000、10,000、100,000、500,000个293细胞,针对组蛋白H3K4me3和转录因子CTCF设计目的基因qPCR引物,可以成功富集目的片段,并进行qPCR扩增,结果表明HD101在不同的细胞投入量下发挥稳定。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR

图3 不同细胞投入量下H3K4me3、CTCF互作DNA的富集程度

 

4. Spike in DNA校准测试

通过梯度投入Spike in DNA(1 pg / 10,000 cells)对不同细胞投入量测得的CT值进行均一化校正,校正后的CT值差值小于1,目的基因富集程度趋于一致。因此,HD101提供的Spike in DNA可实现样本间的均一化校准。

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR

图4 Spike in DNA校正前后CT值的比较

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR

Hyperactive pG-MNase CUT&RUN Assay Kit for PCR/qPCR

BOX1:2 ~ 8 ℃保存,根据不同目的地调整运输方式;

BOX2:15 ~ 25 ℃保存,常温运输;

BOX3:-30 ~ -15 ℃保存,≤0℃运输。

金畔生物试剂,Hyperactive DNA Spike-in Control for CUT&Tag

Hyperactive DNA Spike-in Control for CUT&Tag

兼容性好

校正效率高

Hyperactive DNA Spike-in Control for CUT&Tag

Hyperactive DNA Spike-in Control for CUT&Tag是适用于CUT&Tag文库数据校正的参照标准DNA片段,主要用于不同样本间测序数据相互标准化,以达到不同样本间可相互比较的目的,可减少从样本制备到数据分析的操作流程中产生的误差。

Hyperactive DNA Spike-in Control for CUT&Tag

Hyperactive DNA Spike-in Control for CUT&Tag

Hyperactive DNA Spike-in Control for CUT&Tag

-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。