转染试剂,Lonza试剂代理,Lonza试剂列表

产品货号 产品名称 产品规格
V4XP-2012 P2 原代细胞4D核转染系统X单元试剂盒 12次
V4XP-3012 P3 原代细胞4D核转染系统X单元试剂盒 12次
V4XP-3024 P 3原代细胞4D核转染系统X单元试剂盒 24次
V4XP-3032 P3 原代细胞4D核转染系统X单元试剂盒 32次
VACA-1003 细胞系核转染试剂盒V 10反应
VAPA-1005 人类NK细胞核转染试剂盒 10反应
VAPI-1002 原代哺乳动物成纤维细胞基础转染试剂盒 10反应
VCA-1001 细胞系核转染试剂盒R 25反应
VCA-1002 VCA-1002 细胞系核转染试剂盒T 25反应
VCA-1003 细胞系核转染试剂盒V 25反应

转染试剂

2020.12.21

全自动样品快速研磨仪搭配植物RNA快速提取试剂盒提取鸡肉组织总RNA

提取的鸡肉组织RNA点样量为1ul,鸡肉组织RNA两个条带亮度相当,提示出现降解。此次实验目的:快速提取动物组织中的总RNA(18S,28S;离心吸附柱不吸附5S)

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CPFect小分子RNA转染试剂盒 CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit


描述

CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit

CPFect小分子RNA转染试剂盒

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

   CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit

      CPFect小分子RNA转染试剂盒

    MX2216-0.5KIT  

0.5kit

1580

MX2216-1KIT

1kit

2950

产品描述

CPFect小分子RNA转染试剂盒(CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit)是一款专门开发用于小分子RNA(比如siRNA、miRNA)的转染试剂盒,含有转染所需的转染试剂,以及转染缓冲液。本品具极好的生物相容性、转染效率高、细胞毒性小。转染时无需进行培养基更换操作,特别适合各种高通量细胞筛选实验、方便、快速、高效。

试剂盒组分

组分编号

组分名称

货号(规格

MX2216-0.5KIT

MX2216-1KIT

MX2216-A

CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent

0.5ml

2×0.5ml

MX2216-B 10× CPFect Transfection Buffer 0.5ml

2×0.5ml

保存与运输方法

保存:+4℃保存,1年有效。

运输:室温运输。

注意事项

1)使用高纯的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率,内毒素是影响转染效率高低的重要因素。

2)转染过程中不要添加抗生素到培养基,否则会导致细胞死亡。

3)CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent(MX2216-A)应该在4℃保存,不可冻存。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

一、准备工作

1.1 从冰箱内取出 CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent(MX2216-A)后,在漩涡振荡器中充分振荡后,室温放置,使之恢复到室温后使用。

1.2 从冰箱内取出10× CPFect Transfection Buffer(MX2216-B)后,取适量按照1:9的比例用PBS稀释到1×,混匀后待用。

二、转染方法(以24孔板内转染siRNA为例)

2.1 接种细胞

a. 贴壁细胞(以HeLa细胞为例):转染前一天,接种1×105~5×105个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中,使转染时的细胞密度能够达到30~50%。

b. 悬浮细胞(以THP-1细胞为例):接种1×105~5×105个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中。

【注意】:

1)不同细胞生长速度不同,接种细胞的数量,细胞密度需要依据细胞类型、培养时间、实验目的而定;

2)每孔接种的细胞数量尽量相同,使细胞均匀分布。

3)由于自身特性问题,悬浮细胞相对较难转染,需要优化条件以提高转染效率,如遇细胞特殊,可更换为电转方式。

 

2.2 转染步骤

对于每个转染样品,请按以下步骤准备:

a. 稀释 siRNA:用 30μl 1×CPFect Transfection Buffer(v2)稀释 1.25μl 20μM siRNA 储存液(v3),轻轻混匀,室温孵育 5min。

b. 混合液制备:加入 3μl CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent(v4),轻轻吹打混匀,室温孵育 0~15min,制备成转染复合物。

【注意】:

1)请不要振荡,溶液可能会有浑浊,但不会影响转染;

2)混合液可室温放置一段时间,但不宜超过 24h。

c. 将 CPFect转染复合物加入到适量无双抗完全培养基(v1)中,轻轻混匀。

【注意】:CPFect转染复合物加入原细胞培养基中一般无需移除或更换。但也可依具体实验情况进行优化。 d. (可选)进行其他必要的特殊处理(如加药处理) ;

e. 将培养板置于 37℃、CO2培养箱中培养24~96h(培养时间与实验目的相关)。

 

2.3 效果检测

转染完成后 24~72小时均可进行siRNA沉默效果检测,最佳检测时间与细胞类型,转染试剂,检测目的等相关。

1)RNA水平的检测(RNAi沉默鉴定标准):siRNA作用的目标分子是目的基因的RNA,在RISC系统的作用下剪切目标RNA,故检测目的基因的RNA水平可直接反应siRNA是否发挥相应作用,且通过qRT-PCR可计算具体的抑制效率。一般siRNA转染后 24~72h即可检测到目的基因RNA表达明显降低。

【注意】:引物设计质量很重要,需要确保检测引物有效性。

2)蛋白水平的检测:对于蛋白编码基因,还需检测相应的蛋白表达水平,以确定是否目的蛋白也成功下调。由于蛋白表达水平的变化受多个因素影响,有时候会出现RNA水平成功抑制了而蛋白水平变化不明显的情况。若蛋白表达水平下降不明显,需认真检测其mRNA的表达水平,用来判断RNAi不理想的原因。

3)功能筛选:应用 BrdU或EdU细胞增殖,细胞凋亡等方法进行siRNA对细胞功能的直接筛选。

 

转染体系的调整参考用表

表I. 不同细胞培养容器转染时培养基、核酸及转染试剂用量

  siRNA终浓度 单孔体积 培养基(v1) Buffer(v2) siRNA(v3 Reagent (v 4)
96-well 100nM 100μl 92.90μl 6μl 0.5μl 0.6μl
50nM 100μl 93.15μl 6μl 0.25μl 0.6μl
30nM 100μl 93.25μl 6μl 0.15μl 0.6μl
20nM 100μl 93.30μl 6μl 0.1μl 0.6μl
10nM 100μl 93.35μl 6μl 0.05μl 0.6μl
24-well 100nM 500μl 464.50μl 30μl 2.5μl 3μl
50nM * 500μl 465.75μl 30μl 1.25μl 3μl
30nM 500μl 466.25μl 30μl 0.75μl 3μl
20nM 500μl 466.50μl 30μl 0.5μl 3μl
10nM 500μl 466.75μl 30μl 0.25μl 3μl
12-well 100nM 1ml 929.00μl 60μl 5μl 6μl
50nM 1ml 931.50μl 60μl 2.5μl 6μl
30nM 1ml 932.50μl 60μl 1.5μl 6μl
20nM 1ml 933.00μl 60μl 1μl 6μl
10nM 1ml 933.50μl 60μl 0.5μl 6μl
6-well 100nM 2ml 1858.00μl 120μl 10μl 12μl
50nM 2ml 1863.00μl 120μl 5μl 12μl
30nM 2ml 1865.00μl 120μl 3μl 12μl
20nM 2ml 1866.00μl 120μl 2μl 12μl
10nM 2ml 1867.00μl 120μl 1μl 12μl
【*】:实际参考用量示例,对于部分细胞类型需进一步优化。

 

 

CPFect小分子RNA转染试剂盒 CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit


描述

CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit

CPFect小分子RNA转染试剂盒

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

   CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit

      CPFect小分子RNA转染试剂盒

    MX2216-0.5KIT  

0.5kit

1580

MX2216-1KIT

1kit

2950

产品描述

CPFect小分子RNA转染试剂盒(CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit)是一款专门开发用于小分子RNA(比如siRNA、miRNA)的转染试剂盒,含有转染所需的转染试剂,以及转染缓冲液。本品具极好的生物相容性、转染效率高、细胞毒性小。转染时无需进行培养基更换操作,特别适合各种高通量细胞筛选实验、方便、快速、高效。

试剂盒组分

组分编号

组分名称

货号(规格

MX2216-0.5KIT

MX2216-1KIT

MX2216-A

CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent

0.5ml

2×0.5ml

MX2216-B 10× CPFect Transfection Buffer 0.5ml

2×0.5ml

保存与运输方法

保存:+4℃保存,1年有效。

运输:室温运输。

注意事项

1)使用高纯的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率,内毒素是影响转染效率高低的重要因素。

2)转染过程中不要添加抗生素到培养基,否则会导致细胞死亡。

3)CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent(MX2216-A)应该在4℃保存,不可冻存。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

一、准备工作

1.1 从冰箱内取出 CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent(MX2216-A)后,在漩涡振荡器中充分振荡后,室温放置,使之恢复到室温后使用。

1.2 从冰箱内取出10× CPFect Transfection Buffer(MX2216-B)后,取适量按照1:9的比例用PBS稀释到1×,混匀后待用。

二、转染方法(以24孔板内转染siRNA为例)

2.1 接种细胞

a. 贴壁细胞(以HeLa细胞为例):转染前一天,接种1×105~5×105个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中,使转染时的细胞密度能够达到30~50%。

b. 悬浮细胞(以THP-1细胞为例):接种1×105~5×105个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中。

【注意】:

1)不同细胞生长速度不同,接种细胞的数量,细胞密度需要依据细胞类型、培养时间、实验目的而定;

2)每孔接种的细胞数量尽量相同,使细胞均匀分布。

3)由于自身特性问题,悬浮细胞相对较难转染,需要优化条件以提高转染效率,如遇细胞特殊,可更换为电转方式。

 

2.2 转染步骤

对于每个转染样品,请按以下步骤准备:

a. 稀释 siRNA:用 30μl 1×CPFect Transfection Buffer(v2)稀释 1.25μl 20μM siRNA 储存液(v3),轻轻混匀,室温孵育 5min。

b. 混合液制备:加入 3μl CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent(v4),轻轻吹打混匀,室温孵育 0~15min,制备成转染复合物。

【注意】:

1)请不要振荡,溶液可能会有浑浊,但不会影响转染;

2)混合液可室温放置一段时间,但不宜超过 24h。

c. 将 CPFect转染复合物加入到适量无双抗完全培养基(v1)中,轻轻混匀。

【注意】:CPFect转染复合物加入原细胞培养基中一般无需移除或更换。但也可依具体实验情况进行优化。 d. (可选)进行其他必要的特殊处理(如加药处理) ;

e. 将培养板置于 37℃、CO2培养箱中培养24~96h(培养时间与实验目的相关)。

 

2.3 效果检测

转染完成后 24~72小时均可进行siRNA沉默效果检测,最佳检测时间与细胞类型,转染试剂,检测目的等相关。

1)RNA水平的检测(RNAi沉默鉴定标准):siRNA作用的目标分子是目的基因的RNA,在RISC系统的作用下剪切目标RNA,故检测目的基因的RNA水平可直接反应siRNA是否发挥相应作用,且通过qRT-PCR可计算具体的抑制效率。一般siRNA转染后 24~72h即可检测到目的基因RNA表达明显降低。

【注意】:引物设计质量很重要,需要确保检测引物有效性。

2)蛋白水平的检测:对于蛋白编码基因,还需检测相应的蛋白表达水平,以确定是否目的蛋白也成功下调。由于蛋白表达水平的变化受多个因素影响,有时候会出现RNA水平成功抑制了而蛋白水平变化不明显的情况。若蛋白表达水平下降不明显,需认真检测其mRNA的表达水平,用来判断RNAi不理想的原因。

3)功能筛选:应用 BrdU或EdU细胞增殖,细胞凋亡等方法进行siRNA对细胞功能的直接筛选。

 

转染体系的调整参考用表

表I. 不同细胞培养容器转染时培养基、核酸及转染试剂用量

  siRNA终浓度 单孔体积 培养基(v1) Buffer(v2) siRNA(v3 Reagent (v 4)
96-well 100nM 100μl 92.90μl 6μl 0.5μl 0.6μl
50nM 100μl 93.15μl 6μl 0.25μl 0.6μl
30nM 100μl 93.25μl 6μl 0.15μl 0.6μl
20nM 100μl 93.30μl 6μl 0.1μl 0.6μl
10nM 100μl 93.35μl 6μl 0.05μl 0.6μl
24-well 100nM 500μl 464.50μl 30μl 2.5μl 3μl
50nM * 500μl 465.75μl 30μl 1.25μl 3μl
30nM 500μl 466.25μl 30μl 0.75μl 3μl
20nM 500μl 466.50μl 30μl 0.5μl 3μl
10nM 500μl 466.75μl 30μl 0.25μl 3μl
12-well 100nM 1ml 929.00μl 60μl 5μl 6μl
50nM 1ml 931.50μl 60μl 2.5μl 6μl
30nM 1ml 932.50μl 60μl 1.5μl 6μl
20nM 1ml 933.00μl 60μl 1μl 6μl
10nM 1ml 933.50μl 60μl 0.5μl 6μl
6-well 100nM 2ml 1858.00μl 120μl 10μl 12μl
50nM 2ml 1863.00μl 120μl 5μl 12μl
30nM 2ml 1865.00μl 120μl 3μl 12μl
20nM 2ml 1866.00μl 120μl 2μl 12μl
10nM 2ml 1867.00μl 120μl 1μl 12μl
【*】:实际参考用量示例,对于部分细胞类型需进一步优化。

 

 

PEI 25K Transfection Reagent 线性化聚乙烯亚胺转染试剂


描述

PEI 25K Transfection Reagent

线性化聚乙烯亚胺转染试剂

搜索关键词:

PEI25K;PEI 25000;PEI 40K;线性化聚乙烯亚胺PEI;PEI转染试剂;PEI 25000;CAS:9002-98-6, 26913-06-4;Polysciences;

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

MX2204-1ML

1ml

280

PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

MX2204-10ML

10ml

880

PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

MX2204-50ML

50ml

1680

【温馨提示】:见我司整理的线性化聚乙烯亚胺PEI 25000/ PEI40000转染试剂专题。

产品描述

线性化聚乙烯亚胺PEI 25,000,一种高电荷阳离子聚合物,非常容易结合于高电荷阴离子基质。工业应用上,线性化PEI可改善负电荷染料的物理外观,以调整染料的化学特性和增强染料与固相基质的黏附能力,常用作黏附增强剂,作用同多聚赖氨酸(poly-lysine);科研应用上,线性化PEI能与DNA或其他负电荷生物大分子简单结合,正是这一特性,使得成为一种非常行之有效的载体运输介质(Vector carrier),即转染试剂。

线性化聚乙烯亚胺PEI 25000(Polyethylenimine Linear, MW 25000)是一款优秀、低成本、值得信赖的瞬时性转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中,PEI在宽广的生产规模内(从96孔板到100L生物反应器)能提供连续性的高基因表达。

本品是PEI25K的无菌溶液,浓度为1mg/ml,直接使用即可。按照DNA:PEI25K=1:3的比例来操作,1ml本品足以用来转染330μg DNA,或者,6孔板内约做80-160次转染。

保存与运输方法

保存:-20℃保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)收到本品或第一次使用,请根据单次用量分装后置于-20℃冻存,尽量降低反复冻融次数。

2)本品为无菌溶液,请操作过程中执行无菌操作。

3)请务必使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度,260nm / 280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

4)使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。

5)对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。

6)对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。

7)推荐用商业化的无血清培养基比如Opti-MEM I来稀释DNA和PEI25K,制备转染复合物。

8)转染过程请不要使用抗生素。

9)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

一、操作方法(贴壁细胞)

1.1铺板

a)转染前18-24h进行铺板,调整合适的细胞密度(参考表1),使其在转染时细胞密度达60-80%。

【注意】:高血清水平会抑制转染效率,大多数情况,低血清水平(≤5%)能产生最高的转染效率。

1.2转染步骤(以6孔板的单孔为例)

a)转染前1-2h,每孔替换为3ml含2%血清的新鲜生长培养基。

b)制备PEI25K-DNA转染复合物(严格按照以下步骤进行):①往300μl无血清培养基(比如:Opti-MEM I)加入2μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入6μl PEI25K(1mg/ml)(DNA/PEI25K=1:3),低速涡旋5s;③无菌环境,室温静置30min以形成PEI25K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次,轻轻混匀。

c)将PEI25K-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋,使得复合物分散均匀。

【注意】:以上步骤可通过调整PEI25K-DNA复合物在无血清培养基内的体积(为培养总体积的10%)来进行放大或缩小(可参考表2)。

1.3 孵育

a)37℃,5% CO2培养箱内培养细胞,转染后12-18h,去除含PEI25K-DNA复合物的培养液,更换新鲜的生长培养基。

b)通常,转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。

 

PEI25K客户使用案例(逐步增加中)

 

图片描述:以人结肠癌细胞(HCT116)为对象,按照质粒DNA:PEI 2,5000(MX2202-250MG)=1:4的比例制备转染混合物并转染进入HCT116细胞,36h后于荧光显微镜下观察转染效率(GFP,绿色荧光蛋白)。

【数据来源:厦门大学 于老师】

相关产品

货号

名称

规格

MX2202-250MG

Polyethylenimine Linear, MW 25000线性化聚乙烯亚胺PEI 25000

250mg

MX2203-250MG

Polyethylenimine Linear, MW 40000 (PEI 40K)线性化聚乙烯亚胺PEI 40000

250mg

MX2204-1ML

PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

1ml

MX2205-1ML

PEI 40K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

1ml

MX2211-0.15ML

Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂质体转染试剂

0.15ml

MX2216-0.5KIT

CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小分子RNA转染试剂盒

0.5kit

 

 

  

PEI 25K Transfection Reagent 线性化聚乙烯亚胺转染试剂


描述

PEI 25K Transfection Reagent

线性化聚乙烯亚胺转染试剂

搜索关键词:

PEI25K;PEI 25000;PEI 40K;线性化聚乙烯亚胺PEI;PEI转染试剂;PEI 25000;CAS:9002-98-6, 26913-06-4;Polysciences;

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

MX2204-1ML

1ml

280

PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

MX2204-10ML

10ml

880

PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

MX2204-50ML

50ml

1680

【温馨提示】:见我司整理的线性化聚乙烯亚胺PEI 25000/ PEI40000转染试剂专题。

产品描述

线性化聚乙烯亚胺PEI 25,000,一种高电荷阳离子聚合物,非常容易结合于高电荷阴离子基质。工业应用上,线性化PEI可改善负电荷染料的物理外观,以调整染料的化学特性和增强染料与固相基质的黏附能力,常用作黏附增强剂,作用同多聚赖氨酸(poly-lysine);科研应用上,线性化PEI能与DNA或其他负电荷生物大分子简单结合,正是这一特性,使得成为一种非常行之有效的载体运输介质(Vector carrier),即转染试剂。

线性化聚乙烯亚胺PEI 25000(Polyethylenimine Linear, MW 25000)是一款优秀、低成本、值得信赖的瞬时性转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中,PEI在宽广的生产规模内(从96孔板到100L生物反应器)能提供连续性的高基因表达。

本品是PEI25K的无菌溶液,浓度为1mg/ml,直接使用即可。按照DNA:PEI25K=1:3的比例来操作,1ml本品足以用来转染330μg DNA,或者,6孔板内约做80-160次转染。

保存与运输方法

保存:-20℃保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)收到本品或第一次使用,请根据单次用量分装后置于-20℃冻存,尽量降低反复冻融次数。

2)本品为无菌溶液,请操作过程中执行无菌操作。

3)请务必使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度,260nm / 280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

4)使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。

5)对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。

6)对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。

7)推荐用商业化的无血清培养基比如Opti-MEM I来稀释DNA和PEI25K,制备转染复合物。

8)转染过程请不要使用抗生素。

9)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

一、操作方法(贴壁细胞)

1.1铺板

a)转染前18-24h进行铺板,调整合适的细胞密度(参考表1),使其在转染时细胞密度达60-80%。

【注意】:高血清水平会抑制转染效率,大多数情况,低血清水平(≤5%)能产生最高的转染效率。

1.2转染步骤(以6孔板的单孔为例)

a)转染前1-2h,每孔替换为3ml含2%血清的新鲜生长培养基。

b)制备PEI25K-DNA转染复合物(严格按照以下步骤进行):①往300μl无血清培养基(比如:Opti-MEM I)加入2μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入6μl PEI25K(1mg/ml)(DNA/PEI25K=1:3),低速涡旋5s;③无菌环境,室温静置30min以形成PEI25K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次,轻轻混匀。

c)将PEI25K-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋,使得复合物分散均匀。

【注意】:以上步骤可通过调整PEI25K-DNA复合物在无血清培养基内的体积(为培养总体积的10%)来进行放大或缩小(可参考表2)。

1.3 孵育

a)37℃,5% CO2培养箱内培养细胞,转染后12-18h,去除含PEI25K-DNA复合物的培养液,更换新鲜的生长培养基。

b)通常,转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。

 

PEI25K客户使用案例(逐步增加中)

 

图片描述:以人结肠癌细胞(HCT116)为对象,按照质粒DNA:PEI 2,5000(MX2202-250MG)=1:4的比例制备转染混合物并转染进入HCT116细胞,36h后于荧光显微镜下观察转染效率(GFP,绿色荧光蛋白)。

【数据来源:厦门大学 于老师】

相关产品

货号

名称

规格

MX2202-250MG

Polyethylenimine Linear, MW 25000线性化聚乙烯亚胺PEI 25000

250mg

MX2203-250MG

Polyethylenimine Linear, MW 40000 (PEI 40K)线性化聚乙烯亚胺PEI 40000

250mg

MX2204-1ML

PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

1ml

MX2205-1ML

PEI 40K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

1ml

MX2211-0.15ML

Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂质体转染试剂

0.15ml

MX2216-0.5KIT

CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小分子RNA转染试剂盒

0.5kit

 

 

  

PEI 25K Transfection Reagent 线性化聚乙烯亚胺转染试剂


描述

PEI 25K Transfection Reagent

线性化聚乙烯亚胺转染试剂

搜索关键词:

PEI25K;PEI 25000;PEI 40K;线性化聚乙烯亚胺PEI;PEI转染试剂;PEI 25000;CAS:9002-98-6, 26913-06-4;Polysciences;

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

MX2204-1ML

1ml

280

PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

MX2204-10ML

10ml

880

PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

MX2204-50ML

50ml

1680

【温馨提示】:见我司整理的线性化聚乙烯亚胺PEI 25000/ PEI40000转染试剂专题。

产品描述

线性化聚乙烯亚胺PEI 25,000,一种高电荷阳离子聚合物,非常容易结合于高电荷阴离子基质。工业应用上,线性化PEI可改善负电荷染料的物理外观,以调整染料的化学特性和增强染料与固相基质的黏附能力,常用作黏附增强剂,作用同多聚赖氨酸(poly-lysine);科研应用上,线性化PEI能与DNA或其他负电荷生物大分子简单结合,正是这一特性,使得成为一种非常行之有效的载体运输介质(Vector carrier),即转染试剂。

线性化聚乙烯亚胺PEI 25000(Polyethylenimine Linear, MW 25000)是一款优秀、低成本、值得信赖的瞬时性转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中,PEI在宽广的生产规模内(从96孔板到100L生物反应器)能提供连续性的高基因表达。

本品是PEI25K的无菌溶液,浓度为1mg/ml,直接使用即可。按照DNA:PEI25K=1:3的比例来操作,1ml本品足以用来转染330μg DNA,或者,6孔板内约做80-160次转染。

保存与运输方法

保存:-20℃保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)收到本品或第一次使用,请根据单次用量分装后置于-20℃冻存,尽量降低反复冻融次数。

2)本品为无菌溶液,请操作过程中执行无菌操作。

3)请务必使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度,260nm / 280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

4)使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。

5)对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。

6)对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。

7)推荐用商业化的无血清培养基比如Opti-MEM I来稀释DNA和PEI25K,制备转染复合物。

8)转染过程请不要使用抗生素。

9)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

一、操作方法(贴壁细胞)

1.1铺板

a)转染前18-24h进行铺板,调整合适的细胞密度(参考表1),使其在转染时细胞密度达60-80%。

【注意】:高血清水平会抑制转染效率,大多数情况,低血清水平(≤5%)能产生最高的转染效率。

1.2转染步骤(以6孔板的单孔为例)

a)转染前1-2h,每孔替换为3ml含2%血清的新鲜生长培养基。

b)制备PEI25K-DNA转染复合物(严格按照以下步骤进行):①往300μl无血清培养基(比如:Opti-MEM I)加入2μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入6μl PEI25K(1mg/ml)(DNA/PEI25K=1:3),低速涡旋5s;③无菌环境,室温静置30min以形成PEI25K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次,轻轻混匀。

c)将PEI25K-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋,使得复合物分散均匀。

【注意】:以上步骤可通过调整PEI25K-DNA复合物在无血清培养基内的体积(为培养总体积的10%)来进行放大或缩小(可参考表2)。

1.3 孵育

a)37℃,5% CO2培养箱内培养细胞,转染后12-18h,去除含PEI25K-DNA复合物的培养液,更换新鲜的生长培养基。

b)通常,转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。

 

PEI25K客户使用案例(逐步增加中)

 

图片描述:以人结肠癌细胞(HCT116)为对象,按照质粒DNA:PEI 2,5000(MX2202-250MG)=1:4的比例制备转染混合物并转染进入HCT116细胞,36h后于荧光显微镜下观察转染效率(GFP,绿色荧光蛋白)。

【数据来源:厦门大学 于老师】

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货号

名称

规格

MX2202-250MG

Polyethylenimine Linear, MW 25000线性化聚乙烯亚胺PEI 25000

250mg

MX2203-250MG

Polyethylenimine Linear, MW 40000 (PEI 40K)线性化聚乙烯亚胺PEI 40000

250mg

MX2204-1ML

PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

1ml

MX2205-1ML

PEI 40K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂

1ml

MX2211-0.15ML

Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂质体转染试剂

0.15ml

MX2216-0.5KIT

CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小分子RNA转染试剂盒

0.5kit

 

 

  

PEI 40K Transfection Reagent 线性化聚乙烯亚胺转染试剂


描述

PEI 40K Transfection Reagent

线性化聚乙烯亚胺转染试剂

产品标签

PEI 40K转染试剂,PEI 25K转染试剂;线性化聚乙烯亚胺;PEI 40000;PEI25000;Lipofectamine 2000;Lipofectamine 3000;

产品信息

  产品名称   产品编号   规格  价格(元)
  PEI 40K Transfection Reagent    

  线性化聚乙烯亚胺转染试剂

  MX2205-1ML   1ml 280
  MX2205-10ML   10ml 880
  MX2205-50ML   50ml    1680

产品描述

线性化聚乙烯亚胺PEI 40000(Polyethylenimine Linear, MW 40000; PEI 40K)是一款优秀和低成本的瞬时性转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中,PEI在宽广的生产规模内(从96孔板到100L生物反应器)能提供连续性的高基因表达。

作为线性化聚乙烯亚胺PEI25000(PEI 25K)的升级产品,操作更简单,且具有连续性的更高表达滴度,优势在于:1)PEI 25K转染溶液通常需几个小时来配置,然而,PEI 40K在2个小时内即可转化为即用型的溶液;2)PEI 25K含4-11%残留的丙酰基基团,该基团阻止聚合物骨架紧密结合到DNA。然而,PEI 40K完全去丙酰化结构,意味着每个批次保持连续性更高转化效率。

本品是PEI 40K的无菌溶液,浓度为1mg/ml,直接使用即可。1ml本品足以用来转染250μg DNA,或者,6孔板内约做60-120次转染。

保存与运输方法

保存:+4℃保存,1年有效。

运输:室温运输。

注意事项

1)请务必使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度,260nm/280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

2)使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。

3)对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。

4)对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。

5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

试剂准备

稀释液准备:用细胞培养级水来制备150mM NaCl(比如:称取876.6mg高纯NaCl加入80ml细胞培养级水,充分溶解后,定容到100ml,经0.1或0.2μm滤膜过滤除菌。)

【注意】:也可使用商业化的无血清培养基(比如Opti-MEM I)来制备转染复合物。

 

一、操作方法(贴壁细胞)

1.1铺板

a)转染前18-24h进行铺板,调整合适的细胞密度(参考表1),使其在转染时细胞密度达60-80%。

【注意】:高血清水平会抑制转染效率,大多数情况,低血清水平(≤5%)能产生最高的转染效率。

表1.不同培养器皿的建议接种密度
培养器皿 培养表面积

(cm2)

接种细胞数 培养器皿 培养表面积(cm2) 接种细胞数
96孔板 0.3 (1.2-2.4) ×104 35mm培养皿 9.6 (3.5-7.0) ×105
48孔板 1.0 (4.0-8.0) ×104 60mm培养皿 21 (0.9-1.8) ×106
24孔板 1.9 (0.8-1.6) ×105 100mm培养皿 58 (2.2-4.4) ×106
12孔板 3.5 (1.5-3.0) ×105 T75培养瓶 75 (3.0-6.0) ×106
6孔板 9.6 (4.0-8.0) ×105 T175培养瓶 175 (0.7-1.4) ×107

1.2转染步骤(以6孔板的单孔为例)

a)转染前1-2h,每孔替换为3ml含2%血清的新鲜生长培养基。

b)制备PEI 40K-DNA转染复合物(严格按照顺序进行):①往300μl稀释液内加入2μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入8μl PEI 40K(1mg/ml)(DNA/PEI 40K=1:4),低速涡旋5s;③无菌环境,室温静置20min以形成PEI 40K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次,轻轻混匀。

c)将PEI 40K-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋,使得复合物分散均匀。

【注意】:以上步骤可通过调整PEI 40K-DNA复合物在稀释液内的体积(稀释液为培养总体积的10%)来进行放大或缩小(可参考表2)。确保DNA/PEI 40K=1:4!

表2. 各种培养体系内转染用各组分建议用量
培养器皿 培养体积(ml) 质粒DNA(μg) 稀释液(ml) PEI 40K(μl)
6孔板,单孔 3 2-4 0.3 8-16
35mm培养皿 3 2-4 0.3 8-16
60mm培养皿 5 6-12 0.5 24-48
100mm培养皿 10 12-24 1.0 48-96
T75培养瓶 15 18-36 1.5 72-144
250ml摇瓶 50 50-100 2.5 200-400

1.3 孵育

a)37℃,5% CO2培养箱内培养细胞,转染后12-18h,去除含PEI 40K-DNA复合物的培养液,更换新鲜的生长培养基。

b)通常,转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。

二、操作方法(悬浮细胞)

2.1接种准备

于转染前2-3h,按照1.0×106/ml培养接种细胞。

2.2 转染步骤(以:50ml培养物/250ml摇瓶为例)

a)制备PEI 40K-DNA转染复合物(严格按照顺序进行):①往2.5ml稀释液内加入50μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入200μl PEI 40K(1mg/ml)(DNA/PEI 40K=1:4),低速涡旋5s;③无菌环境,室温静置20min以形成PEI 40K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次,轻轻混匀。

b)将全部转染溶液加入25ml悬浮细胞内。

c)将悬浮细胞放回培养箱内。

2.3 孵育

a)在培养箱内摇动培养2-3h,之后加入25ml新鲜生长培养基。重新放回培养箱。

b)通常,转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。

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货号 名称 规格
MX2202-250MG Polyethylenimine Linear, MW 25000线性化聚乙烯亚胺PEI 25000 250mg
MX2203-250MG Polyethylenimine Linear, MW 40000 (PEI 40K)线性化聚乙烯亚胺PEI 40000 250mg
MX2204-1ML PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂 1ml
MX2205-1ML PEI 40K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂 1ml
MX2211-0.15ML Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂质体转染试剂 0.15ml
MX2216-0.5KIT CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小分子RNA转染试剂盒 0.5kit

 

 

 

PEI 40K Transfection Reagent 线性化聚乙烯亚胺转染试剂


描述

PEI 40K Transfection Reagent

线性化聚乙烯亚胺转染试剂

产品标签

PEI 40K转染试剂,PEI 25K转染试剂;线性化聚乙烯亚胺;PEI 40000;PEI25000;Lipofectamine 2000;Lipofectamine 3000;

产品信息

  产品名称   产品编号   规格  价格(元)
  PEI 40K Transfection Reagent    

  线性化聚乙烯亚胺转染试剂

  MX2205-1ML   1ml 280
  MX2205-10ML   10ml 880
  MX2205-50ML   50ml    1680

产品描述

线性化聚乙烯亚胺PEI 40000(Polyethylenimine Linear, MW 40000; PEI 40K)是一款优秀和低成本的瞬时性转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中,PEI在宽广的生产规模内(从96孔板到100L生物反应器)能提供连续性的高基因表达。

作为线性化聚乙烯亚胺PEI25000(PEI 25K)的升级产品,操作更简单,且具有连续性的更高表达滴度,优势在于:1)PEI 25K转染溶液通常需几个小时来配置,然而,PEI 40K在2个小时内即可转化为即用型的溶液;2)PEI 25K含4-11%残留的丙酰基基团,该基团阻止聚合物骨架紧密结合到DNA。然而,PEI 40K完全去丙酰化结构,意味着每个批次保持连续性更高转化效率。

本品是PEI 40K的无菌溶液,浓度为1mg/ml,直接使用即可。1ml本品足以用来转染250μg DNA,或者,6孔板内约做60-120次转染。

保存与运输方法

保存:+4℃保存,1年有效。

运输:室温运输。

注意事项

1)请务必使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度,260nm/280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

2)使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。

3)对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。

4)对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。

5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

试剂准备

稀释液准备:用细胞培养级水来制备150mM NaCl(比如:称取876.6mg高纯NaCl加入80ml细胞培养级水,充分溶解后,定容到100ml,经0.1或0.2μm滤膜过滤除菌。)

【注意】:也可使用商业化的无血清培养基(比如Opti-MEM I)来制备转染复合物。

 

一、操作方法(贴壁细胞)

1.1铺板

a)转染前18-24h进行铺板,调整合适的细胞密度(参考表1),使其在转染时细胞密度达60-80%。

【注意】:高血清水平会抑制转染效率,大多数情况,低血清水平(≤5%)能产生最高的转染效率。

表1.不同培养器皿的建议接种密度
培养器皿 培养表面积

(cm2)

接种细胞数 培养器皿 培养表面积(cm2) 接种细胞数
96孔板 0.3 (1.2-2.4) ×104 35mm培养皿 9.6 (3.5-7.0) ×105
48孔板 1.0 (4.0-8.0) ×104 60mm培养皿 21 (0.9-1.8) ×106
24孔板 1.9 (0.8-1.6) ×105 100mm培养皿 58 (2.2-4.4) ×106
12孔板 3.5 (1.5-3.0) ×105 T75培养瓶 75 (3.0-6.0) ×106
6孔板 9.6 (4.0-8.0) ×105 T175培养瓶 175 (0.7-1.4) ×107

1.2转染步骤(以6孔板的单孔为例)

a)转染前1-2h,每孔替换为3ml含2%血清的新鲜生长培养基。

b)制备PEI 40K-DNA转染复合物(严格按照顺序进行):①往300μl稀释液内加入2μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入8μl PEI 40K(1mg/ml)(DNA/PEI 40K=1:4),低速涡旋5s;③无菌环境,室温静置20min以形成PEI 40K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次,轻轻混匀。

c)将PEI 40K-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋,使得复合物分散均匀。

【注意】:以上步骤可通过调整PEI 40K-DNA复合物在稀释液内的体积(稀释液为培养总体积的10%)来进行放大或缩小(可参考表2)。确保DNA/PEI 40K=1:4!

表2. 各种培养体系内转染用各组分建议用量
培养器皿 培养体积(ml) 质粒DNA(μg) 稀释液(ml) PEI 40K(μl)
6孔板,单孔 3 2-4 0.3 8-16
35mm培养皿 3 2-4 0.3 8-16
60mm培养皿 5 6-12 0.5 24-48
100mm培养皿 10 12-24 1.0 48-96
T75培养瓶 15 18-36 1.5 72-144
250ml摇瓶 50 50-100 2.5 200-400

1.3 孵育

a)37℃,5% CO2培养箱内培养细胞,转染后12-18h,去除含PEI 40K-DNA复合物的培养液,更换新鲜的生长培养基。

b)通常,转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。

二、操作方法(悬浮细胞)

2.1接种准备

于转染前2-3h,按照1.0×106/ml培养接种细胞。

2.2 转染步骤(以:50ml培养物/250ml摇瓶为例)

a)制备PEI 40K-DNA转染复合物(严格按照顺序进行):①往2.5ml稀释液内加入50μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入200μl PEI 40K(1mg/ml)(DNA/PEI 40K=1:4),低速涡旋5s;③无菌环境,室温静置20min以形成PEI 40K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次,轻轻混匀。

b)将全部转染溶液加入25ml悬浮细胞内。

c)将悬浮细胞放回培养箱内。

2.3 孵育

a)在培养箱内摇动培养2-3h,之后加入25ml新鲜生长培养基。重新放回培养箱。

b)通常,转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。

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货号 名称 规格
MX2202-250MG Polyethylenimine Linear, MW 25000线性化聚乙烯亚胺PEI 25000 250mg
MX2203-250MG Polyethylenimine Linear, MW 40000 (PEI 40K)线性化聚乙烯亚胺PEI 40000 250mg
MX2204-1ML PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂 1ml
MX2205-1ML PEI 40K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂 1ml
MX2211-0.15ML Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂质体转染试剂 0.15ml
MX2216-0.5KIT CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小分子RNA转染试剂盒 0.5kit

 

 

 

PEI 40K Transfection Reagent 线性化聚乙烯亚胺转染试剂


描述

PEI 40K Transfection Reagent

线性化聚乙烯亚胺转染试剂

产品标签

PEI 40K转染试剂,PEI 25K转染试剂;线性化聚乙烯亚胺;PEI 40000;PEI25000;Lipofectamine 2000;Lipofectamine 3000;

产品信息

  产品名称   产品编号   规格  价格(元)
  PEI 40K Transfection Reagent    

  线性化聚乙烯亚胺转染试剂

  MX2205-1ML   1ml 280
  MX2205-10ML   10ml 880
  MX2205-50ML   50ml    1680

产品描述

线性化聚乙烯亚胺PEI 40000(Polyethylenimine Linear, MW 40000; PEI 40K)是一款优秀和低成本的瞬时性转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中,PEI在宽广的生产规模内(从96孔板到100L生物反应器)能提供连续性的高基因表达。

作为线性化聚乙烯亚胺PEI25000(PEI 25K)的升级产品,操作更简单,且具有连续性的更高表达滴度,优势在于:1)PEI 25K转染溶液通常需几个小时来配置,然而,PEI 40K在2个小时内即可转化为即用型的溶液;2)PEI 25K含4-11%残留的丙酰基基团,该基团阻止聚合物骨架紧密结合到DNA。然而,PEI 40K完全去丙酰化结构,意味着每个批次保持连续性更高转化效率。

本品是PEI 40K的无菌溶液,浓度为1mg/ml,直接使用即可。1ml本品足以用来转染250μg DNA,或者,6孔板内约做60-120次转染。

保存与运输方法

保存:+4℃保存,1年有效。

运输:室温运输。

注意事项

1)请务必使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度,260nm/280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

2)使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。

3)对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。

4)对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。

5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

试剂准备

稀释液准备:用细胞培养级水来制备150mM NaCl(比如:称取876.6mg高纯NaCl加入80ml细胞培养级水,充分溶解后,定容到100ml,经0.1或0.2μm滤膜过滤除菌。)

【注意】:也可使用商业化的无血清培养基(比如Opti-MEM I)来制备转染复合物。

 

一、操作方法(贴壁细胞)

1.1铺板

a)转染前18-24h进行铺板,调整合适的细胞密度(参考表1),使其在转染时细胞密度达60-80%。

【注意】:高血清水平会抑制转染效率,大多数情况,低血清水平(≤5%)能产生最高的转染效率。

表1.不同培养器皿的建议接种密度
培养器皿 培养表面积

(cm2)

接种细胞数 培养器皿 培养表面积(cm2) 接种细胞数
96孔板 0.3 (1.2-2.4) ×104 35mm培养皿 9.6 (3.5-7.0) ×105
48孔板 1.0 (4.0-8.0) ×104 60mm培养皿 21 (0.9-1.8) ×106
24孔板 1.9 (0.8-1.6) ×105 100mm培养皿 58 (2.2-4.4) ×106
12孔板 3.5 (1.5-3.0) ×105 T75培养瓶 75 (3.0-6.0) ×106
6孔板 9.6 (4.0-8.0) ×105 T175培养瓶 175 (0.7-1.4) ×107

1.2转染步骤(以6孔板的单孔为例)

a)转染前1-2h,每孔替换为3ml含2%血清的新鲜生长培养基。

b)制备PEI 40K-DNA转染复合物(严格按照顺序进行):①往300μl稀释液内加入2μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入8μl PEI 40K(1mg/ml)(DNA/PEI 40K=1:4),低速涡旋5s;③无菌环境,室温静置20min以形成PEI 40K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次,轻轻混匀。

c)将PEI 40K-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋,使得复合物分散均匀。

【注意】:以上步骤可通过调整PEI 40K-DNA复合物在稀释液内的体积(稀释液为培养总体积的10%)来进行放大或缩小(可参考表2)。确保DNA/PEI 40K=1:4!

表2. 各种培养体系内转染用各组分建议用量
培养器皿 培养体积(ml) 质粒DNA(μg) 稀释液(ml) PEI 40K(μl)
6孔板,单孔 3 2-4 0.3 8-16
35mm培养皿 3 2-4 0.3 8-16
60mm培养皿 5 6-12 0.5 24-48
100mm培养皿 10 12-24 1.0 48-96
T75培养瓶 15 18-36 1.5 72-144
250ml摇瓶 50 50-100 2.5 200-400

1.3 孵育

a)37℃,5% CO2培养箱内培养细胞,转染后12-18h,去除含PEI 40K-DNA复合物的培养液,更换新鲜的生长培养基。

b)通常,转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。

二、操作方法(悬浮细胞)

2.1接种准备

于转染前2-3h,按照1.0×106/ml培养接种细胞。

2.2 转染步骤(以:50ml培养物/250ml摇瓶为例)

a)制备PEI 40K-DNA转染复合物(严格按照顺序进行):①往2.5ml稀释液内加入50μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入200μl PEI 40K(1mg/ml)(DNA/PEI 40K=1:4),低速涡旋5s;③无菌环境,室温静置20min以形成PEI 40K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次,轻轻混匀。

b)将全部转染溶液加入25ml悬浮细胞内。

c)将悬浮细胞放回培养箱内。

2.3 孵育

a)在培养箱内摇动培养2-3h,之后加入25ml新鲜生长培养基。重新放回培养箱。

b)通常,转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。

相关产品

货号 名称 规格
MX2202-250MG Polyethylenimine Linear, MW 25000线性化聚乙烯亚胺PEI 25000 250mg
MX2203-250MG Polyethylenimine Linear, MW 40000 (PEI 40K)线性化聚乙烯亚胺PEI 40000 250mg
MX2204-1ML PEI 25K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂 1ml
MX2205-1ML PEI 40K Transfection Reagent线性化聚乙烯亚胺转染试剂 1ml
MX2211-0.15ML Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂质体转染试剂 0.15ml
MX2216-0.5KIT CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小分子RNA转染试剂盒 0.5kit

 

 

 

GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

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GenomONE®Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂
GenomONE®Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

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GenomONE®Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

可用于DNA、siRNA、ODN及蛋白转染!

 

原理

 

GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

 

  待转移的分子(如DNA,蛋白,Antisense Oligonucleotide, siRNA等)与 HVJ-Envelope(HVJ-E)混合后,形成了 HVJ-E 载体。利用病毒衣壳蛋白的侵染能力,在融合蛋白(F)的作用下,直接与细胞融合,将分子转入目标细胞或组织。

 

  * HVJ-E:Hemagglutinating Virus of Japan Envelope。

  ** 现已有200多篇文献使用该试剂盒,如需样本案例,请向我司索取。

 

 

优点、特色

 

      目前市面上独一无二的转染试剂盒,可用于细胞、组织和活体动物。可用于:

 

siRNA
少量 siRNA 也可高效发挥敲除作用,无需化学修饰siRNA,高表达量。

DNA
无论序列长短、线性或环状均可

Oligonucleotides
DNA、RNA

蛋白
保持酶和抗体的功能性与特异性

体内转染 !!
大量操作和文献引用证明HVJ-E载体可直接将目标分子转移到活体动物产生作用。

高通量筛选
可同时转染多种分子

1. 运用范围广
GenomONE HVJ-E 载体试剂盒可将多种分子(质粒 DNA、siRNA、寡核苷酸、蛋白、抗体等)转进培养细胞(贴壁和非贴壁细胞)和组织。也可用于敏感原代细胞和 活体动物转染。每种领域的GenomONE®-Neo EX 运用情况,均有大量文献报道。(如需文献列表,请向我司索取)

2. 安全性
与阳离子脂质体不同,GenomONE®-Neo EX 是通过膜融合作用将分子导入细胞,而脂质体转染的内吞作用可能造成转染分子经溶酶体作用而降解。GenomONE®-Neo EX 内含完全灭活的HVJ病毒颗粒,其具有侵染力而无潜在增殖能力,使用非常安全,无需特殊的防护措施    

3. 方便简单
GenomONE 即开即用,试剂盒内包含了操作中主要使用的 HVJ-E 冻干粉和各种辅助试剂  
   

 

案例、应用

 

  GenomONE®-Neo EX 和传统的脂质体转染和电穿孔法相比,有更高的转染效率和更低的细胞毒性,可更有效的发挥 siRNA 的 knock-down 作用。

 

in vivo

 

大鼠颌下腺逆行注射siRNA

  Ca2+-dependent Cl channel protein(rCLCA)表达的特异性抑制。

 

免疫染色

 

GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents      GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

   non-injection side                 rCLCA siRNA-injection side

 

  rCLCA siRNA(2 nmol)和GenomONE-Neo(2AU)混合后,以逆行注射的方式注入大鼠颌下腺。四十八小时后,用免疫染色检验 siRNA 注射对氯离子通道蛋白表达的抑制作用。
  ST:纹状管,G:颗粒曲管,A:腺泡

  【相关文献】

  K. Ishibashi et al., J. Dent. Res., 85(12), 1101-1105 (2006).

 

in vitro

 

【难转染细胞——U937 细胞 RNAi】

 

  总所周知,用脂质体和电转的方法将 siRNA 转到 U937 人单核细胞白血病细胞中非常困难,但我们通过实验证明,siRNA 与 GenomONE-Neo 结合后转染该细胞,其 knock-down 效率可达85%以上。

 

♦ U937 细胞经 siRNA 转染72小时后收集,用 RT-PCR 和 WB 分别检测 mRNA 和蛋白量的变化情况。


Real-time PCR             Western blotting

GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents      GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

 

  左图:转染 Cathepsin G 的特异性 siRNA 后,其对应的 mRNA 减少到14%

  右图:转染 Cathepsin G 的特异性 siRNA 后,其蛋白水平减少到15%

 

 【相关文献】 
  Y. Tsuchiya et al, Free Radical Biology & Medicine, 43, 1604-1615 (2007).

 

试剂盒组成

 

 

Cat.  #

Freeze-dried

HVJ-E

(inactivated HVJ)
0.26 mL/vial
(when reconstituted)

Reagent A

(enhancer for incorporation)
0.5 mL/vial

Reagent B

(reagent for
incorporation)
0.3 mL/vial

Reagent C

(enhancer for introduction)
1.0 mL/vial

Buffer

(for suspension
and dilution)
6.5 mL/vial

385-18731

1 vial

1 vial

1 vial

1 vial

1 vial

381-18733

4 vials

1 vial

1  vial

1  vial

1 vial

385-18736

40 vials

10 vials

10 vials

10 vials

10 vials

 

 

 

 

【相关资料】

 

GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

 

GenomONE-Neo EX 操作手册

 

同系列相产品

 

 

产品编号 产品名称 规格 应用
 388-18721 GenomONE® -CF EX 

GenomONE® -CF EX 细胞融合试剂

 

 1 set  细胞融合试剂

 

384-18723 4 sets
382-18724 16 sets

 

参考文献

GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

点击此处下载产品参考文献目录

[1]

Different effect of resveratrol to induction of   apoptosis depending on the type of human cancer cells.

Takashina M, Inoue S, Tomihara K, Tomita K, Hattori K, Zhao QL, Suzuki T,   Noguchi M, Ohashi W, Hattori Y.Int J Oncol. 2017 Mar;50(3):787-797. PMID: 28197625

[2]

Protein Transfection ( in vitro / in vivo ) / Peptide   Transfection ( in vitro )

Directly reprogramming fibroblasts into adipogenic,   neurogenic and hepatogenic differentiation lineages by defined factors.Wu W, Jin YQ, Gao Z.Exp Ther Med. 2017 Jun;13(6):2685-2690. PMID: 28587331

[3]

siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA   Transfection ( in vitro )

Impaired Dual-Specificity Protein Phosphatase DUSP4   Reduces Corticosteroid Sensitivity.Kobayashi Y, Ito K, Kanda A, Tomoda K, Mercado N, Barnes PJ.Mol Pharmacol. 2017 May;91(5):475-481. PMID: 28283554

[4]

siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA   Transfection ( in vitro )

AIM2 Inflammasome Is Critical for Influenza-Induced   Lung Injury and Mortality Zhang H, Luo J, Alcorn JF, Chen K, Fan S, Pilewski J, Liu A, Chen W, Kolls   JK, Wang J. J Immunol. 2017 Jun 1;198(11):4383-4393. PMID: 28424239

[5]

siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA   Transfection ( in vitro )

Human monocytes downregulate innate response receptors   following exposure to the microbial metabolite n-butyrate
Lasitschka F, Giese T, Paparella M, Kurzhals SR, Wabnitz G, Jacob K, Gras J,   Bode KA, Heninger AK, Sziskzai T, Samstag Y, Leszinski C, Jocher B, Al-Saeedi   M, Meuer SC, Schroder-Braunstein J.Immun Inflamm Dis. 2017 Jul 6. PMID: 
28681454

[6]

siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA   Transfection ( in vitro )

Inhibition of TrkB limits development of the zebra   finch song system.
Beach LQ, Tang YP, Kerver H, Wade J. Brain Res. 2016 Jul 1;1642:467-477. PMID: 
27086969

[7]

Plasmid DNA Transfection ( in vivo / in vitro )

High-efficiency generation of induced pluripotent   mesenchymal stem cells from human dermal fibroblasts using recombinant   proteins Chen F, Zhang G, Yu L, Feng Y, Li X, Zhang Z, Wang Y, Sun D, Pradhan S. Stem Cell Res Ther. 2016 Jul 30;7(1):99. PMID: 27473118

[8]

siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA   Transfection ( in vitro )

Netrin-1 prevents the development of cardiac hypertrophy and heart failure.
Wang N, Cao Y, Zhu Y. Mol Med Rep. 2016 Mar;13(3):2175-81. PMID: 
26783193


请参考附件:

 

GenomONE_参考文献_体外实验.pdf

GenomONE_参考文献_体内实验.pdf

 


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
385-18731 GenomONE® –Neo EX (FD)
GenomONE® –Neo EX (FD)转染试剂套装
1 set
381-18733 GenomONE® –Neo EX (FD)
GenomONE® –Neo EX (FD)转染试剂套装
4 sets
389-18734 GenomONE® –Neo EX (FD)
GenomONE® –Neo EX (FD)转染试剂套装
16 sets
385-18736 GenomONE® –Neo EX (FD)
GenomONE® –Neo EX (FD)转染试剂套装
40 sets

免责声明

1. 本公司密切关注本网站发布的内容,但不保证发布内容的准确性、完整性、可靠性和最新性等。

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3. 无论何种原因,使用本网站时给用户或第三方造成的任何不利或损害,本公司概不负责。此外,对于用户与其他用户或第三方之间因本网站发生的任何交易、通讯

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4. 本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗,仅可用于科研等非医疗目的。如任何用户将本网站提供的产品和服务用临床诊断或治

4. 疗,以及他特定的用途或行为,本公司概不保证其安全性和有效性,并且不负任何相关的法律责任。

SAFETRAN核酸载体 SAFETRANS

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SAFETRAN核酸载体
SAFETRANS

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体内、体外转染试剂盒

SAFETRAN核酸载体                              SAFETRANS

SAFETRANS核酸载体

原理

  SAFETRANS是一种特殊的基因载体,由树枝状聚合物(阳离子聚合物)和环状低聚糖组成,能够在体内和体外将pDNA、shRNA、siRNA、hRNA和miRNA导入到多种细胞内,并且细胞毒性极小。



优点、特色

● 能够转染pDNA、shRNA、siRNA、hRNA和miRNA

● 通过静脉内和皮下注射能够在体内转染

● 兼容反向转(仅α-CDE)

● 成功转染多种细胞系

● 低细胞毒性

● 一致的基因诱导率

● 根据不同情况可对操作手册微调

● 肝细胞可选择性转染



产品列表

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
CSR-KMU-T01 SAFETRANS ((ALPHA)-CDE)
核酸载体
2mg
CSR-KMU-T02 SAFETRANS (GUG-(BETA)-CDE)
核酸载体
2mg
CSR-KMU-T03 SAFETRANS (Lac-(ALPHA)-CDE)
核酸载体
2mg

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AteloGene® siRNA活体转染试剂盒 AteloGene® Quick Gelation

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AteloGene® siRNA活体转染试剂盒
AteloGene® Quick Gelation

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

AteloGene® siRNA 活体转染试剂盒AteloGene® siRNA活体转染试剂盒                              AteloGene®  Quick Gelation

AteloGene® Quick Gelation


原理

  AteloGene® 的主要成分是 Atelocollagen(去端肽胶原),将合成的 siRNA/miRNA 通过适当混合,形成 siRNA/miRNA 的 Atelocollagen 复合体,该复合物可有效导入细胞,因此适用于活体内转染。


AteloGene® siRNA活体转染试剂盒                              AteloGene®  Quick Gelation



◆制备


  siRNA/Atelogene 复合物的制备极其简单:取等体积的 AteloGene® 与 siRNA/miRNA 溶液混合后,注射到小鼠即可。

  *siRNA/miRNA 溶液体积:局部 5-10 μM,全身 20-40 μM siRNA


AteloGene® siRNA活体转染试剂盒                              AteloGene®  Quick Gelation

siRNA被高效导入组织

  Atelocollagen 和 25 μg 的 siRNA 混合后,通过尾静脉注射,24小时后,可在不同组织中检测到 RNA 的存在。 


操作步骤

         AteloGene™ 和合成的小 RNA 即混即用:

         ● 专门用于 siRNA/miRNA 体内转染

         ● 保护 小RNA 不被RNase降解,延长作用时间

         ●  “AteloGene™”无毒性,其组成成分去端肽胶原具有高生物相容性

         ● 使用 “AteloGene™ Local Use”,局部给药,给药后,会在体内形成局部凝胶,保持 siRNA停留在给药位。

         ● 使用“AteloGene™ Systemic Use”,通过尾静脉注射,全身给药。 给药后,不会在体内形成凝胶,静脉注射,通过血液循环,siRNA

               被有效的输送到全身。 



案例、应用


【转染人 RGM249 基因的3种小分子 RNA 后肿瘤明显减小】


AteloGene® siRNA活体转染试剂盒                              AteloGene®  Quick Gelation


  从人 RGM249 基因的小分子 RNA 中,选择三种 siRNAs 和 AteloGene® Local Use 试剂混合,注射到人恶性黑色素瘤皮下肿瘤模型鼠中。
  4周后观察到,注射 siRNA 和 AteloGene® 混合物的模型鼠其皮下肿瘤扩散明显减少。

 

【已报道的 AteloGene® 系列转染案例】


AteloGene® siRNA活体转染试剂盒                              AteloGene®  Quick Gelation


产品列表


产品编号 产品名称 规格 应用
KOU-1392 AteloGene® Local Use 1 Kit 局部注射后,复合物变为凝胶状,保留在注射部位
KOU-1393 AteloGene® Systemic Use 1 Kit 静脉注射后,随着血液循环可将 siRNA/miRNA传递到全身


*标准操作中,每小鼠最大注射剂量为 200 μL;客户可根据实际注射部位调整使用量 10~200 μL。
*以最大剂量计,每 Kit 至少可注射12次




常见问题


                  

Q1:   Atelocollagen(去端肽胶原)与普通天然胶原的区别

A1:   Atelocollagen(去端肽胶原)是一种通过蛋白酶溶解的胶原蛋白,其物理性质与未经过蛋白酶作用的天然胶原蛋白几乎相同。


          同时,Atelocollagen 还具有更优越的特性:


          低抗原性

          Atelocollagen 是经过蛋白酶处理的小牛皮来源的高纯度I型胶原蛋白。胶原蛋白分子在N端和C端具有一段氨基酸序列,称为端肽,胶原

          蛋白的抗原性多来自于此。 Atelocollagen 通过蛋白酶的作用,去掉了端肽,故具有低免疫原性。


          高纯度

          Atelocollagen 的纯度极高。该特性得益于蛋白酶处理过程,该处理在提取去端肽胶原的过程中,因为蛋白酶的作用也分解了其他蛋白污

          物。


          高度生物相容性

          Atelocollagen 可生物降解,因此可用于各种领域,如医药,医疗器械,作为化妆品原理,及细胞培养研究。


          高度可塑性

          去端肽胶原可被改造成许多不同的物理性状,如膜、海绵状结构、带状结构、粉末和凝胶。我们可利用去端肽胶原的这一特性,生产适用

          于任何领域的物理性状。例如,去端肽胶原不溶于中性水,但可以通过改变性状,使其溶于中性水中。同样,可以利用去端肽胶原的这一

          特性,将其作为凝固剂或抗凝剂,并可以控制其被人体吸收的速率。


          安全性

          我们精确管理每一只用于生产去端肽胶原的牛,以确保原料的安全性。

          A. 我们使用的牛真皮来自澳大利亚国家畜牧业溯源系统,牛龄为6月或更小的牛犊。

          B. 我们不使用动物饲料喂养牛羊,只用无疯牛病的安全饲料。

          C. 我们只使用牛皮的真皮层,其被归于“无传染性”类(WHO对传染性海绵状脑病组织感染性分布准则)。

            收集的过程中,我们非常小心防止真皮层与危害部位接触,如大脑和脊柱。

          D. 我们能够对胶原蛋白生产的原料进行溯源。

Q2:  转染试剂盒内的去端肽胶原溶液和医用级别的去端肽胶原溶液有何区别?

A2:  我们对试剂盒内的去端肽胶原浓度以及缓冲液成分进行了优化,以提高siRNA的转染效率;使用的去端肽胶原与医用级别的制造工艺相同,

          故该转染试剂盒对试验动物非常安全,且具有高度生物相容性。

 

Q3:  AteloGene® 活体转染的优势

A3:  AteloGene® 和合成的小RNA即混即用

          ● 专门用于 siRNA/miRNA 体内转染

          ● 保护小 RNA 不被 RNase 降解,延长作用时间

          ● AteloGene® 无毒性,其组成成分去端肽胶原具有高生物相容性

          ● 使用 AteloGene® Local Use,局部给药,给药后,会在体内形成局部凝胶,保持 siRNA 停留在给药部位。

          ● 使用 AteloGene® Systemic Use,通过尾静脉注射,全身给药。 给药后,不会在体内形成凝胶,尾静脉注射,通过血液循环,siRNA

             被有效的输送到全身。

 

Q4:  AteloGene® 与 siRNA 复合物在血液中稳定吗?

A4:  我们已经证明,AteloGene® 与 siRNA 复合物能够抵御如RNA酶等物质的作用。

          Atelocollagen 和 25 μg 的 siRNA 混合后,通过尾静脉注射,24小时后,可在不同组织中检测到 RNA 的存在。

          参考文献 : Takeshita F, et al. Efficient delivery of small interfering RNA to bone-metastatic tumors 

                           by using atelocollagen in vivo. (2005) Proc Natl Acad Sci USA. 102(34):12177-12182.

Q5:  能否使用市面上,传统的胶原蛋白进行 siRNA 转染?

A5:  我们不建议这样做,因为您需要根据具体条件进行额外的实验。

 

Q6:  AteloGene® QG 与 AteloGene® 两款产品有何区别?

A6:

AteloGene® QG

AteloGene®

给药后,快速形成局部凝胶

给药后,释放速度受到控制

至少可给药15次。

至少可给药10次。

 

          AteloGene® QG与AteloGene® 凝胶形成时间对比:


AteloGene® siRNA活体转染试剂盒                              AteloGene®  Quick Gelation

Q7:   能否使用 AteloGene® 转染体外培养细胞?

A7:   AteloGene® 是专门为体内转染而研发的,因此我们不建议您用于体外实验。

          体外转染研究,推荐您使用 Cosmo Bio 的 GenomONE™ 仙台病毒包膜转染试剂盒,可转染 DNA、siRNA、ODN、蛋白抗体等分子;该

          产品使用安全,可替代传统的病毒转染及脂质体转染方法。GenomONE™ 的更多资料,请向我司索取。

 

Q8:  AteloGene® 能否用于质粒 DNA 转染?

A8:  AteloGene® 是专门用于siRNA转染的产品,因此我们不建议您用于质粒 DNA 转染。

          以下两篇是使用 AteloGene® 转染质粒DNA的文献,供您参考:

          a.      内皮功能障碍研究,静脉注射

                   Shinozaki K, et al. (2005)Cardiovasc Pharmacol. 46(4):505-512.

          b.      脑胶质瘤研究,肿瘤内给药

                   El Sayed SM, et al. (2012) Cancer Gene Ther. 19(1):1-18.


Q9:  能否提供免费试用装,用于评估产品效果?

A9:  我们无法提供免费试用装。

        (AteloGene® 已有大量文献和研究证明其有效性,如果您需要相关领域的运用情况,请查看文献列表)

 

Q10:AteloGene® 与 siRNA 复合物在血液中稳定吗?

A10:我们已经证明,AteloGene® 与 siRNA 复合物能够抵御如 RNA 酶等物质的作用。

          具体请参考“RNAi 效率”相关文献。

          Takeshita F, et al. Efficient delivery of small interfering RNA to bone-metastatic tumors by using atelocollagen in vivo. (2005) 

          Proc Natl Acad Sci USA. 102(34):12177-12182."

 

Q11: 试剂盒组成?

A11: 1 Kit 按照最大剂量计算,至少可用 10 次。

           – 预充式注射器 600 µL×2 (每只注射器内预填充的“AteloGene®”至少可给药5次)

           – 10×siRNA 缓冲液: 3 mL×1瓶

           – 无菌水:3 mL×1瓶

           – 微型管:2.0 mL×2管

           – 一次性注射器: 1 mL×2只

           – 18G 注射、抽吸用针头:4只

           – 26G 注射针头: 2只

           – 说明书:1份

 

Q12: AteloGene® 如何使用?

A12: 具体操作请参照产品说明书。

          1) 准备AteloGene®

              将预充式注射器内的AteloGene® 转移到微管中,并放置于冷却设备上保持低温。

          2) 准备siRNA溶液

              根据局部给药和全身给药的情况,分别准备 600 µL 5-10 µM 或 20-40 µM siRNA 溶液,并保持低温。

          3) 制备 AteloGene® 与 siRNA 的混合溶液

              将 siRNA溶液(步骤2)缓慢加入 AteloGene®(步骤1),通过上下旋转混合,得到 AteloGene® 和 siRNA 混合物,以上操作均在

              冷却设备中进行。

          4) 消除气泡及准备给药

              将第3步得到的混合物离心,去除气泡后,吸入一次性注射器内。


          <局部给药>

              注射 AteloGene® 和 siRNA 复合物使其包裹整个靶标部位。每只小鼠的标准剂量为 200 µL 复合物。

          ● 局部给药案例

              皮下肿瘤给药

              a. 如有必要,请麻醉动物。

              b. 在距肿瘤边缘 5 mm 的位置插入针头,针头截面向上。

              c. 将针头平行于皮肤插入距离肿瘤 2~3 mm 的位置,然后缓慢的注射 200 µL AteloGene® 和 siRNA 复合物。使复合物包裹住整个

                 肿瘤。


          <全身给药>

              每只小鼠的标准剂量为 200 µL AteloGene® 和 siRNA 复合物。

              每次注射的上限是 200 µL,请确保不会超过这个剂量。

              a. 如有必要,请麻醉动物。

              b. 固定小鼠。

              c. 用浸润乙醇的棉签擦拭消毒小鼠尾巴。

              d. 将针头插入尾部静脉1/4-1/3处,该部位应该是完全膨胀。

              e. 确认针头插入了正确的部位,然后缓慢的注入 200 µL AteloGene® 和 siRNA 复合物。

              f.  确认小鼠恢复正常。

Q13:  储存注意事项

A13:  产品需储存于2-10℃(不可冷冻)。

           ★ 当温度高于20℃时,AteloGene® 会发生凝胶化和热变性,如果产品已经发送凝胶化和热变性,请立即停止使用。

           ★ 冷冻 AteloGene® 会导致混合物中产生分散性气泡,请勿使用冷冻后的 AteloGene® 进行实验。

 

Q14:  产品有效期

A14:  产品生产后3年有效。

 

Q15:  使用注意事项

A15:1) 该试剂仅供科研使用,禁止用于人体实验。请勿用于科研以外的任何目的。

          2) 务必在使用前仔细阅读说明书,制造商不对超出说明书使用方法得到的结果承担任何责任。

          3) 转染效率取决于siRNA序列、靶基因的表达水平、不同组织和给药方式等多方面因素,可能并不总是得到预期的效果。

              实验前,请您调查好给药后的作用持续时间及分析方法。

 

Q16:  操作注意事项

A16:  在洁净的环境下进行所有步骤:

          ● 使用恰当的方法消除 RNA 酶,避免的 siRNA 的降解。

          ● 在储存过程中,10×siRNA 缓冲液可产生结晶。如出现这种情况,使用之前将其加热到约 37℃,使之完全溶解。

          ● 使用 AteloGene® 和 siRNA 的混合物前,确保气泡已完全消除。


AteloGene® 参考文献_全身给药
◆全身给药/癌症研究
研究领域 核酸 给药途径 参考文献 PubMed ID
前列腺癌, 肺癌 siRNA 静脉注射,肿瘤内 Takahashi    M, et al. (2013)    PLoS One 8(8): e73214. 23951344
口腔鳞状细胞癌 miRNA 静脉注射 Tanaka    H, et al. (2013)    Oral Oncol. 49(6):551-559. 23481312
非小细胞肺癌, 乳腺癌 siRNA 静脉注射 Mochizuki    S, et al. (2012) J Natl Cancer Inst. 104(12):906-922. 22636800
骨肉瘤转移 miRNA 静脉注射 Osaki    M, et al. (2011) Mol Ther.19(6):1123-1130. 21427707
前列腺癌 siRNA 静脉注射 Azuma    K, et al. (2010) Biochem Biophys Res Commun. 391(1):1075-1079. 20004643
前列腺癌 siRNA 静脉注射 Sasaki    T, et al. Biochem Biophys Res Commun. (2010)    399(1):79-83. 20638364
转移性前列腺癌 miRNA 静脉注射 Takeshita    F, et al. (2010) Mol Ther.18(1):181-187. 19738602
前列腺癌 siRNA 静脉注射 Mu    P, et al. (2009) Int J Cancer.125(12):2978-2990. 19422046
前列腺癌 siRNA 静脉注射 Hokaiwado    N, et al. (2008)Carcinogenesis. 29(6):1134-1138. 18413363
转移性前列腺癌 siRNA 静脉注射 Takeshita    F, et al. (2005) Proc Natl Acad Sci USA. 102(34):12177-12182. 16091473
◆全身用药/ 多项研究
研究领域 核酸 给药途径 参考文献 PubMed ID
自身免疫性炎症 siRNA 静脉注射 Raveney    BJ, et al. (2013)    PLoS One. 8(2):e56595. 23437182
血管内皮细胞通透性 Hanai    K, et al. (2012) J Drug Delivery.Article ID 245835. 22506120
接触性超敏反应 siRNA 静脉注射 Inaba    S, et al. (2012) Mol Ther.20(2):356-366. 22031237
自身免疫性糖尿病 siRNA 腹腔 Lian    G, et al. (2012) J Immunol.188(5):2227-2234 . 22291182
血管炎性疾病 miRNA 静脉注射 Sun    X, et al. (2012) J Clin Invest.122(6):1973-1990. 22622040
毒品和化学诱导急性肝损伤 siRNA 静脉注射 Yoshikawa    Y, et al. (2012) Toxicol Appl Pharmacol. [Epub    ahead of print] 22841776
肢带型肌营养不良症 siRNA 静脉注射 Kawakami    E, et al. (2011) Dev Growth Differ. 53(1):48-54. 21261610
关节炎 miRNA 静脉注射 Nakasa    T, et al. (2011) 关节炎 Rheum.Jun;63(6):1582-1590. 21425254
肝毒性比较 静脉注射 Ogawa    S, et al. (2011) J Toxicol Sci.36(6):751-762. 22129739
自身免疫性糖尿病 siRNA 腹腔 Yamada    A, et al. (2010) PLoS One.5(9):e12894. 20877570
接触性超敏反应 siRNA 静脉注射 Ishimoto    T, et al. (2008) Mol Ther.16(2):387-395. 18059372
肌营养不良症 siRNA 静脉注射 
     (眼眶静脉)
Kinouchi    N, et al. (2008) Gene Ther.15(15):1126-1130. 18323791
接触性超敏反应 antisense    ODN 静脉注射 Hanai    K, et al. (2004) Hum Gene Ther.15(3):263-272. 15018735
AteloGene® 参考文献_局部给药
◆局部给药/癌症研究
研究领域 核酸 给药途径 参考文献 PubMed ID
肝细胞癌 siRNA 肿瘤内 Deng Q, et al.  (2013) Hepatology.    [Epub ahead of print] 23929653
口腔癌 siRNA 瘤周 Endo    H, et al. (2013)    Carcinogenesis. 34(3):560-569. 23233740
骨肉瘤. siRNA 肿瘤内 Fujiwara-Okada    Y, et al. (2013) Br    J Cancer. 108(4):836-847. 23462806
乳腺癌 siRNA 肿瘤内 Kabuta    T, et al. (2013) J    Biol Chem. [Epub ahead of print] 23543736
前列腺癌 siRNA 瘤周 Nomura    T et al. (2013) Mol    Cancer. 12:27. 23566222
肾癌 siRNA 瘤周 Takeuchi    A, et al. (2013)    Cancer Immunol Immunother. 62(3):517-527. 23052245
脑胶质瘤 siRNA 肿瘤内 Yamaki    T, et al. (2013)    Sci Rep. 3:1160. 23362460
前列腺癌 siRNA 肿瘤内 Kawamura    M, et al. (2012)    Cell Death Differ. 19(1):170-179. 21681193
早衰 siRNA 瘤周 Kim    BC et al. (2012) EMBO J.31(22):4289-4303. 23085987
前列腺癌 shRNA 瘤周 Koike    K, et al. (2012) Curr Cancer Drug Targets. 12(7):847-856. 22515525
脑胶质瘤 siRNA 瘤周 Okazaki    T, et al. (2012) Cancer Lett.323(2):199-207. 22542810
脑胶质瘤 plasmid 肿瘤内 El    Sayed SM, et al. (2012) Cancer Gene Ther. 19(1):1-18. 21921941
尿路上皮癌 siRNA 经尿道前列腺 Shimada    K, et al. (2012) Clin Cancer Res. 18(19):5247-5255. 22850567
间皮瘤 siRNA 瘤周 Sudo    H, et al. (2012) Cancer Sci.103(2):203-209. 22017350
胚胎癌 siRNA 瘤周 Ushida    H, et al. (2012) J Urol.187(5):1876-1881. 22425046
肺腺癌 siRNA 肿瘤内 Yamaguchi    T, et al. (2012) Cancer Cell.21(3):348-361. 22439932
胰腺癌 siRNA 肿瘤内
(原位模型)
Yamato    I, et al. (2012) Cancer Res.72(18):4829-4839 22826605
脑胶质瘤 siRNA 瘤周 Andradas    C, et al. (2011) Oncogene.30(2):245-252. 20818416
头颈部鳞状细胞癌 siRNA 瘤周 Arai    A, et al. (2011) Cancer Res.71(13):4598-4607. 21571861
乳腺癌 siRNA 血管新生试验管(angioreacter)内 Hashimoto    A, et al. (2011) PLoS One.6(8):e23359. 21858086
胰腺癌 siRNA 肿瘤内 Kobayashi    T, et al. (2011) Clin Exp Metastasis. 28(4):367-376. 21331750
脑胶质瘤 siRNA 肿瘤内 Lorente    M, et al. (2011) Cell Death Differ. 18(6):959-973. 21233844
间变性大细胞淋巴瘤 miRNA 
     inhibitor
瘤周 Matsuyama    H, et al. (2011) Blood.118(26):6881-6892 22042699
结肠癌 siRNA 肿瘤内 Oh    BY, et al. (2011) World J Gastroenterol. 17(20):2563-2571. 21633662
肝细胞癌 siRNA 瘤周 Shigematsu    S, et al. (2011) Exp Cell Res. 317(13):1851-1859. 21624362
硬胃癌 miRNA expression    vector 肿瘤内
     (原位模型)
Takei    Y, et al. (2011) Cancer Res.71(4):1442-1453. 21169410
研究领域 核酸 给药途径 参考文献 PubMed ID
尤因氏肉瘤 siRNA 肿瘤内 Takigami    I, et al. (2011) Int J Cancer.128(1):216-226. 20648560
非小细胞肺癌 siRNA 瘤周
     (原位模型)
Tasaki    M, et al. (2011) Br J Cancer.104(4):700-706. 21285982
肾细胞癌 siRNA 瘤周 Tomita    S, et al. (2011) Cancer Sci.102(1):57-63. 21054677
子宫内膜癌 miRNA 瘤周 Tsuruta    T, et al. (2011) Cancer Res.71(20):6450-6462. 21868754
肝细胞癌 siRNA 瘤周 Vara    D, et al. (2011) Cell Death Differ.18(7):1099-1111. 21475304
前列腺癌 siRNA 肿瘤内 Zeng    Y, et al. (2011) J Biol Chem.286(16):13985-13994. 21357425
乳腺癌 siRNA 内部乳腺脂肪垫(原位模型) Cheng    L, et al. (2010) Oncogene.29(42):5700-5711. 20676140
前列腺癌 siRNA 瘤周 Forootan    SS, et al. (2010) Int J Oncol.36(1):69-76. 19956834
宫颈癌 siRNA 瘤周 He    L, et al. (2010) J Clin Invest.120(6):2094-2108. 20458142
头颈癌 miRNA inhibitor 瘤周 Liu    CJ, et al. (2010) Cancer Res.70(4):1635-1644. 20145132
骨髓瘤 siRNA 瘤周 Marsaud    V, et al. (2010) Mol Cancer.9:103. 20459741
尤因氏肉瘤 siRNA 肿瘤内 Nagano    A, et al. (2010) Int J Cancer.126(12):2790-2798. 19642105
肝细胞癌 siRNA 肿瘤内 Satow    R, et al. (2010) Clin Cancer Res.16(9):2518-2528. 20388846
大肠癌 siRNA 肿瘤内 Shitashige    M, et al. (2010) Cancer Res.70(12):5024-5033. 20530691
间皮瘤 siRNA 瘤周 Sudo    H, et al. (2010) Genomics.95(4):210-216. 20153416
p53基因突变 siRNA 瘤周 Tanooka    H, et al. (2010) Cancer Gene Ther. 17(1):1-10. 19557034
骨髓瘤 siRNA 瘤周 Ashihara    E, et al. (2009    ) Clin Cancer Res. 15(8):2731-2738. 19351774
脑胶质瘤 siRNA 瘤周 Lorente    M, et al. (2009) Glia.57(13):1374-1385. 19229996
膀胱癌 siRNA 经尿道前列腺 Shimada    K, et al. (2009) Cancer Res.69(7):3157-3164. 19293182
前列腺癌 siRNA 瘤周 Shimada    K, et al. (2009) Cancer Sci.100(7):1248-1254. 19432893
骨肉瘤 siRNA 肿瘤内 Yamaguchi    U, et al. (2009) Cancer Sci.100(12):2268-2274. 19725836
乳腺癌 siRNA 肿瘤内 Bernard-Pierrot    I, et al. (2008) Cancer Res. 68(17):7165-7175. 18757432
乳腺癌 siRNA 肿瘤内
     (原位模型)
Honma    K, et al. (2008) Nat Med.14(9):939-948. 18724378
胰腺癌 siRNA 肿瘤内 Iwaki    K, et al. (2008) Int J Cancer.122(3):658-663. 17935125
非小细胞肺癌 siRNA 瘤周 Migita    T, et al. (2008) Cancer Res.68(20):8547-8554. 18922930
涎腺腺样囊性癌 siRNA 肿瘤内 Shirasaki    T, et al. (2008) BMC Cancer.8:348. 19036131
黑色素瘤 siRNA 瘤周 Ueno    Y, et al. (2008) Int J Cancer.123(2):340-347. 18398842
宫颈癌 siRNA 肿瘤内 Yamato    K, et al. (2008) Cancer Gene Ther. 15(3):140-153. 18157144
研究领域 核酸 给药途径 参考文献 PubMed ID
宫颈癌 siRNA 肿瘤内 Yu    D, et al. (2008) Cancer Sci.99(4):810-815. 18377429
胆管癌 siRNA 肿瘤内 Kokuryo    T, et al. (2007) Cancer Res.67(20):9637-9642. 17942892
胃肠道肿瘤、横纹肌肉瘤 antisense ODN 肿瘤内, 腹腔,    肌内注射 Nakazawa    K, et al. (2007) Cancer.109(5):993-1002. 17318877
结肠癌 miRNA 瘤周 Tazawa    H, et al. (2007) Proc Natl Acad Sci U S A. 104(39):15472-15477. 17875987
卵巢癌 siRNA 瘤周 Yamashita    M, et al. (2007) Int J Cancer. 120(10):2243-2250. 17266036
宫颈癌 siRNA 肿瘤内 Fujii    T, et al. (2006) Int J Oncol.29(3):541-548. 16865269
头颈部鳞状细胞癌 siRNA 肿瘤内 Nozawa    H, et al. (2006) Cancer Sci.97(10):1115-1124. 16984384
前列腺癌 siRNA 肿瘤内 Takei    Y, et al. (2006) Cancer.107(4):864-873. 16832814
宫颈癌 siRNA 瘤周 Kuroda    M, et al. (2005) Br J Cancer.92(2):290-293. 15655544
前列腺癌 antisense    ODN 瘤周 Takei    Y, et al. (2005) Int J Cancer.114(3):490-497. 15578698
非精原细胞瘤 siRNA 肿瘤内
     (原位模型)
Minakuchi    Y, et al. (2004) Nucleic Acids Res. 32(13):e109. 15272050
前列腺癌 siRNA 瘤周 Takei    Y, et al. (2004) Cancer Res.64(10):3365-3370. 15150085
生殖细胞瘤 antisense    ODN 瘤周 Hirai    K, et al. (2003) J Gene Med.5(11):951-957. 14601132
直肠癌 antisense    ODN 肿瘤内 Takei    Y, et al. (2002) J Biol Chem.277(26):23800-23806. 11959856
直肠癌 antisense    ODN 瘤周 Takei    Y, et al. (2001) Cancer Res.61(23):8486-8491. 11731432
◆局部给药/ 多项研究
研究领域 核酸 给药途径 参考文献 PubMed ID
肌肉萎缩 siRNA 肌内注射 Kawakami    E, et al. (2013)    PLoS One. 8(5):e64719. 23717655
骨折 siRNA 骨折部位 Kawakami    Y, et al. (2013)    Lab Invest. [Epub ahead of print] 23897412
硬皮病 siRNA 皮内注射 Makino    K, et al. (2013) J    Immunol. 190(8):3905-3915. 23509348
高血压 siRNA 显微注射到RVLM Matsukawa    R, et al. (2013) Am    J Hypertens. 26 (1): 51-57. 23382327
脊髓损伤 siRNA 鞘内注射 Ando    T, et al. (2012)    PLoS One 7(12): e51744. 20181596
纤维化 siRNA 皮内注射 Distler    A, et al. (2012)    Ann Rheum Dis. 72(9):1575-1580. 23148305
纤维化 siRNA 皮内注射 Horn    A, et al. (2012)    Ann Rheum Dis. 71:785-789. 22402139
纤维化 siRNA 皮内注射 Khodzhigorova    A, et al. (2012) Ann Rheum Dis. [Epub ahead of    print] 22904261
哮喘 siRNA 气管导管 Liu    S, et al. (2012) Immunol Cell Biol. 90(3):337-345. 21625250
角膜损伤 shRNA 结膜 Bellner    L, et al. (2011) Mol Vis.17:1144-1152. 21552471
高血压 siRNA 显微注射到RVLM Matsukawa    R, et al. (2011) J Hypertens. 29(9):1735-1742. 21738056
脊髓损伤 siRNA 脊髓挫伤表面 Toyooka    T, et al. (2011) J Neurotrauma. 28(4):607-618. 21250919
研究领域 核酸 给药途径 参考文献 PubMed ID
肌肉损伤 miRNA 肌肉缺损区 Nakasa    T, et al. (2010) J Cell Mol Med. 14(10):2495-2505. 19754672
关节炎 miRNA ntraarticular Nagata    Y, et al. (2009) 关节炎 Rheum. 60(9):2677-2683. 19714650
进行性多灶性白质脑病 siRNA 显微注射到纹状体 Matoba    T, et al. (2008)Neuropathology. 28(3):286-294. 18179406
内膜增生 siRNA 静脉移植物的表面 Banno    H, et al. (2006) J Vasc Surg. 44(3):633-641. 16950446
内皮功能障碍 plasmid 肌内注射 Shinozaki    K, et al. (2005)Cardiovasc Pharmacol. 46(4):505-512. 16160605
家族性淀粉样多发性神经病变 single-stranded    ODN 肝脏 Nakamura    M, et al. (2004) Gene Ther. 11(10):838-846. 14961068
腺病毒载体重复给药 adenovirusvector 腹腔 Ochiya    T, et al. (2001) Curr Gene Ther. 1(1):31-52. 12109137


产品列表

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
KOU-1392 AteloGene® Local Use 
 AteloGene ®  siRNA活体转染试剂盒,局部
1 kit 用于体内局部小RNA转染
KOU-1393 AteloGene® Systemic Use
 AteloGene ®  siRNA活体转染试剂盒,全身
1 kit 用于体内全身小RNA转染
KOU-1492 AteloGene® Local Use Quick Gelation
AteloGene ®  siRNA活体转染试剂盒,局部,快速凝胶
用于体内局部小RNA转染

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GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

产品中心 > 生命科学 > 转染 > 体内体外适用转染试剂

GenomONE®Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂
GenomONE®Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

  • 产品特性
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GenomONE®Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

可用于DNA、siRNA、ODN及蛋白转染!

 

原理

 

GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

 

  待转移的分子(如DNA,蛋白,Antisense Oligonucleotide, siRNA等)与 HVJ-Envelope(HVJ-E)混合后,形成了 HVJ-E 载体。利用病毒衣壳蛋白的侵染能力,在融合蛋白(F)的作用下,直接与细胞融合,将分子转入目标细胞或组织。

 

  * HVJ-E:Hemagglutinating Virus of Japan Envelope。

  ** 现已有200多篇文献使用该试剂盒,如需样本案例,请向我司索取。

 

 

优点、特色

 

      目前市面上独一无二的转染试剂盒,可用于细胞、组织和活体动物。可用于:

 

siRNA
少量 siRNA 也可高效发挥敲除作用,无需化学修饰siRNA,高表达量。

DNA
无论序列长短、线性或环状均可

Oligonucleotides
DNA、RNA

蛋白
保持酶和抗体的功能性与特异性

体内转染 !!
大量操作和文献引用证明HVJ-E载体可直接将目标分子转移到活体动物产生作用。

高通量筛选
可同时转染多种分子

1. 运用范围广
GenomONE HVJ-E 载体试剂盒可将多种分子(质粒 DNA、siRNA、寡核苷酸、蛋白、抗体等)转进培养细胞(贴壁和非贴壁细胞)和组织。也可用于敏感原代细胞和 活体动物转染。每种领域的GenomONE®-Neo EX 运用情况,均有大量文献报道。(如需文献列表,请向我司索取)

2. 安全性
与阳离子脂质体不同,GenomONE®-Neo EX 是通过膜融合作用将分子导入细胞,而脂质体转染的内吞作用可能造成转染分子经溶酶体作用而降解。GenomONE®-Neo EX 内含完全灭活的HVJ病毒颗粒,其具有侵染力而无潜在增殖能力,使用非常安全,无需特殊的防护措施    

3. 方便简单
GenomONE 即开即用,试剂盒内包含了操作中主要使用的 HVJ-E 冻干粉和各种辅助试剂  
   

 

案例、应用

 

  GenomONE®-Neo EX 和传统的脂质体转染和电穿孔法相比,有更高的转染效率和更低的细胞毒性,可更有效的发挥 siRNA 的 knock-down 作用。

 

in vivo

 

大鼠颌下腺逆行注射siRNA

  Ca2+-dependent Cl channel protein(rCLCA)表达的特异性抑制。

 

免疫染色

 

GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents      GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

   non-injection side                 rCLCA siRNA-injection side

 

  rCLCA siRNA(2 nmol)和GenomONE-Neo(2AU)混合后,以逆行注射的方式注入大鼠颌下腺。四十八小时后,用免疫染色检验 siRNA 注射对氯离子通道蛋白表达的抑制作用。
  ST:纹状管,G:颗粒曲管,A:腺泡

  【相关文献】

  K. Ishibashi et al., J. Dent. Res., 85(12), 1101-1105 (2006).

 

in vitro

 

【难转染细胞——U937 细胞 RNAi】

 

  总所周知,用脂质体和电转的方法将 siRNA 转到 U937 人单核细胞白血病细胞中非常困难,但我们通过实验证明,siRNA 与 GenomONE-Neo 结合后转染该细胞,其 knock-down 效率可达85%以上。

 

♦ U937 细胞经 siRNA 转染72小时后收集,用 RT-PCR 和 WB 分别检测 mRNA 和蛋白量的变化情况。


Real-time PCR             Western blotting

GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents      GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

 

  左图:转染 Cathepsin G 的特异性 siRNA 后,其对应的 mRNA 减少到14%

  右图:转染 Cathepsin G 的特异性 siRNA 后,其蛋白水平减少到15%

 

 【相关文献】 
  Y. Tsuchiya et al, Free Radical Biology & Medicine, 43, 1604-1615 (2007).

 

试剂盒组成

 

 

Cat.  #

Freeze-dried

HVJ-E

(inactivated HVJ)
0.26 mL/vial
(when reconstituted)

Reagent A

(enhancer for incorporation)
0.5 mL/vial

Reagent B

(reagent for
incorporation)
0.3 mL/vial

Reagent C

(enhancer for introduction)
1.0 mL/vial

Buffer

(for suspension
and dilution)
6.5 mL/vial

385-18731

1 vial

1 vial

1 vial

1 vial

1 vial

381-18733

4 vials

1 vial

1  vial

1  vial

1 vial

385-18736

40 vials

10 vials

10 vials

10 vials

10 vials

 

 

 

 

【相关资料】

 

GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

 

同系列相产品

 

 

产品编号 产品名称 规格 应用
 388-18721 GenomONE® -CF EX 

GenomONE® -CF EX 细胞融合试剂

 

 1 set  细胞融合试剂

 

384-18723 4 sets
382-18724 16 sets

 

参考文献

GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents

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[1]

Different effect of resveratrol to induction of   apoptosis depending on the type of human cancer cells.

Takashina M, Inoue S, Tomihara K, Tomita K, Hattori K, Zhao QL, Suzuki T,   Noguchi M, Ohashi W, Hattori Y.Int J Oncol. 2017 Mar;50(3):787-797. PMID: 28197625

[2]

Protein Transfection ( in vitro / in vivo ) / Peptide   Transfection ( in vitro )

Directly reprogramming fibroblasts into adipogenic,   neurogenic and hepatogenic differentiation lineages by defined factors.Wu W, Jin YQ, Gao Z.Exp Ther Med. 2017 Jun;13(6):2685-2690. PMID: 28587331

[3]

siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA   Transfection ( in vitro )

Impaired Dual-Specificity Protein Phosphatase DUSP4   Reduces Corticosteroid Sensitivity.Kobayashi Y, Ito K, Kanda A, Tomoda K, Mercado N, Barnes PJ.Mol Pharmacol. 2017 May;91(5):475-481. PMID: 28283554

[4]

siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA   Transfection ( in vitro )

AIM2 Inflammasome Is Critical for Influenza-Induced   Lung Injury and Mortality Zhang H, Luo J, Alcorn JF, Chen K, Fan S, Pilewski J, Liu A, Chen W, Kolls   JK, Wang J. J Immunol. 2017 Jun 1;198(11):4383-4393. PMID: 28424239

[5]

siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA   Transfection ( in vitro )

Human monocytes downregulate innate response receptors   following exposure to the microbial metabolite n-butyrate
Lasitschka F, Giese T, Paparella M, Kurzhals SR, Wabnitz G, Jacob K, Gras J,   Bode KA, Heninger AK, Sziskzai T, Samstag Y, Leszinski C, Jocher B, Al-Saeedi   M, Meuer SC, Schroder-Braunstein J.Immun Inflamm Dis. 2017 Jul 6. PMID: 
28681454

[6]

siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA   Transfection ( in vitro )

Inhibition of TrkB limits development of the zebra   finch song system.
Beach LQ, Tang YP, Kerver H, Wade J. Brain Res. 2016 Jul 1;1642:467-477. PMID: 
27086969

[7]

Plasmid DNA Transfection ( in vivo / in vitro )

High-efficiency generation of induced pluripotent   mesenchymal stem cells from human dermal fibroblasts using recombinant   proteins Chen F, Zhang G, Yu L, Feng Y, Li X, Zhang Z, Wang Y, Sun D, Pradhan S. Stem Cell Res Ther. 2016 Jul 30;7(1):99. PMID: 27473118

[8]

siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA   Transfection ( in vitro )

Netrin-1 prevents the development of cardiac hypertrophy and heart failure.
Wang N, Cao Y, Zhu Y. Mol Med Rep. 2016 Mar;13(3):2175-81. PMID: 
26783193


请参考附件:

 

GenomONE_参考文献_体外实验.pdf

GenomONE_参考文献_体内实验.pdf

 


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
385-18731 GenomONE® –Neo EX (FD)
GenomONE® –Neo EX (FD)转染试剂套装
1 set
381-18733 GenomONE® –Neo EX (FD)
GenomONE® –Neo EX (FD)转染试剂套装
4 sets
389-18734 GenomONE® –Neo EX (FD)
GenomONE® –Neo EX (FD)转染试剂套装
16 sets
385-18736 GenomONE® –Neo EX (FD)
GenomONE® –Neo EX (FD)转染试剂套装
40 sets

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GenomONE ® -GX EX 向免疫细胞导入质粒DNA

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GenomONE ®GX EX
向免疫细胞导入质粒DNA

  • 产品特性
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  • 参考文献

GenomONE®-GX EXGenomONE ® -GX EX                               向免疫细胞导入质粒DNA

向免疫细胞导入质粒DNA

GenomONE®-GX EX是以基因表达为目的使用的转染试剂。本试剂盒由形成基因导入载体所需的中性脂质物质、辅助试剂和通过直接向细胞添加来提高基因表达的Enhancer组成。

 

基因导入载体仅在一支试管内即可制备,仅需混合操作即可在10 min以内制备完成。对于是否使用Enhancer,基因导入载体细胞的添加量等问题,FUJIFILM Wako准备了各细胞转染的适用条件的实验方案供您参考。

 


◆特点


● HVJ-E与中性脂质物质组合的基因导入载体

● 操作简便,10 min内完成制备

● 配套Enhancer可增强基因表达

● 通过配合KALA肽使用可以提高基因表达

 


◆Enhancer及KALA肽提高基因表达的机制

GenomONE ® -GX EX                               向免疫细胞导入质粒DNA

Enhancer通过抑制由外源DNA引起的自然免疫信号,有望于改善受自然免疫信号抑制的胞内基因表达。

KALA肽可以通过作用于内体并增加释放到细胞质中的基因数量,从而提高基因表达。

※KALA肽需另行购买。

 


◆应用数据


与其他公司产品比较基因表达


使用GenomONE®-GX EXGenomONE®-GX EX+KALA肽以及其他公司产品L,将CAG启动子下游含有Turbo-GFP基因的质粒DNA导入各细胞中,两天后用荧光显微镜观察。

GenomONE ® -GX EX                               向免疫细胞导入质粒DNA

GenomONE®-GX EX与KALA肽配合使用,可在大部分细胞中发现基因表达的提高。总体获得了比其他公司产品L更高的基因表达结果。

◆产品列表

产品编号

制造商编号

产品名称

包装

389-18751

GX001

GenomONE®GX EX
GenomONE®GX EX 转染试剂套装

1 set

385-18753

GX004

4 set

383-18754

GX016

16 set

389-18756

GX040

40 set

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。


参考文献

GenomONE ® -GX EX                               向免疫细胞导入质粒DNA

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ScreenFect™ UP-293 用于重组蛋白大量表达系统的DNA转染试剂

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ScreenFect™ UP-293
用于重组蛋白大量表达系统的DNA转染试剂

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

用于重组蛋白大量表达系统的DNA转染试剂ScreenFect™ UP-293                              用于重组蛋白大量表达系统的DNA转染试剂

ScreenFect™ UP-293

本产品是适用于FreeStyle293 Expression System和Expi293 Expression System的转染试剂,适用于大量表达重组抗体和蛋白。转染后添加ScreenFect™ UP-293 Booster,可大幅度提高细胞中蛋白的表达量。



◆特点


● 性价比高

● 高重组蛋白表达量


◆试剂盒内容

组成试剂

100 mL用

1 L用

ScreenFect™ UP-293 Transfection Reagent
    ScreenFect™ UP-293转染试剂

200 μL×1瓶

1 mL×2瓶

ScreenFect™ UP-293 Dilution Buffer
    ScreenFect™ UP-293稀释缓冲液

6.7 mL×1瓶

67 mL×1瓶

ScreenFect™ UP-293 Booster
    ScreenFect™ UP-293增强剂

500 μL×1瓶

5 mL×1瓶

本产品仅含转染试剂,不含细胞及培养基。



◆所需其他试剂


FreeStyle293 Expression System

细胞

FreeStyle293-F Cells

培养基

FreeStyle293 Expression Medium

稀释缓冲液

Opti-MEMI Reduced Serum Medium

Expi293 Expression System

细胞

Expi293F Cells

培养基

Expi293 Expression Medium

稀释缓冲液

不需要


*用ScreenFect™ UP-293附带的Dilution Buffer稀释。



◆数据

■荧光素酶表达量的比较


ScreenFect™ UP-293                              用于重组蛋白大量表达系统的DNA转染试剂

用各种转染试剂向FreeStyle293-F细胞和Expi293F细胞中导入分泌型Luc表达载体。

培养规模为30 mL,96小时后收集培养上清,然后用荧光素酶检测法检测发光强度。


FreeStyle293-F细胞:与其他公司的A产品相比,荧光素酶表达量较高。

Expi293F细胞:与其他公司的B产品相比,的荧光素酶表达量相近。


※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。


产品列表

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
294-80201 ScreenFect UP-293 100 mL用 基因研究用
290-80203 ScreenFect UP-293 1 L用 基因研究用

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DNA & siRNA 转染试剂 ScreenFect™ A plus

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DNA & siRNA 转染试剂
ScreenFect™ A plus

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

ScreenFect A+DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

DNA & siRNA 转染试剂!

◆原理

  ScreenFect ™A+是通过点击化学(Click Chemistry)方法筛选出的阳离子脂质体转染试剂。适用于各种真核细胞,也可直接添加到含有抗生素或者血清的培养基中。使用 ScreenFect ™A+转染试剂可将 DNA 和 siRNA 转入常见实验室培养的细胞株(HeLa、HepG2、MDCK 等)、干细胞(小鼠ES细胞等),血液细胞(巨噬细胞、THP-1、RAW264 等),小胶质细胞和原代细胞。由于低细胞毒性,不含有任何有毒有害成分,转染后无需更换培养基。


※1 Biomaterials. 2012 Nov; 33(32):8160-6. 2012

◆优点、特色


 DNA 用量少。

 高效一步转染法。

 转染效率高&细胞毒性低。

● 使用成本低

◆案例、应用


ScreenFect ™ A+ 转染性能(流式细胞仪检测)

DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

用于不同细胞的高效脂质体转染试剂!!

DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

用于不同细胞的高效脂质体转染法!!


DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

适用于难转染的悬浮细胞!!

一步法和两步法实验流程的比较


产品名称

ScreenFect ™ A plus

A厂家新产品 (+试剂)

A厂家产品

推荐的实验流程

一步法

两步法

实验用时

2天

3天

所需DNA量

细胞数目调整

灵活
(细胞准备仅在转染之前)

不灵活
(取决于细胞预培养条件)

胰酶消化

需要
(仅在转染之前)

需要
(在细胞预培养之前)

适于高通量筛选

+++++

+

培养基的更换

取决于细胞系

DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

一步法比两步法节省24小时!

DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

ScreenA+.pdf

高性价比的高性能基因导入试剂

ScreenFect  通信

基因导入人 iPS 细胞实验数据


  介绍使用 ScreenFect ™A plus 将基因导入人iPS细胞的实验结果和操作步骤。本文记载了作为 iPS 细胞支架使用的 Matrigel 孔板包被方法、配制含有 Y-27632 的细胞悬浮液的操作步骤以及最优的试剂比例,供您参考。

 


◆导入人iPS细胞(201B7株)的转染操作实例


  在这里,我们将介绍一些使用 StemSure® hPSC 培养基Δ(产品编号:197-17571)的操作实例。该操作步骤的完整版和使用 mTeSR1 培养基的操作步骤,请查看 FUJIFILM Wako 公司的官网。http://db.screenfect.jp/ja/documents/list/protocol

 


<转染试剂的配制>

将 2.0 μL 的 ScreenFect ™ A plus reagent、4.0 μg 的质粒 DNA 加入到 160 μL 的 Opti-MEM 中制成 DNA-lipid complex。

 


< Matrigel 包被孔板>

1.  4°C下溶解 Matrigel hESC-Qualified Matrix 。为防止发生凝固,请避免在室温下溶解。

2.  用 25 mL 冷却的 D-MEM/Ham's F-12 稀释 300μL 的 Matrigel。

3.  稀释后的 Matrigel 溶液按照 1 mL/well 加入到 12 孔板中。

4.  在室温下孵育1小时以上。

 


<细胞悬液的配制>

1.  将 StemSure® hPSC 培养基Δ在 2-8℃ 下放置数小时或过夜缓慢融解。不要在 37° C下解冻,并在一周内使用。

2.  将 bFGF(产品编号:064-05381,068-05384)按照终浓度 35-100ng/mL 添加到融解后的 StemSure® hPSC 培养基△中,配制成完全培养基(以下称为 sshPSC 培养基)。

3.  使用前将 sshPSC 培养基恢复至室温。不要使用温水浴。

4.  将 Y-27632 按照终浓度 10 μmol/L 添加到 sshPSC 培养基中(以下称为 ROCKi+培养基)。

5.  去除 hiPS 细胞培养孔板中的培养基,用 PBS(-)清洗细胞一次。

*请在细胞汇片达到80%且处于对数增殖期时进行细胞转染。

6.  除去 PBS(-),添加 Stempro Accutase。

7.  在 37°C,5%CO培养箱中静置5分钟。

8.  用 1 mL 微量移液枪添加 ROCKi+培养基,将细胞从培养板上分离并吹散成单细胞。

9.  转移至 15 mL离心管中。

10. 室温下 1000 rpm(约170×g)离心3分钟。

11. 去除上清,用ROCKi+培养基重悬细胞。

12. 计算活细胞的数量。

13. 用 ROCKi+培养基将细胞浓度调整至 5×10cells/mL。

 


<转染>

添加 1 mL 配制好的 DNA-lipid complex 到细胞悬液中,使用移液器充分混匀,并接种在 12 孔板中。

※要点

接种 24 小时后请更换培养基。此时的培养基不需要含有 Y-27632。

 


◆实验数据


  通过反向转染(1-STEP)将 GFP 融合基因导入 hiPS 细胞(201B7株),并通过荧光显微镜比较基因的导入效率。

 


<StemSure® hPSC 培养基Δ的使用>

DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

细胞数:5×105 cells/well

质粒 DNA 量:4 μg/assay

转染试剂混合比例:DNA 量(μg):ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 0.5

容器:12 孔板

备注:用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。

 


<mTeSR1 培养基的使用>

DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

细胞数:5 x 10cells/well

质粒 DNA 量:1 μg/assay

转染试剂混合比例:DNA数量(μg):ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 2

容器:12 孔板

备注:用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。

 


◆使用上的注意


● 建议在单细胞状态下进行人iPS细胞的基因导入。

● 建议基因导入时的细胞数约为 5×10cells/well。

● 当质粒 DNA 量多时,导入基因的表达量高会引起细胞死亡。



◆产品列表


产品编号

产品名称

规格

包装

293-77101

ScreenFect ™ A plus

基因研究用

0.2 mL

299-77103

1 mL

297-77104

1 mL×5

[1]

Diefenbacher, Markus E., et al. "The LIM Domain Protein nTRIP6 Recruits the Mediator Complex to AP-1-Regulated Promoters." PLoS ONE 9.5 (2014): e97549.


[2]

Freise, Christian, and Uwe Querfeld. "Inhibition of vascular calcification by block of intermediate conductance calcium-activated potassium channels with TRAM-34." Pharmacological Research (2014).


[3]

Hagiwara, Akane, et al. "Luteinizing Hormone-Induced Expression of Ptger4b, a Prostaglandin E2 Receptor Indispensable for Ovulation of the Medaka Oryzias latipes, Is Regulated by a Genomic Mechanism Involving Nuclear Progestin Receptor."


[4]

Peng, Yanyan, Ruidan Xu, and Xiaofeng Zheng. "HSCARG Negatively Regulates the Cellular Antiviral RIG-I Like Receptor Signaling Pathway by Inhibiting TRAF3 Ubiquitination via Recruiting OTUB1." PLoS pathogens 10.4 (2014): e1004041. (3)


[5]

Wakimoto, Hiroaki, et al. "Targetable signaling pathway mutations are associated with malignant phenotype in IDH-mutant gliomas." Clinical Cancer Research (2014). (2)


[6]

Fischer, Simon, et al. "Breaking limitations of complex culture media: Functional non-viral miRNA delivery into pharmaceutical production cell lines." Journal of biotechnology 168.4 (2013): 589-600.


[7]

Bai, Dongmei, et al. "Regulation of the HDM2-p53 pathway by ribosomal protein L6 in response to ribosomal stress." Nucleic acids research 42.3 (2014): 1799-1811.


[8]

Liu, Xing, et al. "Isocitrate dehydrogenase 2 mutation is a frequent event in osteosarcoma detected by a multi‐specific monoclonal antibody MsMab‐1." Cancer medicine 2.6 (2013): 803-814.


产品列表

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
293-77101 ScreenFect™ A plus 0.2 mL
299-77103 ScreenFect™ A plus 1 mL
297-77104 ScreenFect™ A plus 5 x 1 mL

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ScreenFect™ siRNA

ScreenFect™ siRNA

siRNA Transfection Reagent

◆原理

ScreenFect ™ siRNA 是点击化学※ 筛选实验选出的阳离子脂质体的新型转染试剂,适用于转染多种真核细胞(HeLa,HEK293,MEF cell 等),可直接添加于血清培养基。由于低细胞毒性不含任何有毒有害成分,转染后无须更换培养基。

 

◆特点•优势

   高基因沉默效率 & 极低细胞毒性 & siRNA 使用量低至 1 nM

   提供能优化 siRNA 转染的缓冲液

    转染后无须更换培养基

    能与血清兼容

    可用于高通量筛选

    保质期长达 12 个月

 

 

◆产品性能

ScreenFect™ siRNA

基因沉默效率                                                      细胞毒性

 

ScreenFect™ siRNA

ScreenFect™ siRNA

 

细胞系:小鼠胚胎成纤维细胞

细胞培养板:24 孔

转染靶位点:LRP6 

 

 细胞株:HEK293 细胞

细胞培养板:96 孔

染色方法:赫斯特染色

ScreenFectTM siRNA 导入条件   

siRNA:1 pmol

转染试剂:0.1 μL

悬浮细胞:420 μL

 

 

◆案例•应用 

 

ScreenFect™ siRNA


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
299-75001 ScreenFect ™ siRNA Transfection Reagent 0.2 mL
295-75003 ScreenFect ™ siRNA Transfection Reagent 1 mL
293-75004 ScreenFect ™ siRNA Transfection Reagent 5 × 1 mL

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ProteoCarry <Protein Transfection Reagent> 无需预孵育!导入细胞质的蛋白转染试剂

ProteoCarry <Protein Transfection Reagent>

无需预孵育!导入细胞质的蛋白转染试剂

ProteoCarry <Protein Transfection Reagent> 无需预孵育!导入细胞质的蛋白转染试剂

无需预孵育!导入细胞质的蛋白转染试剂                

ProteoCarry <Protein Transfection Reagent>

本产品是将蛋白以及葡聚糖等生物大分子导入细胞内,尤其是导入细胞质的试剂。传统的蛋白转染试剂存在蛋白滞留在内体或溶酶体中的问题,但是由于本产品可以高效地将蛋白运送至细胞质,可以广泛地适用于在评价导入蛋白的细胞内功能和抗体导入引起的功能抑制诱导等的实验。另外与传统产品不同的是,本品无需与蛋白进行预孵育,所以不会形成复合体,低限度地限制其对蛋白功能的影响。

※本产品仅供研究,研究以外请勿使用。

 

◆蛋白转染试剂及其问题

 

蛋白转染试剂(Proteofection试剂)是将重组蛋白和抗体直接导入细胞的工具。与将质粒导入以诱导表达目的蛋白的方法相比,可以更迅速地导入目的蛋白,因而受到了广泛地关注。

虽然已经开发了许多基于肽、阳离子的脂质或聚合物的蛋白转染试剂,但它们都是与蛋白形成复合物后,通过胞吞作用摄入细胞内,破坏内体膜将其运送至细胞质。然而,现有的大部分试剂内体膜的破坏活性低,并且从内体逃脱不足,导入的蛋白大部分都转移至溶酶体降解系统。本产品是一种新型肽蛋白转染试剂,克服了传统的蛋白转染试剂的缺点,通过强有力的内体膜选择性破坏活性,高效地向细胞质运送蛋白,使转导的蛋白在细胞内发挥活性。另外,与传统的蛋白转染试剂不同,本品无需与蛋白的复合物,不仅仅是蛋白,还可以向细胞质导入生物大分子(葡聚糖等)。

 

ProteoCarry <Protein Transfection Reagent> 无需预孵育!导入细胞质的蛋白转染试剂

 

图1. 细胞导入原理的比较

图 2 是导入荧光标记 IgG 的案例。不添加转染试剂时,以内体/溶酶体的染色为主,从细胞质中无法获得荧光信号,与之相对的,可以观察到在本产品案例中,内体、细胞质被大面积染色。(详情请参照应用实例)

 

ProteoCarry <Protein Transfection Reagent> 无需预孵育!导入细胞质的蛋白转染试剂

 

图 2. 向 HeLa 细胞导入荧光标记 IgG 的比较

 

 

◆特点

 

● 基于肽特性的蛋白转染试剂,显示出高度水溶性。

● 优异的内体膜破坏活性,与传统方法相比显示出高细胞质传达性。

● 无需与导入物质进行预孵育,可以简便且迅速地转染。

● 由于不会与蛋白形成复合物,所以需要添加浓度较高的蛋白,但是可以低限度地抑制对蛋白功能的影响。

● 只需要1小时的处理就可以充分地转染至细胞质。

● 有无血清(<10% FBS)不会影响导入效率,可以根据想要使用的细胞设计实验。

● 已有向细胞质导入各种蛋白及生物大分子的应用实例。

● 例:IgG 抗体、功能性蛋白(Cre recombinase, Saponin)、多糖(葡聚糖)

● 推荐使用浓度几乎没有细胞毒性。

 

◆使用方法概述

ProteoCarry <Protein Transfection Reagent> 无需预孵育!导入细胞质的蛋白转染试剂

 

1. 向新鲜的培养基(无血清培养基,10% 以下含 FBS 培养基或 PBS)添加本产品以及想要导入的蛋白。(配制转染混合液)。

1. ※无需预孵育

2. 用 PBS 清洗 2 次细胞(80% 以下的融合状态)后,向细胞添加转染混合液。

3. 在转染混合液中培养细胞(~1 h)

4. 用 PBS 清洗 2 次细胞后,添加新鲜的培养基。

5. 实现各项应用。

◆试剂盒组成

 

● ProteoCarry(4 mg)

● FITC-dextran(2 mg,阳性对照用)

 

 

实验次数的预测

 

孔板的尺寸

ProteoCarry

FITC-dextran

6 well

14 assays

5 assays

12 well

28 assays

10 assays

24 well

56 assays

20 assays

48 well

140 assays

50 assays

96 well

280 assays

100 assays

 

◆有导入数据的细胞

 

HeLa, SW280, COS7, NIH3T3, HUVEC

 

 

参考导入量

 

导入物

推荐培养基的终浓度

抗体

50~250 μg/mL

蛋白

Saponin

1~10 μg/mL

Cre recombinase

10~100 μg/mL

FITC-dextran
(阳性对照)

200 μg/mL

 

※导入效率根据细胞类型,细胞数量和蛋白类型各种因素改变。以上数据仅供参考,建议每次实验都要优化数据。

 

◆应用实例

 

1. 向细胞内导入FITC-dextran

 

向 HeLa 细胞导入 FITC-Dextran(培养基的终浓度为 200 μg/mL),仅向细胞添加 FITC-Dextran 时,(Reagent(-))观察到点状的荧光信号,细胞质中几乎没有观察到信号;相反,使用本产品时扩散到了整个细胞质。

 

ProteoCarry <Protein Transfection Reagent> 无需预孵育!导入细胞质的蛋白转染试剂

 

实验概要:

 

向 HeLa 细胞(80% confluent)添加 200 μg/mL FITC-dextran, 1×ProteoCarry in α-MEM,并培养 1 个小时。用 PBS 清洗细胞后,进行核染色(Hoechst)。

 

 

2. 向细胞内导入荧光标记 IgG

 

向 HeLa 细胞导入荧光标记 IgG 抗体(培养基终浓度为 250 μg/mL),仅有抗体添加至细胞时,可以观察到胞吞作用自发性摄入点状的荧光信号,表明抗体停留在内体和溶酶体中。另一方面,使用本产品时,不仅能观察到点状的内体结构,还可以观察到它主要在细胞质中广泛扩散。

※用荧光信号观察细胞扩散时,与内体相比,由于细胞质的体积较大,信号会被稀释。细胞质信号的检测需要添加高浓度的荧光标记蛋白,在本数据中添加了250 μg/mL的荧光标记 IgG。

 

ProteoCarry <Protein Transfection Reagent> 无需预孵育!导入细胞质的蛋白转染试剂

 

实验概要:

 

向 HeLa 细胞(80% confluent)添加 250 μg/mL 荧光标记 IgG,1×ProteoCarry in α-MEM 并培养 1小时。用 PBS 清洗细胞后,进行核染色(Hoechst)。

 

 

3. 向细胞内导入 Cre recombinase

 

将设计为 Cre recombinase 不存在时表达 DsRed,只有在 Cre recombinase 存在时发生重组表达 GFP 的质粒向 HeLa 细胞导入基因。相对于导入第二天就表达 DsRed 的 HeLa 细胞,使用本产品导入 Cre recombinase(培养基终浓度为 10 μM),依赖导入细胞内的 Cre recombinase 表达 GFP,本产品在维持 Cre recombinase 的功能下将其导入了细胞。

 

ProteoCarry <Protein Transfection Reagent> 无需预孵育!导入细胞质的蛋白转染试剂

 

实验概要:

 

向 HeLa 细胞转染质粒的第二天,向 HeLa 细胞添加 10 μM Cre recombinase,1×ProteoCarry in α-MEM,并培养 1 小时。用PBS清洗细胞后,用新的培养基再培养 24 小时。

 

◆保存

 

● 运输:室温

● 保存:-20℃


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
FDV-0015 ProteoCarry
ProteoCarry <蛋白质转染试剂>
1 set

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GenomONE ®- GE EX Cas9 蛋白/gRNA 转染试剂

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GenomONE ®GE EX
Cas9 蛋白/gRNA 转染试剂

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

Cas9 蛋白/gRNA 转染试剂GenomONE ®- GE EX                              Cas9 蛋白/gRNA 转染试剂

GenomONE ®-GE EX


GenomONE®GE EX是将Cas9 蛋白以及向导RNA(gRNA)导入细胞的转染试剂。简单地操作即可将Cas9 蛋白和gRNA导入细胞,无需电穿孔类似的特别装置。即使是转染十分困难的免疫细胞,也可以实现Cas9 蛋白以及gRNA的高效导入。

◆特点


● 导入困难的免疫细胞亦可导入Cas9 蛋白以及gRNA

● 只需混合试剂和离心两项简单操作,即可短时间制备导入载体

● 配合Donor DNA可实现敲入

● 可在生物安全等级1级的实验室中使用

◆原理


GenomONE®GE EX是利用仙台病毒的包膜(HVJ-E)拥有的膜融合能力的转染试剂。


GenomONE ®- GE EX                              Cas9 蛋白/gRNA 转染试剂

◆应用实例


 向小鼠原代T细胞导入Cas9蛋白以及gRNA


GenomONE ®- GE EX                              Cas9 蛋白/gRNA 转染试剂

T细胞是从BALB/c小鼠提取的脾细胞用PMA/ionomycin刺激一天后,过筛分离。使用GenomONE®GE EX,其他公司产品A以及其他公司产品B将Cas9蛋白以及Cyclophilin B靶gRNA导入细胞。

两天后,用T7 Endonuclease I assay验证基因编辑效率。

■ 导入Cas9蛋白,gRNA,供体DNA(敲入)

GenomONE ®- GE EX                              Cas9 蛋白/gRNA 转染试剂

使用GenomONE®GE EX 向HeLa细胞导入Cas9蛋白,gRNA和含Bam HI位点的Donor DNA(ssODN)。

2天后,对靶基因片段进行PCR扩增,以琼脂糖电泳分析以限制性内切酶Bam HI消化的片段。

◆可使用次数


包装

可使用次数(Wells)

6 wells

24 wells

48 wells

96 wells

1 set

16

65

130

325

4 set

65

260

520

1,300

16 set

260

1,040

2,080

5,200

◆产品列表


产品编号

厂商编号

产品名称

包装

382-18741

GG001

GenomONE®GE EX

1 set

388-18743

GG004

4 set

386-18744

GG016

16 set

◆相关产品

T7 Endonuclease Reaction Mix


产品编号

产品名称

制造商

包装

313-08801

T7 Endonuclease I reaction Mix

NIPPON GENE

50 μL

GenomONE® 系列

产品编号

厂商编号

产品名称

用途

包装

386-18761

GS001

GenomONE®Si EX

in vitro中siRNA/miRNA
转染试剂盒

1 set

382-18763

GS004

4 set

380-18764

GS016

16 set

386-18766

GS040

40 set

389-18751

GX001

GenomONE®GX EX

in vitro中质粒DNA转染试剂盒

1 set

385-18753

GX004

4 set

383-18754

GX016

16 set

389-18756

GX040

40 set

385-18731

GN01F

GenomONE®Neo(FD)EX

in vivo 中质粒DNA、

siRNA/miRNA 、蛋白转染试剂盒

1 set

381-18733

GN04F

4 set

389-18734

GN16F

16 set

385-18736

GN40F

40 set

388-18721

CF001

GenomONE®CF EX

细胞融合试剂盒(杂交瘤的制备,核转移至脱核未受精卵)

1 set

384-18723

CF004

4 set

382-18724

CF016

16 set

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。


参考文献

GenomONE ®- GE EX                              Cas9 蛋白/gRNA 转染试剂

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GenomONE®GE EX是将Cas9 蛋白以及向导RNA(gRNA)导入细胞的转染试剂。简单地操作即可将Cas9 蛋白和gRNA导入细胞,无需电穿孔类似的特别装置。即使是转染十分困难的免疫细胞,也可以实现Cas9 蛋白以及gRNA的高效导入。

◆特点


● 导入困难的免疫细胞亦可导入Cas9 蛋白以及gRNA

● 只需混合试剂和离心两项简单操作,即可短时间制备导入载体

● 配合Donor DNA可实现敲入

● 可在生物安全等级1级的实验室中使用

◆原理


GenomONE®GE EX是利用仙台病毒的包膜(HVJ-E)拥有的膜融合能力的转染试剂。


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◆应用实例


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T细胞是从BALB/c小鼠提取的脾细胞用PMA/ionomycin刺激一天后,过筛分离。使用GenomONE®GE EX,其他公司产品A以及其他公司产品B将Cas9蛋白以及Cyclophilin B靶gRNA导入细胞。

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■ 导入Cas9蛋白,gRNA,供体DNA(敲入)

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使用GenomONE®GE EX 向HeLa细胞导入Cas9蛋白,gRNA和含Bam HI位点的Donor DNA(ssODN)。

2天后,对靶基因片段进行PCR扩增,以琼脂糖电泳分析以限制性内切酶Bam HI消化的片段。

◆可使用次数


包装

可使用次数(Wells)

6 wells

24 wells

48 wells

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1 set

16

65

130

325

4 set

65

260

520

1,300

16 set

260

1,040

2,080

5,200

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产品编号

厂商编号

产品名称

包装

382-18741

GG001

GenomONE®GE EX

1 set

388-18743

GG004

4 set

386-18744

GG016

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313-08801

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产品名称

用途

包装

386-18761

GS001

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转染试剂盒

1 set

382-18763

GS004

4 set

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385-18753

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GN04F

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389-18734

GN16F

16 set

385-18736

GN40F

40 set

388-18721

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GenomONE®CF EX

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1 set

384-18723

CF004

4 set

382-18724

CF016

16 set

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参考文献

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3. 无论何种原因,使用本网站时给用户或第三方造成的任何不利或损害,本公司概不负责。此外,对于用户与其他用户或第三方之间因本网站发生的任何交易、通讯

3. 纠纷,本公司概不负责。

4. 本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗,仅可用于科研等非医疗目的。如任何用户将本网站提供的产品和服务用临床诊断或治

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