描述

DH10B Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

 

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货号	产品名称	规格	价格（元）
MF2314-1000UL	DH10B Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞	10×100μl	280
MF2314-5000UL	DH10B Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞	50×100μl	1280

产品组分：

组分编号	组分名称	货号（规格）
		MF2314-1000UL	MF2314-5000UL
MF2314-A	DH10B Competent Cell	10×100μl	50×100μl
MF2314-B	Control Plasmid puC19, 10 pg/µl	10μl	10μl

 

菌株描述

DH10B菌株来源于MC1061菌株，mcrA基因标记的加入、以及mcrBC和mrr的敲除使其适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。因此，原核和真核来源的基因组DNA都能有效克隆进入DH10B。质粒拯救在DH10B中进行更为有效。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。φ80lacZ∆M15 marker的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。

DH10B菌株基因型：F–mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK λ–rpsL(StrR) nupG

产品描述

本品是DH10B菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   转化高浓度质粒或高效连接产物需相应减少最终涂板的菌量。

4）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

5）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

6）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。

7）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1.1    从-80℃取出DH10B感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。

1.2    向融化的感受态细胞中加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹混匀（避免用移液枪上下吹打），冰浴静置25min。

1.3    42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

1.4    向每个离心管中加入700 μl无菌培养基（2YT或LB，不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

1.5    复苏完成后，5000rpm离心1min收集菌体，留100μl左右上清轻轻吹打重悬菌体并涂布到无菌固体培养基（2YT或LB，含相应抗生素）上。

1.6    将平板正置于室温（或37℃）直至液体被吸收，之后，37℃培养箱内倒置培养过夜。如果进行蓝白斑筛选，至少培养13h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少，可通过离心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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