描述

Frozen-CC Yeast Transformation Kit for Pichia pastoris

酵母转化试剂盒（用于毕赤酵母）

产品信息

【温馨提示】：见我司金畔生物整理的酵母双杂交（Yeast two-hybrid assay）产品专题。

产品描述

本酵母转化试剂盒（Yeast Transformation Kit）是专门针对毕赤酵母开发的，提供了一种简单和有效的方法用于快速制备毕赤酵母感受态细胞，立即使用或冻存后使用皆可。毕赤酵母的转化效率根据菌株的类型和质粒整合入宿主染色体的效率有关。每个试剂盒足够做20次质粒的转化。

产品组分

保存与运输方法

保存：Carrier DNA置于-20ºC保存，其他4℃保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1. 第一次使用Carrier DNA，需要将装Carrier DNA的整个管子置于沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，之后放在-20ºC储存备用。下次使用时需在冰上解冻Carrier DNA。
2. 酵母转化整个过程请无菌操作。
3. 本品适用于毕赤酵母的转化。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 酵母感受态细胞的制备

1. 1. 取-80℃保存的甘油菌在YPD固体培养基上划线，30℃培养2-4天以活化菌种。
   2. 挑取酵母单菌落接种到10ml YPD液体培养基，30℃培养过夜。
   3. 第二天按1%的接种量将培养物转接到含100ml YPD液体培养基的三角瓶中继续培养，直至OD600达到0.6-1.0范围。【每10ml菌液用于一次转化】。
   4. 3000rpm离心3min收集菌体沉淀。
   5. 加入5ml制备液重悬菌体，3000rpm离心3min收集菌体沉淀。
   6. 加入0.2ml制备液重悬菌体，转移到无菌的1.5ml离心管，可直接用于转化实验或冻存备用。
   7. 按照缓慢冷冻的方法：①将感受态放入程序降温盒内，之后放到-80℃保存；②将感受态用多层纸包好放入泡沫盒内，再放于-80℃保存。之后将感受态取出放到-80℃保存。感受态6个月稳定。

二、酵母转化

2.1取0.1~5μg的质粒DNA和10μl预变性的载体DNA加入到从-80℃取出未融化的感受态细胞，置于30℃水浴，每隔15s颠倒混匀，直至感受态细胞开始融化。

2.2从水浴锅取出，颠倒混匀直至感受完全融化。

2.3加入1.4ml转化液颠倒混匀，30℃水浴60min。

2.4 3000rpm离心3min，收集菌体沉淀，加入1ml重悬液重悬菌体。

2.5 3000rpm离心3min，收集菌体沉淀，加入0.1ml重悬液重悬菌体。将所有的菌体转移到相应的酵母培养平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，30℃培养3-5天直至平板出现菌落。

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