293-74801 MagCapture™ microRNA分离试剂盒系列 MagCapture™ microRNA Isolation Kit 系列

MagCapture™ microRNA 分离试剂盒系列

MagCapture™ microRNA分离试剂盒系列 MagCapture™ microRNA Isolation Kit 系列

 

  本公司提供可实现从 Ago 免疫沉淀到RNA纯化一系列更简便操作的「microRNA Isolation Kit」系列产品。通过使用该系列产品,可便利地从人或小鼠的细胞、组织中回收 Ago 蛋白质结合 microRNA 以及目标 mRNA。另外,从培养上清、血清、血浆中也可回收游离状态的 Ago 蛋白质结合 microRNA。回收后的 RNA 可用于定量PCR、微阵列芯片(Microarray)、新一代序列分析等各种应用。该系列产品扩充至有采用了磁珠的 MagCapture™ microRNA Isolation Kit 和采用硅珠的,共8种试剂盒。

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◆MagCapture™ microRNA Isolation Kit(磁珠型)

  该系列有抗人 Ago2 抗体(4G8)、抗鼠 Ago2 抗体(2D4)、抗 Ago1-4 抗体(1G3)包被磁珠的三种试剂盒以及含有可固定任意抗体的 Protein G 磁珠试剂盒,共计4款产品。这些试剂盒都采用磁珠,可更方便地进行重复性良好的免疫沉淀操作。在免疫沉淀后的纯化 RNA 步骤中,采用能获得高纯度 RNA 的离心柱法;此外,也可以采用含有抗 Ago 抗体包被磁珠的3种试剂盒的更简便的一步法。

试剂盒内容(例:Human Ago2, 10次用)

● Anti-Human Ago2 Magnetic Beads Solution——600 μL×1支

● Cell Lysis Solution——20 mL×1支

● Washing Solution for IP——40 mL×1支

● Elution Solution I for IP—— 500 μL×1支

● Elution Solution II for IP——500 μL×1

● Binding Solution for Spin Column——2 mL×1支

● Binding Enhancer for Spin Column——100 μL×1支

● Washing Solution I for Spin Column——3 mL×1支

● Washing Solution II for Spin Column—— 4 mL×1支

● Elution Solution for Spin Column——1 mL×1支

● Spin Column/Collection Tube——10支

◆概述图

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产品名称

使用抗体克隆号

适应物种

对应样本

回收RNA

IP B/F 分离

RNA提纯

MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Human Ago2

4G8

人、猴、狗

细胞/ 组织/血清/ 血浆

microRNA 和目标mRNA

磁力分离

离心柱法、

一步法

MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2

2D4

小鼠、大鼠、狗

MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Ago   1-4

1G3

人、猴、狗,
小鼠、大鼠

microRNA

MagCapture™ microRNA Isolation Kit,   Protein G

随意

参照抗体

细胞/组织

参照抗体

离心柱法

◆MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Human Ago2 实验案例(人)

从人细胞系中回收 microRNA

  用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法(银染色)确认通过本产品(MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Human Ago2)从人K562细胞(1×107 cells)中获得的 microRNA(图1)。结果表明,使用本产品可获得高纯度的 microRNA。此外,通过定量 PCR 法(miR-92a 量),与使用原产品 microRNA Isolation Kit,Human Ago2 所获得的 microRNA 量相比较可知(图2),本产品的离心柱法显示与原产品几乎一样的 microRNA 回收性能;另外,在一步法中显示出了比原产品更优秀的 microRNA 回收性能。

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图1. 银染色检测从人K562细胞纯化的 microRNA 图2. 人K562细胞中纯化 microRNA 回收量的比较

LaneM:标记

Lane1:合成RNA寡聚核苷酸(23base)1ng

Lane2:本品(Spin Column法)

Lane3:本品(One Step法)

从人血浆中回收结合游离 Ago 蛋白质的 microRNA

  通过定量 PCR 法比较使用本产品和原产品从 200 μL 正常人混合血浆中获取的microRNA 量。结果显示,本产品的离心柱法与原产品具有几乎一样的microRNA回收性能;另外,在一步法中microRNA 回收量比原产品多。(见图3)

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图3.人血浆中纯化 microRNA 回收量的比较

microRNA 的目标mRNA回收

  向 miR-122 低表达的肝癌细胞株 HepG2 细胞(5×105 cells)中导入人工合成的 miR-122 和调节用荧光素酶 siRNA(Luc siRNA),使用本产品和原产品获得配制的 Ago2 IP RNA 以及用 ISOGEN® 配制的 total RNA。通过定量PCR法比较各RNA种所含 miR-122 的量(图4)和其目标mRNA(目标基因中 Aldo A mRNA 的量用 GAPDH mRNA 的量补充)。(图5)。结果表明,与原产品一样,通过本产品获得的目标 mRNA中,Aldo A mRNA 和 miR-122一同被浓缩,由此可知使用本产品可以获得 microRNA 的目标 mRNA。另一方面,使用 ISOGEN® 获得的 total RNA 中,Aldo A mRNA 随着 miR-122 的增加而逐渐分解减少。

 

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图4.miR-122回收量的比较

 

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图5.目标mRNA回收量的比较

MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 实验案例(小鼠)

 

从小鼠细胞中回收microRNA

 

  用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(银染色)确认通过使用本产品(MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2)从小鼠P388D1细胞(2×107 cells)中获得的 microRNA。(图1)结果表明,使用本产品可获得高纯度的microRNA。此外,通过定量PCR法(miR-92a量),与使用原产品(microRNA Isolation Kit, Human Ago2)所获得的microRNA量相比较可知(图2),本产品的离心柱法显示与原产品几乎一样的microRNA回收性能;另外,在一步法中显示出了比原产品更优秀的microRNA回收性能。

 

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图1.银染色检测从小鼠P388D1细胞纯化的microRNA

LaneM:标记

Lane1:合成RNA寡聚核苷酸(23base)1ng

Lane2:本品(Spin Column法)

Lane3:本品(One Step法)

图2.小鼠P388D1细胞纯化microRNA回收量的比较

从大鼠血浆中回收游离Ago2蛋白质结合microRNA

  通过定量PCR法(miR-92a量)比较使用本产品和原产品从 200 μL大鼠血浆中获取的microRNA量。结果表明,本产品的离心柱法与原产品具有几乎一样的microRNA回收性能;另外,在一步法中microRNA回收量比原产品大。(图3)

 

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图3.人血浆中纯化microRNA回收量的比较

MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Ago 1-4 实验案例(人)

 

回收Ago1-4结合microRNA

 

  分别使用 Ago1, Ago2, Ago3, Ago4特异性抗体对HeLa细胞中各RNA片段免疫沉淀处理后,进行微阵列芯片(3D-Gene® ,东丽)分析。结果表明miR-22和miR-16多数被Ago2抗体吸收。另一方面,miR-1260b, miR-4286多数被Ago1, Ago3, Ago4吸收。(表1)

  基于此解析结果,验证使用本产品(MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Ago1-4),是否可回收原产品(microRNA Isolation Kit, Human Ago2)中被Ago1, Ago3, Ago4吸收较为困难的microRNA。

表1. 微阵列芯片分析结果

信号强度

信号比

Name

Ago1   IP

Ago2   IP

Ago3   IP

Ago4   IP

Ago2/Ago1

Ago2/Ago3

Ago2/Ago4

hsa-miR-22

3521.4

21696.5

3771.2

292.4

6.16

5.75

74.20

hsa-miR-16

6886.3

28527.2

5013.4

582.5

4.14

5.69

48.97

hsa-miR-1260b

2060.3

540.9

1270.6

1977.9

0.26

0.43

0.27

hsa-miR-4286

678.8

202.4

2019.2

471.2

0.30

0.10

0.43


MagCapture™ microRNA分离试剂盒系列 MagCapture™ microRNA Isolation Kit 系列

图1.从HeLa细胞中回收的各microRNA量的比较

从人和小鼠细胞株中回收microRNA

 

  通过定量PCR法(miR-92a量)比较使用本产品和原产品从人K562细胞(1×107 cells)和小鼠P388D1细胞(2×107 cells)中获取的microRNA量。结果表明,在同等条件下,使用本产品可获得更多的microRNA。(图2、图3)

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 图2.人K562细胞中纯化microRNA回收量的比较                   图3.小鼠P388D1细胞中纯化microRNA回收量的比较

 

从人和大鼠血浆中回收游离Ago结合microRNA

 

  通过定量PCR法(miR-92a量)比较使用本产品和原产品(microRNAIsolation Kit, Human Ago2或Mouse Ago2)从人和大鼠血浆中中获取的microRNA量。结果表明,在同等条件下,使用本产品可获得更多的microRNA。(图4、图5)

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     图4.人血浆中纯化microRNA回收量的比较                  图5.大鼠血浆中纯化microRNA回收量的比较

 

从各种动物细胞株中回收microRNA

 

  通过定量PCR法(miR-92a量)测量使用MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Human Ago2、Mouse Ago2、Ago1-4从2×106 cells的K562细胞(人)、COS-7细胞(猴)、MDCK细胞(狗)、P388D1细胞(小鼠)、SCC-131细胞(大鼠)中获取的免疫沉淀RNA片段中microRNA量和使用ISOGEN®  从各种细胞中获取的total RNA片段中microRNA量。比较各免疫沉淀RNA片段中所含miR-92a 量和totalRNA片段中所含miR-92a量的相对值可知,本产品可在全部的细胞种类中获取microRNA。(图6)

 

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图6.从各种细胞中获取的microRNA量的比较

 

 

MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Protein G 实验案例

 

从人和小鼠细胞株中回收microRNA(与原产品的比较)

 

  通过定量PCR法(miR-92a量)比较在使用本产品(MagCapture™ microRNA Isolation Kit, ProteinG)和抗Ago1抗体(2A7)、抗人Ago2抗体(4G8)、抗人Ago3抗体(1C12)从人K562细胞(1×10cells)中获得的microRNA量以及使用原产品(microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1、Human Ago2、Human Ago3)获得的microRNA量(图1,2,3)。此外,通过定量PCR法(miR-92a量)比较在使用本产品和抗小鼠Ago2抗体(2D4)从小鼠P388D1细胞(2×107 cells)中获得的microRNA量以及使用原产品(microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2)获得的microRNA量(图4)。结果表明,本产品和任意抗Ago抗体组合使用,获得的microRNA量要比原产品多。

 

从人和小鼠细胞株中回收各种Ago蛋白质结合microRNA

 

  通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和定量PCR法(miR-92a量)研究在使用本产品和抗Ago1抗体(2A7)、抗人Ago3抗体(1C12)、抗Ago4抗体(2G7)从人K562細胞(1×107cells)中获得的microRNA量(图5)。此外,通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和定量PCR法(miR-92a量)研究在使用本产品和抗Ago1抗体(2A7)、抗小鼠Ago2抗体(2D4)、抗小鼠Ago3抗体(S09)、抗Ago4抗体(2G7)从小鼠P388D1细胞中获得的microRNA量(图6)。结果表明,本产品和任意抗Ago抗体组合使用,可获得各种Ago蛋白结合microRNA。

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图1. 抗Ago3抗体固定时microRNA回收量的比较

本产品:使用抗Ago1抗体(2A7)

原产品:microRNA Isolation Kit, Human、Mouse Ago1

(291-70201)

图2. 人Ago2抗体固定时microRNA回收量的比较

本产品:使用抗人Ago2抗体(4G8)

原产品:microRNA Isolation Kit, Human Ago2

(292-66701)

MagCapture™ microRNA分离试剂盒系列 MagCapture™ microRNA Isolation Kit 系列

MagCapture™ microRNA分离试剂盒系列 MagCapture™ microRNA Isolation Kit 系列

图3. 人Ago3抗体固定时microRNA回收量的比较

本产品:使用抗人Ago3抗体(1C12)

原产品:microRNA Isolation Kit, Human Ago3

(297-70301)

图4. 小鼠Ago2抗体固定时microRNA回收量的比较

本产品:使用抗小鼠Ago2抗体(2D4)

原产品:microRNA Isolation Kit, Human、Mouse Ago2

(292-67301)

 

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图5. 从人K562细胞中纯化的microRNA回收量的比较和银染色检验

 

MagCapture™ microRNA分离试剂盒系列 MagCapture™ microRNA Isolation Kit 系列

图6. 从小鼠P388D1细胞中纯化的microRNA回收量的比较和银染色检验 

 

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产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
293-74801 MagCapture™microRNA分离试剂盒,Ago1-4
MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Ago1-4
10次
299-74401 MagCapture™microRNA分离试剂盒,蛋白G
MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Protein G
20次
295-74001 MagCapture™microRNA分离试剂盒,人Ago2
MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Human Ago2
10次
297-74201 MagCapture™microRNA分离试剂盒,小鼠Ago2
MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2
10次

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